기계적 세포 신장 생물반응기를 이용한 3D 콜라겐 내장형 A549/MRC-5 폐포 오가노이드 생성

요약

이 프로토콜은 세포외 기질 하이드로겔 스캐폴드 위에서 A549 치포 상피세포와 MRC-5 폐 섬유아세포로부터 오가노이드를 생성한 후, 3D 콜라겐 겔에 삽입하고 세포 신장 바이오리액터를 이용한 기계적 변형에 노출되어 폐포 기계생물학을 연구하는 과정을 설명합니다.

초록

호흡 역학과 기계적 긴장이 폐포 생물학에서 중요한 역할을 하지만, 호흡기 질환의 발병 기전에는 종종 간과됩니다. 이 격차를 해소하기 위해, 우리는 폐포 상피세포-섬유아세포 오가노이드에 세포 신장 바이오반응기를 이용해 제어된 기계적 변형을 가하는 오르가노이드 모델을 개발했습니다. 이 플랫폼은 치포 조직의 공간적 조직과 다세포 복잡성을 재현하며, 세포-세포 간 소통과 기계전형성이 건강과 질병에서 조직 구조와 기능에 어떤 영향을 미치는지 연구할 수 있게 합니다. 이 프로토콜에서는 기저막 세포외기질 하이드로겔에서 A549 폐포상피세포주와 MRC-5 폐섬유아세포 세포주를 이용해 상피-섬유아세포 오가노이드를 생성하고 배양하는 방법을 설명합니다. 오가노이드는 비효소적으로 분리되어 바이오리액터의 특수 플레이트에 3D 콜라겐 젤에 삽입됩니다. 호흡 악화에서 관찰되는 병리적 호흡 패턴을 모방하기 위해 등축 변형을 적용하는 절차를 개략적으로 설명합니다. 마지막으로, 세포 특이적 마커에 대한 면역염색과 면역 매개체 방출을 프로파일링하는 면역분석법을 포함한 표준 특성화 워크플로우를 제시합니다. 이러한 분석들은 오르가노이드 구조와 기능 평가를 지원합니다. 이 프로토콜은 기계적 스트레스 하에서 폐포 생물학을 연구하기 위한 사용자 친화적이고 재현 가능하며 유연한 플랫폼을 제공하며, 다양한 실험 목표를 달성하고 폐질환 기전 연구를 진전시키기 위해 쉽게 수정 가능한 매개변수를 제공합니다.

서론

폐포는 호흡기계의 말단주머니로, 가스 교환의 주요 부위 역할을 합니다. 이들은 주로 가스 교환, 면역 기능, 구조적 완전성 유지를 담당하는 폐포형 I형 및 II형 상피세포와 세포 내 섬유아세포로 구성되어 세포외기질 항상성¹을 유지합니다. 이들 및 기타 거주 세포들은 호흡 중 주기적 신장 및 전단 스트레스에 지속적으로 노출됩니다². 이러한 기계적 신호는 세포 구조, 분화 및 의사소통에 영향을 미치는 생화학적 신호로 변환됩니다^.

병리학적 기계적 긴장은 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)과 같은 폐 질환에서 관찰됩니다. COPD는 실질이 파괴되고 만성 염증이 있으며, 작은 기도의 좁아짐이 특징인 진행성 질환^입니다. 이 질환에서는 폐포벽 파괴, 엘라스틴 손실, 섬유화로 인한 세포외기질(ECM) 재형성, 만성 염증이 복합적으로 폐의 구조적 손상 능력을 저해합니다 ^5,6. 이로 인해 호흡 중 이질적이고 비정상적인 폐포 변형이 발생하며, 질병 재발 ^7,8 시 더욱 악화됩니다.

