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방법 논문

종양 혈관신생의 정량적 단백질체학 분석을 위한 인간 교모종 조직에서 신생혈관 조직 준비

513 조회수

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DOI:

10.3791/69547

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2026년 3월 20일

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1Shandong Provincial Key Laboratory of Precision Oncology, Shandong Cancer Hospital and Institute, Shandong First Medical University & Shandong Academy of Medical Science, 2Shandong Provincial Key Medical and Health Laboratory of Ovarian Cancer Multiomics, & Jinan Key Laboratory of Cancer Multiomics, Shandong First Medical University & Shandong Academy of Medical Science, 3School of Medicine, Wayne State University, 4Department of Pathology, The Second Xiangya Hospital, Central South University, 5Hunan Clinical Medical Research Center for Cancer Pathogenic Genes Testing and Diagnosis,, 6Department of The 1st General Surgery, The Third Xiangya Hospital, Central South University

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 레이저 캡처 미세해부를 이용해 교모세포종 샘플로부터 충분한 고품질 신생혈관 조직을 성공적으로 준비하여 종양 혈관형성의 정량적 단백질체학 분석을 수행하여, 전통적으로 주로 혈관형성 인자에 초점을 맞춘 연구의 한계를 극복하고 교세포종 혈관신생의 대규모 단백질체학 프로파일을 제공하였습니다.

초록

교모세포종은 중추신경계의 원발성 악성 종양으로, 발생률과 사망률이 유의미합니다. 종양 혈관형성은 교모세포종 병태생리의 특징이며 종양 환경에서 중요한 사건입니다. 종양 신생혈관화의 이상한 구조는 영양 공급원이자 종양 세포가 혈류로 침범할 수 있게 하는 전이성 관문이라는 두 가지 역할을 합니다. 항혈관신생 치료는 암 분야에서 뜨거운 이슈입니다. 이전 연구의 대부분은 종양 혈관형성의 활성화 인자와 억제 인자에 초점을 맞추었으며; 그러나 이는 종양 혈관신생을 매우 제한적인 범위에서만 명확히 할 수 있습니다. 비정상적인 단백질 발현 또는 번역 후 변형은 교모종 내 혈관의 비정상적인 형태에 기여합니다. 이 프로토콜은 레이저 캡처 미세해부(LCM)를 사용하여 교모세포종 조직에서 적절한 양의 신생혈관 조직을 분리 및 정제했으며, 이는 동위원소 표지된 정량적 단백질체학 분석에 사용되어 교세포종 신혈관 조직에서 대조군과 비교하여 차이가 있는 단백질을 식별하는 데 사용되었습니다. 이 데이터는 종양 혈관형성의 병리학적 기전을 규명하고, 항혈관형성 치료 표적을 발견하며, 종양 혈관형성 기반 바이오마커를 구축하는 데 중요한 과학적 기초를 제공합니다.

서론

교모종은 신경세포에 구조적·대사적 지원을 제공하는 교세포에서 유래하는 매우 이질적인 중추신경계(CNS) 종양으로,조직학적으로 아형으로 분류됩니다: 성상세포종, 희돌기교모종, 그리고 방관막종2. WHO 등급 체계에 따르면, 교모세포종 1등급과 II등급은 저등급 교모종(LGG)으로, 일반적으로 성장 속도가 느리고 장기적으로 안정성이 잠재적이며 해부학적 위치에 따라 수술적 절제가 가능한 경우가 많습니다. 반면, III급과 IV급은 고등급 교모종(HGG)으로, 주로 미분화이며 악성이며 매우 침습적인 행동과 예후가 좋지 않습니다. 현재의 치료법은 여전히 제한적이고 대체로 효과가 없습니다; 최대 안전 절제와 수술 후 방사선 치료/화학요법의 병행은 예후를 중간 정도 개선하지만, 종양의 확산성 침윤성 성장과 명확하지 않은 경계로 인해 근본적 절제를 막는 상당한 한계와 독성이 여전히 존재합니다 4,5. 인간 교모종, 특히 고등급 교모종은 혈관이 매우 많은 악성 종양으로, 성장, 증식 및 침범은 비정상적인 신생혈관화에 크게 의존하며, 이는 교모종 악성종양의 중요한 특징입니다 6,7. 표적 종양 혈관신생 연구는 치료적 돌파구에 있어 상당한 과학적 가치를 지니고 있습니다.

