수정된 스위스 롤 기법을 이용한 생쥐 위근층의 향상된 공간 지도 작성

Summary

이 프로토콜은 원래 쥐 장을 위해 개발된 '스위스 롤' 기법을 수정한 전체 위 면역염색법을 개략적으로 설명합니다.

Abstract

공간 '오믹스' 기술은 위 신경근 장치의 개별 세포가 원래 조직 환경에서 생물학과 상호작용을 연구할 수 있는 전례 없는 기회를 제공합니다. 그러나 이러한 접근법의 성공적인 적용과 안저, 코퍼스, antrum 전반의 구조 및 분자 차이 평가는 일관된 샘플링과 조직 방향 설정이 필요합니다. 여기서는 쥐 위를 위해 수정된 '스위스 롤' 기법을 보고하는데, 이는 모든 주요 해부학적 부위를 단일 냉동 절개로 내장하고 시각화할 수 있게 합니다. 이 접근법은 평면 고정과 신중한 위치 조정을 강조하여 재현 가능한 방향성과 품질을 가진 단면을 생성합니다. 또한 이 연구는 세포 마커의 고품질 시각화를 보장하기 위해 면역형광 염색 조건을 최적화했습니다. 이 프로토콜은 조직 손실과 실험적 변동성을 최소화하면서 위 부위의 포괄적이고 나란히 비교할 수 있게 합니다. 조직 보존과 공간적 방향성을 강화함으로써, 이 방법은 생리학적·병리학적 맥락에서 위생물학을 연구하는 연구자들에게 실용적이고 확장 가능한 도구를 제공합니다.

Introduction

위는 식도와 십이지장¹을 연결하는 복잡한 J자 모양의 기관입니다. 이 부위는 기저, 코퍼스,^{그리고 제1} 부위라는 세 가지 주요 해부학적 영역으로 나뉩니다. 위두막의 각 부위는 뚜렷한 생리학적 역할을 하며, 조절, 순응, 음식 갈등, 배출 등 주요 위 기능에 기여합니다. 위 생리학과 병리학의 변화를 연구하려면 이 부위와 그 세포 구조에 대한 상세한 분석이 필요합니다.

넓은 조직 영역을 시각화하기 위해 연구자들은 원래 쥐 장(3,4,5,6)을 위해 개발된 '스위스 롤(Swiss roll)' 기법을 자주 적용합니다. 이 연구는 쥐 위장에 적용하기 위해 스위스 롤 기법을 수정하여 새로운 프로토콜을 확립하였습니다. 위는 먼저 해부학적 영역으로 분리되어 평평한 방향으로 고정됩니다. 조직은 신중하게 말아 냉동절출을 위해 가공됩니다. 부적절한 스위스 롤링은 특히 장의 연약한 상피 구조를 손상시켜 면역염색에 적합한 조직 품질을 악화시킬 수 있습니다. 잘 고정되고 적절한 조직을 보존하며 세포 구조가 온전한 것은 고해상도 영상에 필수적입니다. 이 연구는 모든 위 부위를 하나의 크라이오블록 내에 포함하는 스위스 롤을 생성하는 새로운 방법을 제시합니다. 또한, 위근육 튜니카에 대한 최적화된 면역형광 염색 프로토콜이 설명되어 위 기능의 상세 평가를 가능하게 합니다. 이 프로토콜은 위 조직의 신중한 준비, 스위스 롤 처리, 염색을 통해 고품질 면역형광 이미지를 얻는 포괄적인 안내서를 제공합니다. 이 방법은 위두막의 복잡한 형태를 보존함으로써 건강과 질병 모두에서 그 구조와 기능에 대한 더 깊은 이해를 돕습니다.

Protocol

동물 실험은 국립보건원(NIH)의 실험동물 관리 및 사용 가이드에 명시된 지침에 따라 수행되었습니다. 이 프로토콜은 메이요 클리닉 기관 동물 관리 및 사용 위원회(A48315-15)에서 승인되었습니다. 메이요 클리닉의 동물 관리 및 이용 프로그램과 시설은 국제실험동물 관리 평가 및 인증 협회(AAALAC)로부터 검토 및 완전 인증을 받았습니다. 시약과 사용된 장비는 재료표에 나열되어 있습니다.