폐포 생물학을 연구하기 위해 여러 시험관 내 접근법이 사용되었지만, 각각은 주목할 만한 한계가 있습니다. 2차원 공동 배양 시스템은 세포 간 상호작용 연구를 용이하게 하지만, 조직 구조나 세포외 기질 역학을 포착하지 못해 생리학적 중요성을 줄여줍니다. 정적인 3D 배양은 구조적 조직과 매트릭스 상호작용을 더 잘 보존하지만, 생체 내에 존재하는 역동적 기계적 단서는 포함하지 않습니다. 마이크로플루이딕 및 오르간 온-칩 플랫폼은 유체 흐름과 기계적 변형을 모방하여 높은 생리학적 충실도를 제공하지만, 기술적으로 복잡하고 처리량이 적으며^{비용이 많이 듭}니다. 반면, 여기서 제시된 3D 기계적 변형 오가노이드 모델은 구조적 복잡성, 세포 이질성, 그리고 기존 모델에서 종종 간과되는 측면인 제어된 기계적 자극을 재현 가능하고 확장 가능한 플랫폼 내에서 결합하여 생리학적 관련성과 실험적 접근성의 균형을 제공합니다^10,11.

COPD와 같은 질병에 기여하는 복잡한 메커니즘을 이해하고 치료 표적을 발견하기 위해 질병 모델이 구축되었습니다. 기계적 긴장은 중요함에도 불구하고, COPD와 같은 폐 질환의 기전과 병인기를 연구하는 시험관 내 폐포 모델에서는 종종 간과됩니다. 이 격차를 해결하기 위해, 우리는 기저 매트릭스에서 폐포 상피세포-섬유아세포 오가노이드를 배양하고, 이를 3D 콜라겐 겔에 채취 및 삽입하며, 세포 신장 바이오리액터를 이용한 주기적 기계적 변형을 가하고, 주요 구조적 및 기능적 결과를 평가하는 방법을 제시합니다. 이 3D 기계적 오가노이드 모델은 세포 상호작용과 인간 치포 지위의 미세환경을 더 잘 포착하여 상피-간엽 교차 대화 연구를 가능하게 합니다^.

생물반응기는 조정 가능한 매개변수로 정축 변형을 가하여 최대 30% 신장과 최대 5Hz 주파수를 가능하게 하여 생리적 및 병리학적 조건을 모두 모델링합니다. 본 연구에서는 0.4Hz에서 18% 변형을 24시간 동안 가해 병리적 호흡을 모방하는 콜라겐-I 하이드로겔에 내장된 오르가노이드 모델을 생성했습니다. 우리는 세포 특이 마커에 대한 면역염색과 기계적 변형 후 면역 매개체 방출을 정량화하는 면역분석법을 포함하는 표준화된 특성화 워크플로우를 구축했습니다. 본 연구의 목표는 기계적 스트레스 하에서 폐포 생물학을 연구할 수 있도록 생리학적으로 관련성 있고 사용자 친화적이며 적응력 있는 플랫폼을 제공하는 것입니다.

프로토콜

모든 단계는 무균 기법, 멸균 재료, 시약을 필요로 하며, 인원의 생물유해 물질 노출과 배양 오염을 줄이기 위해 생물안전 캐비닛 내에서 수행됩니다. 시약과 사용된 장비는 재료표에 나열되어 있습니다.

1. 세포 배양 및 세포 재고 형성

1. 오가노이드 형성 전, 표준 조직 배양 플라스틱 플라스크(T75 cm²)에서 A549와 MRC-5 세포를 약 70%-80% 합류율로 배양하였으며, Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)에 10% 태아 소 혈청(FBS)과 1% 페니실린-스트렙토마이신을 보충하여 약 70%-80% 합류율을 이른다.
2. A549와 MRC-5 모두 2 x 10⁴ cells/^{cm 2}에 씨앗을 주며, 총 부피는 10 mL 완전 DMEM입니다. 37°C에서 5%_CO2 를 사용하여 약 70%-80% 융합 지점에 도달할 때까지 배양 셀을 사용합니다.
3. 최적의 성장 조건을 위해 배양지를 48시간마다 교체하세요.
4. 70%-80% 합류할 때 플라스크에서 모든 배지를 흡인하여 흡인하고, 따뜻한 인산염 완충 생리식염수(PBS)로 한 번 세척한 후 4mL의 트립신-EDTA를 추가하여 하위배양합니다.
5. 37°C에서 5분간 배양한 후 밝시야 현미경으로 플라스크를 시각화하여 완전히 분리되도록 하세요. 완전 DMEM 4mL를 첨가하여 중화합니다.
6. 트리판 블루 배제 세기와 같은 선택한 기법을 사용하여 세포 수를 세어보세요.
7. 셀 현탁액을 200 x g 에서 5분간 원심분리합니다.
8. 상정액을 흡입하여 원뿔 튜브 바닥에 세포 펠릿을 남기세요. 세포 펠릿을 적절한 부피의 완전한 DMEM에 부드럽게 삼각하여 재현탁합니다.
9. 냉동 시에는 10% DMSO가 포함된 완전한 배지에 재현탁하여 1 x 10⁶ 세포/mL를 만듭니다. 오가노이드 형성을 위해서는 1 x 10⁶ 세포/mL를 얻기 위해 재현탁하세요.