혈관신생은 기본적으로 특정 자극 하에서 내피세포 증식, 이동, 분화를 포함하며, 연구는 조절 인자에 초점을 맞추고 있습니다: (i) 유도인자(혈관 내피 성장 인자(VEGF)8, 바소린(VASN)9, 저산소 유발 인자 1(HIF1)10, 변형 성장 인자 β (TGF-β)11, 내피칸12, 혈소판 유래 성장 인자(PDGF)13, 표피 성장 인자(EGF)14; 그리고 (ii) 안지오스타틴15, 엔도스타틴16, 혈소판 활성화 인자 수용체-1(TSP-1)17, 그리고 조직 금속단백효소 억제제(TIMP)18. 1/2/3상 뇌종양 임상시험에서 대부분의 항혈관신생제는 VEGF 신호전달을 표적으로 삼는데, 이는 혈관신생에서 중심적 역할을 하는 VEGF 신호전달을 대표하며, 이는 VEGF 차단을 통해 신생혈관 형성을 억제하는 단클론 항체인 베바시주맙(bevacizumab)입니다. 그러나 최근 2/3상 임상시험에서는 베바시주맙과 로무스틴을 함께 복용하는 진행성 교모세포종 환자에서 로무스틴 단독 복용과 비교하여 전체 생존율에 유의미한 이점이 없음을 보여주었습니다 19,20,21,22. 중요한 점은 항VEGF 치료가 혈관 이상을 개선하지만, 직접적인 종양 세포독성 없이 혈관신생을 억제할 뿐이며 치료 내성을 유발할 수 있다는 점입니다. 따라서 단일 또는 소수의 혈관신생 조절제를 표적으로 삼는 것은 근본적인 치료법을 달성하지 못합니다; 효과적인 전략은 혈관신생 억제와 혈관 경로를 통한 종양 침윤 및 전이 차단을 동시에 요구합니다. 교모세포종에서 단백질의 진단 및 예후 가치는 잘 입증되어 있지만, 악성 교모세포종 치료는 수십 년간 제한적인 진전을 보였습니다.

프로테오믹스는 질량분석법(MS) 기반 기법(상향식(TDP)과 하향식(BUP) 접근법을 통해 생물 샘플 내 모든 단백질, 발현 프로필, 번역 후 변형(PTM), 상호작용을 전역적으로 분석할 수 있습니다. 고처리량 MS는 한 번에 수만 개의 단백질을 식별할 수 있어 종양 기전 연구와 치료 표적 식별에 필수적입니다. 단백질 풍부도와 PTM은 교세포종 조직 과 혈액 및 그 유도체23, 24, 25, 뇌척수액26, 소변27과 같은 액체 생검에서 확인할 수 있습니다. 종양 혈관에서는 비정상적인 단백질 발현과 PTM이 병리적 혈관 변화를 유발합니다. 교세포종 신혈관화의 단백질 변이는 단백질체학으로 확인될 수 있으며, 이는 교세포종 신혈관화의 신뢰할 수 있는 단백질체 프로파일링 프로토콜 개발을 촉진합니다.

하지만 신생혈관 조직은 전체 교모종 조직의 구성 요소 중 하나일 뿐입니다. 신생혈관 조직을 교세포종 조직 전체에서 분리하고 정제하는 것이 교모세포종 혈관신생의 정확한 정량적 단백질체학 분석을 위한 핵심 단계입니다. 레이저 캡처 미세해부(LCM)28,29,30,31은 신생혈관 조직을 전체 교세포종 조직에서 분리하고 정제하는 효과적인 방법입니다. 정량적 단백질체학을 위해 충분한 양의 신생혈관 조직 단백질을 얻는 것은 매우 어렵습니다. 2007년 연구팀은 LCM을 이용해 4등급 교모세포종에서 신생혈관 조직을 분리해 단백질체학 분석을 시도했으나, MS32를 가진 단백질은 단 4개만 확인되었습니다. 이후 2012년에는 LCM을 지속적으로 사용하여 4등급 교모종의 신생혈관 조직을 풍부하게 하여 정량적 단백질체학 분석을 수행했으며, MS33을 가진 단백질은 29개만 확인되었습니다. 이 두 연구는 교모세포종 혈관신생 단백질체학 연구를 통해 교모세포 혈관신생에서 매우 낮은 단백질체 처리량을 보여주는데, 이는 교모세포 혈관신생의 복잡한 단백질체 지형을 대표할 수 없습니다.