2. 3차원 폐포 상피세포-섬유아세포 오가노이드 모델의 성숙 확립 및 특성 분석

참고: 지하실 매트릭스는 하룻밤 얼음 위에 해동하고 이 과정 동안 얼음 위에 보관해야 합니다. 더 높은 온도는 매트릭스의 굳어짐을 유발할 수 있습니다.

1. 지하실 매트릭스와 고급 DMEM을 2:3 비율로 혼합해 준비하세요. 이 용액을 24웰 플레이트의 각 웰에 300 μL씩 추가하여 각 웰 바닥이 고르게 코팅되도록 합니다. 매트릭스가 굳어질 때까지 37°C에서 1시간 동안 가습 인큐베이터에서 배양합니다.
2. 완전한 DMEM에 5% 기저 매트릭스 용액을 준비하여 오가노이드의 배양지로 사용합니다. 각 우물마다 60 μL 바닥 매트릭스를 1,140 μL 완전한 DMEM에 희석하여 1.2 mL의 용액을 만듭니다.
3. 기저 매트릭스 혼합물이 고화되는 동안 200 μL 5% 기저 기질 용액을 200 μL에 30만 개의 A549 셀과 30,000 개의 MRC-5 셀을 혼합하여 완전한 DMEM 과정을 설명합니다.
4. 2:3 베이스먼트 혼합물이 고체화되면, A549/MRC-5 혼합물 200 μL 피펫을 젤 매트릭스에 주입한 후, 24웰 플레이트를 37 °C, 5% CO₂에서 21일간 배양하여 폐포 오가노이드의 성장과 분화를 돕습니다.
5. 다음 48시간 동안 광학 현미경으로 배양물을 시각화하세요. 세포들은 이 기간 내에 모여야 합니다.
6. 5% 기저 매트릭스/DMEM 용액을 48시간마다 200 μL 신선 5% 배지로 교체하세요. 하이드로겔에 내장된 오가노이드를 방해하지 않으려면, 흡입 전에 오래된 용액이 웰 벽을 따라 모이도록 플레이트를 부드럽게 기울이세요.
7. 성숙 3, 9, 21일째에 오가노이드를 10배 대관렌즈 배율로 촬영하고 각 웰의 대표적인 이미지 또는 시야각을 네 장씩 촬영합니다. 3일, 9일, 21일차의 초기 오가노이드 형태를 대표하는 이미지는 그림 1에 나와 있습니다.
8. 각 시야각마다 지름 50 μm보다 큰 모든 오가노이드를 세어보라. 시야의 알려진 면적을 이용해, 24웰 판 표면적이 1.9 cm²라고 가정할 때, 각 필드당 평균 개수에서 웰당 평균 총 오르가노이드 수를 외삽합니다.
   참고: 이러한 분석은 Fiji¹³과 같은 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 수행할 수 있습니다.
9. 오가노이드의 평균 직경과 면적도 측정하여 배양 내 오가노이드의 성장 특성에 대한 정량적 정보를 얻을 수 있습니다.

3. 3차원 폐포 상피세포 섬유아세포 오가노이드 채취

참고: 오가노이드 채취 모든 단계는 얼음 위에서 수행해야 합니다.