이 프로토콜은 교세포종 혈관형성의 정량적 단백질체학적 분석을 위해 충분한 양의 신혈관 단백질을 획득할 수 있는 절차를 개발하여, 종양 혈관형성의 대규모 단백질체학적 지형을 구축하였습니다. 이는 효과적인 혈관신생 기반 바이오마커 및 항혈관신생 치료 표적/약물 발견에 있어 상당한 과학적 가치를 지닙니다.

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프로토콜

이 의약서는 산둥 제1의과대학 의학윤리심사위원회(승인 번호 R202211090133)의 승인을 받았으며, 환자와 환자의 가족으로부터 사전 동의를 받았습니다. 본 연구에 사용된 교모종 샘플은 모두 중앙남부 대학교 시앙야병원 신경외과에서 신경외과 절제된 표본에서 채취했으며, 이 중 7건은 3등급 성상세포종 조직이었습니다. 정상 대조 혈관(n = 3)은 뇌 외상으로 인해 손상된 뇌 조직 내 미세혈관에서 채취한 것입니다. 모든 환자는 수술 전 방사선 치료나 화학요법을 받지 않은 첫 환자였으며, 모두 중남대학 상야병원 병리과에서 진단을 받았습니다. 샹야 병원에서 외부 압력에 의해 손상된 정상 뇌의 매우 미세한 혈관을 신경외과 수술로 제거하여 세 개의 정상 대조 혈관 조직을 얻었습니다(교모세포종 없음). 시약과 사용된 장비는 재료표에 나열되어 있습니다.

1. LCM을 이용해 신생혈관 조직을 인간 교모종 조직에서 분리하는 방법

  1. LCM 슬라이드 준비: 재사용 가능한 금속 슬라이드에 폴리에틸렌 나프탈레이트(PEN) 멤브레인을 수동으로 코팅하고, 코팅된 슬라이드는 -80°C에 보관합니다.
    참고: 미리 코팅된 금속 슬라이드를 사용해 냉동 조직 절편을 직접 부착할 예정입니다.
  2. 톨루이딘 블루 염색액(0.5%)을 준비하세요: 0.25g 톨루이딘 블루를 40mL ddH₂O에 녹입니다. 프로테아제 억제제 정제 1개를 추가하고 완전히 녹을 때까지 혼합합니다. ddH₂O로 부피를 50mL로 조절하고, 필터를 사용해 얼음 위에 보관하세요.
  3. 공정 조직: 냉동 온도(-25 °C 챔버/시료 헤드)를 유지하세요. -80 °C 저장 상태에서 교모세포종 조직을 채취하여 얼음 위에 옮기고, 여과지로 혈액을 제거한 후 적절한 조직 블록을 선택해 삽입합니다.
  4. 조직 삽입 프로토콜: 사전 냉각 시료 디스크. 임베딩 매체를 적용하고 조직 블록을 빠르게 삽입하세요. 전체 블록을 -25°C에서 10분간 냉동하여 경화시킵니다.
  5. 조직 절편 및 선별 혈관: 두께 8 μm 조직 절편. 조직 절편을 표준 슬라이드에 장착하고, 톨루이딘 블루 염색액으로 조직을 염색하며, 신생혈관 혈관을 광학 현미경으로 선별합니다.
    참고: 혈관이 발견되지 않으면 3–5개의 조직 절편을 폐기하고 신생혈관 부위가 나타날 때까지 염색 과정을 반복하세요.
  6. 준비된 LCM 슬라이드에 혈관 양성 조직 절편을 장착하기: 혈관 양성 단편을 PEN으로 코팅된 LCM 슬라이드에 옮긴 뒤, 밀봉, 라벨링, -80 °C에서 보관합니다.
  7. LCM 슬라이드 장착 조직 절편을 사전 냉각된 70% 에탄올(4 °C, 1–2분)에 고정합니다; 0.5% 톨루이딘 블루(4 °C, 30초)로 배액 및 염색; 염색을 배수하고, ddH₂O(4 °C; 두 번의 별도 세척 욕조)에서 두 번 세척한 후 배수하고, 프로테아제 억제제 용액에 배양(30초)하여 -80 °C에서 보관합니다.
  8. LCM 기기를 미리 가동하고, 30분간 예열한 후, 고체 적외선 레이저로 30분 더 예열한 후 500 μL 마이크로 원심분리기 튜브 수집 장치를 설치합니다.
  9. 조직 샘플에 장착된 LCM 슬라이스(-80°C에 보관됨)를 준비된 LCM 기기에 장착하고, 호환 소프트웨어의 도움을 받아 교모세포종 조직 내 신생혈관 초점을 조정합니다.
  10. 신생혈관의 외곽을 따라 레이저 표시선을 정확히 그려내고(혈관벽을 피하며), 레이저로 신생혈관을 태우고 분리한 후 EP 튜브 캡에 모으세요.
    참고: 두 번째 레이저 화상을 사용하여 신생혈관이 완전히 분리되었는지 확인하세요.
  11. 수집한 신생혈관 샘플 튜브를 뒤집어 밀봉하여 -80 °C 냉동고에 보관하세요.