1. 21일 후 상정액을 흡인하고 약 1-2mL의 얼음처럼 차가운 PBS로 부드럽게 세척합니다.
2. 1-2mL의 차가운 오가노이드 수확액을 추가하고, 2-8°C에서 적당한 흔들면서 30-90분간 배양합니다.
   참고: 오가노이드가 우물 바닥에 떠 있는 것이 보일 경우 부화를 중단하세요.
3. 밝시야 현미경으로 해리 상태를 모니터링하세요. 해리가 완전한 것으로 간주되는데, 우물 바닥의 기저 매트릭스가 더 이상 보이지 않고 오가노이드가 현탁 상태에 있을 때입니다. 세포 스크레이퍼를 사용해 오가노이드 기저 기질 하이드로겔을 부드럽게 떼어내어 과정을 가속화할 수 있습니다.
4. 모든 우물의 내용을 얼음 위에 50mL 원뿔형 튜브에 모으세요.
5. 500 × g , 2-8 °C에서 5분간 원심분리기. 상정액을 흡인하고, 오가노이드 펠릿을 얼음 차가운 PBS 1-2mL로 세척한 후 다시 원심분리하여 펠릿을 얻습니다. PBS를 흡입하세요.

4. 3D 콜라겐 내재 폐포섬유아세포 오가노이드 및 기계적 변형 적용

참고: 세포 신장 바이오반응기와 호환되는 폼 앵커가 장착된 원형 폼 배양판을 사용하세요. 이 프로토콜에 사용된 배양 플레이트의 성장 면적은 ~6.6 cm^²입니다.

1. 2 mg/mL 콜라겐 I 젤로 작동하는 용액을 준비하세요. 용액에는 1× PBS, 11.4 mM NaOH, 2 mg/mL 콜라겐 I가 포함되어야 하며, 최종 부피는 멸균수로 조절해야 합니다. 원형 폼 6웰 플레이트의 웰마다 이 콜라겐 I 용액 2mL를 준비하세요.
2. 플레이트 가장자리의 폼 앵커에 2 mg/mL 콜라겐 I 용액 1mL를 첨가하여 완전한 포화 상태를 보장합니다.
   참고: 폼 앵커는 적절한 접착을 위해 콜라겐 I 용액으로 충분히 적셔야 합니다. 불완전한 포화 상태는 기계적 변형 시 콜라겐 젤이 떨어져 목표 목표에 비해 효과적인 변형이 감소할 수 있습니다.
3. 오가노이드 펠릿을 2 mg/mL 양 쥐 꼬리 콜라겐 6 mL에 재현탁하고, 1 mL의 현탁액을 6웰 원형 폼 플레이트 중앙에 피펫 주입하여 오가노이드 주입 콜라겐 혼합물이 원형 폼 앵커에 처음 첨가된 오르가노이드 프리 콜라겐과 혼합되도록 합니다.
   참고: 오가노이드 현탁액을 각 웰에 추가할 때 기포를 발생시키지 마세요.
4. 접시를 인큐베이터(37°C, 5%_CO2)에 넣어 1시간 동안 중합시킵니다_. 중합 후 젤은 흐릿하게 보여야 합니다.
5. 3D 콜라겐 임베딩된 A549/MRC5 오가노이드 위에 완전한 DMEM 2mL를 추가한 후 판을 인큐베이터에 24시간 동안 보관합니다.
6. 배양지를 DMEM + 1% FBS로 교체하고, 기계적 변형 노출 전에 하룻밤 배양합니다.