2. LCM으로 분리된 교모세포종 신생혈관 조직에서 단백질 추출 및 단백질 함량 정량

  1. 4% 도데실 황산나트륨(SDS), 1 mM 디티오트레이톨(DTT), 150 mM 트리스-HCl(pH 8.0)을 포함한 단백질 추출 버퍼를 준비합니다.
    참고: SDS는 눈, 피부, 호흡기를 심하게 자극하는 유해한 먼지로, 훈기 후드에서 무게를 측정해야 합니다; DTT는 자극 물질이라 훈풍 후드에서 무게를 재야 합니다.
  2. LCM으로 채취한 신생혈관 혈관 조직을 추출 완충액에 재현탁합니다. 완전한 용해를 위해 얼음물에 1분간 초음파 세척을 하세요.
  3. 16,000 x g 에서 10분간 원심분리하고, 상원액을 새로운 미세원심분리관으로 옮깁니다.
  4. 단백질 정량을 위해 최소 상정액을 하나씩 사용하세요. 남은 상청액에 DTT를 첨가하고(최종 농도: 1 mM DTT), 기포를 피피팅하여 부드럽게 섞으세요. 알리코트를 만들어 -80°C에서 보관하세요.
  5. 아래 단계에 따라 비신코닉산(BCA) 단백질 분석을 수행합니다:
    1. 작동 용액을 준비하세요 (시약 A:B = 50:1).
    2. 소 혈청 알부민(BSA) 표준 용량(0.5 mg/mL)을 준비합니다.
    3. 표 1에 따라 해당 해를 더합니다.
    4. 샘플/표준 샘플을 작업 용액과 혼합한 후 96웰 플레이트로 옮깁니다.
    5. 37°C에서 30분간 배큐하세요.
    6. 562nm에서 흡입도를 측정하세요.
    7. 농도를 표준 곡선에 맞춰 계산하세요.

3. 정량적 단백질체학을 이용해 준비된 신혈관 단백질을 분석하는 것

  1. 추출한 신생혈관 단백질의 트립틱 펩타이드 샘플을 준비합니다.
    1. 추출한 각 단백질 샘플(종양; 대조군)(샘플: 아세톤 = 1:5, v/v)에 얼음처럼 차가운 아세톤을 첨가하고, 완전히 혼합한 후 -20 °C에서 1시간 배양합니다. 원심분리기는 12,000 x g (4 °C)에서 15분간 가열합니다. 상청액을 버려 단백질 추출 시약(SDS, DTT, Tris-HCL)을 제거하고, 펠릿을 1 μL 1% SDS와 함께 20 μL 용해 버퍼에 재현탁합니다.
      참고: 안전 고글을 착용한 채 적절한 환기가 필요한 아세톤을 사용하고, 점화원에서 멀리하며, 폐기물은 전용 불꽃 방지 용기에 폐기하세요.
    2. 각 샘플에 2 μL 환원 시약(DTT)을 첨가하고 완전히 혼합한 후 60 °C에서 1시간 배양합니다. 1 μL 시스테인 차단 시약(요도아세트아마이드)을 추가한 후 상온에서 10분간 배양합니다.
    3. 각 샘플에 트립신(단백질: 트립신 = 20:1, v/v)을 첨가합니다. 보텍스를 혼합하여 37°C에서 하룻밤 부양합니다.
  2. 준비된 트립틴 펩타이드를 표지하기 위해 상대 및 절대 정량(iTRAQ) 시약을 사용하는 등압 타르크를 사용하세요.
    참고: 이 프로토콜에서는 6-plex iTRAQ 시약(플렉스 태그 113, 114, 115, 116, 117, 118)을 사용하여 트립틱 펩타이드 샘플(종양; 대조군)을 표지하며, 각 샘플 유형은 세 번 표지합니다(표 2).
    1. 각 iTRAQ 시약 튜브를 50 μL 이소프로판올로 재구성합니다.
    2. 트립틱 펩타이드 샘플을 해당 시약 튜브에 넣고, 상온에서 1시간 배양합니다.
    3. 반응을 종료하기 위해 3× 부피의 초순수수를 추가한 후 상온에서 30분간 배양합니다.
    4. 라벨이 붙은 여섯 샘플을 균등하게 모아 완전히 섞은 후 동열식을 합니다.
  3. 강한 양이온 교환(SCX)을 사용하여 iTRAQ 표지된 트립틱 펩타이드 샘플을 분획합니다.
    1. 2 mL 용액 A(10 mM KH₂PO₄, 25% ACN, pH 2.7)에서 동온 펩타이드를 재구성합니다. 설포에틸 기능화된 양이온 교환 컬럼(4.6 × 100 mm, 5 μm, 200 Å)에 적재합니다.
    2. 용액 B(500 mM KCl, 10 mM KH₂PO₄, 25% ACN, pH 2.7)를 사용하여 분당 1 mL/분의 일정 유량으로 유출: 0 %→10% (2분) → 10 %→20 % (25분) → 20 %→45% (5분) → 50 %→100% (5분). 공정 내내 214nm 거리에서 모니터링하고, 튜브당 1분마다 30분씩 수집하세요.
    3. 각 분획을 진공 원심분리로 농축한 후, 0.1%(v/v) 트리플루오로아세트산(TFA) 40 μL 분량으로 재구성합니다. 30개 분획 모두 -80 °C 냉동고에 보관됩니다.
      참고: TFA는 매우 부식성이 강하고 독성이 강하며, 심각한 피부와 눈 손상을 일으키고 호흡기를 자극합니다; 폐기물은 산성 장갑, 고글, 실험복을 포함한 적절한 개인 보호 장비(PPE)를 착용한 연기함 처리되어야 하며, 폐기물은 산성 폐기물로 수집해야 합니다.
  4. 각 분획된 펩타이드 샘플을 분석하기 위해 LC-MS/MS를 사용하세요.
    1. C18 역상 고상 추출 카트리지(표준 밀도, 바닥 I.D. 7 mm, 부피 3 mL)를 사용하여 탈염합니다.
    2. C18 역상 액체 크로마토그래피(LC) 컬럼(길이 10cm, 내측 75 μm, 수지 3 μm)을 사용하여 각 분획당 10 μL씩 용액 C(0.1% 개미산)와 용액 D 구배(80% 아세토니트릴, 0.1% 개미산)를 250 nL/분의 속도로 140분 동안 용출합니다.
    3. 온라인으로 LC에서 분리된 펩타이드를 MS/MS 분석을 위해 고해상도 질량분석기에 입력합니다.
    4. Q Exactive가 생성한 원시 스펙트럼 파일(.raw)을 Proteome Discoverer 1.4로 .mgf 형식으로 변환한 후, 이 .mgf 파일을 MASCOT 2.2 서버에 제출합니다. 이 .mgf 파일은 데이터베이스 검색을 위한 소프트웨어 내장 모듈입니다.
      참고: Uniprot 인간 데이터베이스(총 146,704개의 서열; 2025년 7월 20일 http://www.uniprot.org 에서 다운로드됨)는 상세한 검색 매개변수와 함께 사용됩니다(표 3).
    5. 생성된 검색 파일(.dat)을 MASCOT 서버에서 Proteome Discoverer 1.4로 다시 가져오세요. 고신뢰도를 얻기 위해 거짓 발견률(FDR) 임계값인 <0.01의 여과 데이터를 제공합니다.
    6. MS/MS 데이터로 단백질 아미노산 서열을 확인하고, iTRAQ 리포터 이온 강도로 단백질 풍부도를 정량합니다.
    7. 실험적 재현성을 계산하여 차별발현 단백질(DEP)의 컷오프 값과 유의성 p<0,05를 결정합니다.
      참고: 본 연구에서는 컷오프 값이 폴드-체인지(FC) > 1.4로 결정되어 체계적 오류를 효과적으로 제거할 수 있습니다.
  5. 교모세포종 신생혈관 DEPs의 기능적 특성을 분석합니다.
    1. DAVID(주석, 시각화 및 통합 발견 데이터베이스, 버전 6.7; https://david.ncifcrf.gov/) 홈페이지에 접속하여 메뉴 바에서 분석 시작 을 선택하세요.
    2. 왼쪽 패널을 업로드 인터페이스로 선택하세요; 1 단계 입력란에 단백질 또는 유전자 ID를 입력하세요(복사-붙여넣기 기능 활용).
    3. 2단계에서는 업로드된 단백질과 일치하는 식별자 유형을 선택하세요; 이 연구는 UniProt Accession을 사용했습니다.
    4. 3단계에서는 유전자 목록 또는 배경 설정을 선택하세요: 유전자 풍부 분석은 배경 유전자 세트를 선택해야 합니다. 시스템은 기본적으로 종의 전체 유전체를 사용하거나, 사용자가 배경으로 사용자 지정 단백질/유전자 목록을 업로드할 수 있습니다.
    5. 제출 목록을 클릭하여 항목을 제출하고 분석을 시작하세요.
      참고: 분석 결과는 "주석 요약 결과" 패널 오른쪽에 표시됩니다. 사용자는 분석 필요에 따라 출력물을 선택할 수 있습니다; 이 연구는 특히 DEPs가 관련된 생물학적 과정을 분석하기 위해 GOTERM_BP_FAT 목록을 활용하였습니다.
    6. 교모세포종 신혈관 DEPs에 대한 생물학적 과정(BP), 세포 구성 요소(CC), 분자 기능(MF), KEGG 경로를 얻습니다.