5. 세포 신장 생물반응기 설치 및 기계적 변형 노출

1. 베이스플레이트의 각 웰에 로딩 스테이션을 삽입하세요. 이 부위들은 지름 25mm의 6개의 로딩 포스트를 포함하고 있어, 조직 열차 플레이트의 유연한 막이 변형되어 3D 배양물을 정축 변형에 노출시킬 수 있게 합니다.
2. 로딩 포스트 상단에 얇은 실리콘 그리스 층을 발라주세요.
3. 각 6웰 플레이트 하단에 빨간 가스켓을 설치하세요.
4. 준비된 플레이트를 적재 기둥 위의 베이스 플레이트에 삽입하세요.
5. 이 장치를 37°C, 5%_CO2 가습 인큐베이터에 옮기고, 퀵 디스커운트 피팅을 베이스플레이트에 연결하세요. 5.1부터 5.6까지 단계를 반복하되, 연결을 생략하여 부담이 없는 대조군을 만듭니다.
   참고: 선택적으로 튜브 밀봉 마개를 적용할 수 있는데, 이는 단일 BioFlex 웰 바닥에 진공압 가하는 것을 방지하여 동일한 플레이트에서 비변형 대조 배양을 생성할 수 있게 합니다.
6. 플렉시글라스 시트로 덮고 5~10파운드의 무게를 더해 단단히 밀착되도록 하세요.
7. 공기 압축기를 켜고 압축기의 배출 밸브를 열어보세요.
8. 진공 압력 펌프를 켜고 진공 탱크 유출구에 연결된 압력 저장소 밸브를 엽니다. 진공 압력이 약 90 kPa 정도인지 확인하세요.
9. 바이오리액터 컨트롤러 근처에 위치한 공기 압축기에서 유입 밸브를 엽니다. 통풍구 압력을 15 PSI를 넘지 않도록 조절하세요.
10. 온보드 소프트웨어를 실행하고 원하는 순환 기계적 변형 매개변수를 설정하세요. 본 연구에서는 0.4Hz에서 24시간 동안 18% 변형 진폭 요법을 사용했습니다. 이를 구성하려면 새로운 레전법을 만들고 최소 신장을 0%, 최대 신장을 18%로 설정한 후 프로토콜을 시작하세요.
11. 스트레인 세션 내내 움직임이 보이는지 플레이트와 멤브레인을 관찰하세요. 막이 적재 포스트 주변에서 변형되어야 합니다.
12. 주기적으로 물 차단기에 수분이 있는지 점검하고, 컴퓨터 화면을 통해 실행 시간, 진행 상황, 그리고 적절한 변형 형태를 확인하세요.
13. 균열 요법이 완료되면 베이스플레이트 조립체를 분리하고, 균열된 배양물을 24시간 배양한 후 후속 특성 분석 작업을 진행합니다.
14. 전원을 끄고 시스템을 작동 순서대로 분해합니다: 공기 압축기 유입 밸브를 닫거나 끄고, 그 다음 압력 저장소 밸브, 진공 압력 펌프, 공기 압축기 유출 밸브, 마지막으로 공기 압축기를 순서대로 끕니다.
15. 기계적 압력에 노출된 후 24시간 인큐베이션 후 상정액을 수집합니다. 사용 전까지 -80 °C에서 보관하세요.

6. 면역형광 을 통한 오가노이드의 형태학적 특성

1. 오가노이드-콜라겐 젤 모델을 1 mL PBS를 부드럽게 첨가하여 상온에서 5분간 배양하여 PBS로 세 번 세척합니다.
2. PBS를 조심스럽게 흡입하고 세척 과정을 총 세 번 반복하세요.
3. 4% 파라포름알데히드 2mL를 4°C에서 1시간 동안 배양하여 모델을 고정합니다.
4. 위에서 설명한 대로 PBS로 모델을 세 번 세척하세요.
5. 유연한 웰에 콜라겐 젤이 부착된 원형 폼 앵커를 부드럽게 자른 후 페트리 접시에 넣으세요.
6. 0.1% Triton X-100 2mL를 PBS에 넣어 실온에서 5분간 배양하여 오가노이드를 투과시킵니다.
7. 모델을 PBS로 세 번 세척하세요.
8. 5% 소 혈청 알부민(BSA) 3mL를 상온에서 1시간 동안 PBS에서 배양하여 비특이적 결합을 차단합니다. 차단액을 제거하고 다음 단계로 넘어가세요.
9. 모델을 4°C에서 하룻밤 동안 염색 혼합물에 접합시킨 Antihuman zonula occludens-1(ZO-1)과 Alexa Fluor 594를 1:1000 희석, 팔로이딘과 Alexa Fluor 488을 1:1000 희석으로 결합한 염색 혼합물과 핵 염색제인 DAPI를 1:4000 희석으로 인큐베이팅합니다. 희석제는 1% BSA 1mL를 PBS에 넣은 것입니다. 4 °C에서 배양하기 전에 플레이트 가장자리를 테이프로 붙이세요.
10. 다음 날 착색 칵테일 용액을 흡입하고 모델을 PBS로 세 번 세척하세요.
11. 공초점 현미경으로 이미지를 찍고, 대표적인 오가노이드의 Z-스택을 40배 대관렌즈로 5 μm 크기로 촬영합니다.
12. 피지 이미지 분석 소프트웨어를 사용해 형광 강도를 분석하세요. 오르가노이드 면적에 따라 평균 형광 강도를 정규화하여 다양한 환경 조건에서 정확한 비교를 할 수 있도록 합니다.