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결과

정량적 단백질체학을 위해 충분한 양의 LCM 분리 단백질 샘플이 확보되었습니다

교모세포종 신생혈관 조직에서 차등 발현 단백질의 신뢰할 수 있는 단백질체 프로파일을 얻기 위해, 본 연구는 가장 흔한 교모종 아형인 성상세포종 3등급을 선정하고, 신생혈관이 풍부해진 신혈관의 가용성을 고려하여 LCM을 사용하여 분리한 신생혈관 조직을 선정하였습니다. 더불어, 정량적 단백질체학은 샘플당 ≥ 400 μg 단백질을 필요로 합니다. 본 연구는 LCM 기술을 사용하여 3등급 성상세포종 조직 7건에서 신생혈관 조직을 정밀하게 분리하여 총 8.4mg LCM 분리 신생혈관 조직을 얻었습니다(표 4). 또한, 정상 대조군 미세혈관에서는 뇌 외상으로 인해 손상된 뇌 조직 3건에서 총 27.5mg이 검출되었습니다(표 4).

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토론

LCM과 동위원소 표지 정량 프로테오믹스를 결합하여 교모종 혈관신생의 최초의 대규모 프로테옴 프로파일을 확인했습니다

종양 혈관형성은 교모세포종의 중요한 병리학적 특징으로, 고침습성과 치료 저항성과 밀접하게 연관되어 있습니다 6,7. 기존의 항혈관신생 치료(예: VEGF 억제제)는 표적 단조성과 보상 저항성으로 인해 임상적 효능이 제한적이다 19,20,21,22.종양 혈관신생을 목표로 한 연구는 상당한 과학적 가치를 지니고 있습니다. 종양 혈관신생의 대규모 프로...

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공개 사항

저자들은 상충하는 이해관계가 없다고 선언한다.

감사의 글

이 연구는 중국자연과학기금(중국자연과학기금81272798 X.Z., 82203592 N.L.), 산둥성 자연과학기금(ZR2022QH112 N.L.), 산둥성 태산 학자 공학 프로젝트 특별기금(번호 20221143 → X.Z.), 중국 국가 고급 외국 전문가 프로그램(H20240743; 외국 전문가: X.Z.), 그리고 산둥 제1의과대학 신흥 전략 분야 과학 연구 육성 프로젝트(202403).

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
96웰판서모 피셔 사이언티브 (미국)468667소모품
아세톤난징 시약 (중국)C0720114023시약
아세토니트릴머크 (중국)CN34892시약
BCA 단백질 분석 키트앱캠 (영국)ab102536시약
소 혈청 알부민(BSA) 표준솔라비오 (중국)PC0001-1시약
원심분리관(50ML)키르겐 (중국)KG2811소모품
크라이오스타트 미세토름라이카 (독일)1900년경장비
시스테인알라딘 (중국)C108238시약
DL-디티오트레이톨(DTT)암레스코 (미국)D8220시약
EASY-Spray C18 역상 HPLC 컬럼서모 사이언티픽 (미국)ES800A소모품
전자 저울사르토리우스 (미국)BSA224S장비
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