7. ELISA 및 락테이트 탈수소효소(LDH) 세포독성 분석법을 통한 오가노이드의 기능적 특성 규명

1. 상청액을 얼음 위에서 해동하고, 제조사 프로토콜에 따라 상업적으로 판매되는 ELISA 키트를 사용해 인터루킨-6(IL-6) 및 인터루킨-8(IL-8) 분비를 평가합니다.
2. 시판 중인 LDH 흡수 분석법을 사용하여 세포독성 지표인 LDH 방출을 평가합니다.
3. 0.5 μg에서 0.5 ng 사이의 반 로그 농도에서 재조합 LDH 단백질을 사용하여 표준 곡선을 생성합니다. 각 샘플에서 표준 곡선을 사용하여 LDH 농도를 보간합니다.

8. 선택사항: RNA 또는 단백질 분석을 위한 샘플 분리

1. 면역형광 염색을 위해 4% 파라포름알데히드를 첨가하는 대신, 10 μL 용량의 β-머캅토에탄올 함유 RLT 완충액을 첨가합니다.
2. 모델당 300 μL을 사용하고, 피펫을 위아래로 움직여 세포를 완전히 분리하고 용해합니다.
3. 용해액을 RNase 없는 미세원심분리관으로 옮기고, 튜브를 드라이아이스 위에 올려 빠르게 얼리세요. 장기 보관을 위해 -80°C로 옮겨.
   참고: 또는 RIPA 완충제를 사용하여 단백질 추출을 할 수 있습니다: 50 mM Tris-HCl, pH 7.4-7.5; 150 mM NaCl; 1% NP-40 또는 Triton X-100; 0.5% 디옥시콜레이트 나트륨; 탈이온수에서는 0.1% SDS. 이미 만들어진 RIPA 버퍼도 상업적으로 판매되고 있습니다.
4. 모델당 200 μL을 추가한 후 얼음 위에 5분간 돌린 후 용해액을 수집합니다.
5. 15,000 x g 에서 4°C에서 10분간 돌려 세포 이물질을 제거하고, 장기 보관을 위해 -80°C로 옮깁니다.

결과

세포주 유래 폐포-섬유아세포 오가노이드를 구축하고 21일 이상 배양하였습니다. 이 기간 동안 형태학적 변화가 관찰되었으며, 3일, 9일, 21일에 오가노이드 수, 면적, 직경을 평가하여 성장과 발달을 모니터링하였다. 우물당 평균 오가노이드 수는 3일차에 비해 9일차와 21일차에 유의하게 감소했습니다(그림 2A). 반면, 평균 오가노이드 면적과 직경은 9일차와 21일차에 크게 증가하여 지속적인 성장과 확장을 나타냈다(그림 2B,C)¹⁰.

그림 3A,B는 각각 정적(비긴장) 및 긴장 상태에서 치포상피-섬유아세포 오가노이드 모델의 대표적인 공초점 이미지를 보여주며,...

토론

3차원(3D) 폐포 상피세포-섬유아세포 오가노이드는 기계적 스트레스 하에서 폐 구조와 기능을 모델링하는 데 생리학적으로 매우 중요한 플랫폼을 제공합니다. 2D 또는 3D 공동 배양 시스템과 달리, 오가노이드는 공간적 조직, 상피-간엽 교차 반응, 세포외기질(ECM) 상호작용 등 생체 내 폐 미세환경의 중요한 특징을 보존합니다¹⁴. 기계적 긴장은 천식, COPD, 인공호흡기 유발 폐 손상과 같은 질환에서 기도 재형성에 중심적인 역할을 하며, 반복적인 기관지 수축이나 주기적 과팽창으로 인해 상피세포와 기질 세포가 비정상적인 인장력에 노출되는 경우가 있습니다¹⁵. 이전 연구¹⁰에서는 0.4Hz의 18% 평축 변형을 24시간 동안 폐포 상피-섬유아세포 오가노이드에 적용하여, 상피 밀접합 완전성 상실(ZO-1 발현 감소), 세포골격 재...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
1.5 mL 마이크로 원심분리기 튜브	에펜도르프	0030 125.215
15 mL 원뿔형 튜브	피셔 사이언티브	14-959-53A
16% 파라포름알데히드	써모피셔 사이언티브	28908
2-머캅토에탄올	밀리포어 시그마	M3148
50 mL 원뿔관	피셔 사이언티브	14-432-22
6웰(유연한 멤브레인) 티슈 트레인 원형 폼 플레이트	플렉셀 인터내셔널	TTCF-5001
A549 셀	미국 유형 문화 컬렉션(ATCC)	CCL-171
공기 압축기	캘리포니아 에어 툴즈	10020DSPCAD
소 혈청 알부민	밀리포어 시그마	A9418
버퍼 RLT	치아겐	79216
CO2 인큐베이터	PHCBI	MCO-170AICUVL-PA
컬트렉스 오가노이드 수확 용액	바이오-테크네	3700-100-01
CyQUANT LDH 세포독성 검사 키트	써모피셔 사이언티브	C20300
DAPI (4′,6-디아미디노-2-페닐린돌)	써모피셔 사이언티브	D1306
디메틸 설폭사이드	시그마 올드리치	D2650-100ML
둘벡코 수정된 독수리' s 매체 (DMEM)	써모피셔 사이언티브	11965092
EVOS XL 코어 현미경	써모피셔 사이언티브	AMEX1200
태아 소 혈청(FBS)	써모피셔 사이언티브	A5209501
피지 이미지 분석 소프트웨어	국립보건원(NIH)
Flexcell FX-6000 장력 및 조직 트레인 시스템 (Flexlink FX-6000 장력 조절기, 압력 저장소, 베이스플레이트, 아크릴 창문, 25mm 직경 원통형 적재 스테이션, 워터 트랩, FlexSoft FX-6000 V1.0 소프트웨어, 다양한 튜빙 포함)	플렉셀 인터내셔널	FX6000T
인간 인터루킨-6 듀오셋 ELISA	바이오-테크네	DY206
인간 인터루킨-8 듀오셋 ELISA	바이오-테크네	DY208
라이카 DMi8 공초점 현미경	라이카 마이크로시스템즈	11889122
마트리젤 저저막 매트릭스	코닝	356237
MRC-5 세포	ATCC	CCL-185
파라필름	밀리포어 시그마	P7793
페니실린/스트렙토마이신 (펜/연쇄상구균)	써모피셔 사이언티브	15140122
팔로이딘 표지 탐침, 알렉사 플루어 488	써모피셔 사이언티브	A12379
인산염 완충 식염수 (PBS)	써모피셔 사이언티브	14190-144
쥐꼬리 콜라겐 I	시그마-올드리치	C3867
재조합 인간 락테이트 탈수소효소 단백질(활성 성분)	앱캠	AB93699
RIPA 용해 완충제	써모피셔 사이언티브	89901
RNase 프리 마이크로퓨지 튜브	써모피셔 사이언티브	AM12400
T75 cm2 배양 플라스크	그라이너	658175
트리톤 X-100	시그마-올드리치	X100-5ML
ZO-1 단클론 항체(ZO1-1A12), Alexa Fluor 594	써모피셔 사이언티브	339194