1. 파라포름알데히드(PFA) 고정 위절개술을 위한 스위스 롤 기법

1. C57BL/6J 생쥐(8-10주 된 마우스)를 최소 3분간 이산화탄소(CO₂) 흡입 으로 마취시키고, 이후 기관에서 승인한 프로토콜에 따라 안락사를 보장하기 위해 경추 탈구를 시행합니다.
2. 식도, 십이지장, 복측 및 배측 중간위를 절단하여 위를 제거하세요.
3. 위를 실리콘 코팅된 접시에 차가운 인산염 완충 식염수(PBS)를 넣으세요. 식도, 안저, 농구, 십이지장을 방향 기준으로 고정하세요(그림 1A). 절단 방향은 그림 1A의 빨간 점선으로 표시됩니다.
4. 막대 가위와 겸자를 사용해 붙어 있는 지방을 조심스럽게 제거하세요.
5. 십이지장과 위장의 복측 장간막을 따라 혈구의 핀까지 절단한 후 조직을 부드럽게 납작하게 만듭니다(그림 1B).
6. PBS가 채워진 이식 피펫을 사용해 위 내강에 남아 있는 음식물을 세척하세요.
7. 열린 복부를 부드럽게 늘려 평평한 방향을 만듭니다(그림 1C).
   주의: 조직 구조를 보존하기 위해 원래 크기의 110% 이상으로 과도하게 늘어나지 않도록 주의하세요.
8. 위를 4% PFA에 2분간 담가 조직을 가볍게 고정시키고 말기 편리하게 하세요.
9. 짧은 고정 후 조직을 다시 평평하게 고정하세요.
10. 배를 점선선을 따라 다듬어 롤링에 적합한 균일한 형태를 만든다(그림 1C).
11. 다듬은 위 조직을 PBS에 젖은 필터 페이퍼(그림 1D) 위에 올려놓습니다.
12. 조직을 스위스 롤 형태로 말아 중앙에 이쑤시개를 꽂아 고정하세요.
    주의: 롤링 과정 중에는 점막 쪽이 위를 향하도록 하세요. 한 손에는 겸자로 십이지장 끝을 잡고, 다른 손으로는 이쑤시개를 안내하며, 출판된 방법의 소폭 수정을 따릅니다.
13. 말린 후에는 30G 바늘을 삽입해 모양을 고정하고 90° 각도로 구부려 말린 위를 안정시킵니다(그림 1E).
14. 말린 조직을 4% PFA에 4°C에서 6시간 고정합니다.
15. 고정된 조직을 30% 자당에 PBS에 옮기고 4°C에서 12-16시간 배큐하여 냉동 보호 및 얼음 결정 형성 방지를 수행합니다.
16. 안정화 바늘을 부드럽게 제거하세요.
17. 일회용 기본 몰드를 사용해 조직을 최적의 절단 온도(O.C.T.) 화합물에 박은 후 드라이아이스 위에 냉동합니다(그림 1F).
18. 완전히 냉동되면 곰팡이를 -80 °C에서 보관하세요.
    주의: O.C.T.에 공기 방울, 특히 조직 주변에 공기방울이 생기면 절절 절단에 방해가 됩니다. 조직 블록은 -80°C에서 최소 1년간 보관할 수 있습니다.
19. 절단 전에 블록을 -20 °C에서 최소 1시간 이상 평형으로 유지하세요.
20. 크라이오스탯을 사용해 5μm 두께로 조직을 절개합니다.
    주의: 5-12 μm 두께는 일반적으로 쥐 위 절편 ^7,8에 적합하며, 실험적 필요에 따라 조절할 수 있습니다. 절편은 -20°C에서 최대 3개월간 보관할 수 있습니다.

2. 위근육 조직의 면역형광 염색

1. 소수성 장벽펜을 사용해 현미경 슬라이드의 각 조직 단면에 방수 방지막을 그립니다.
2. 잔여 O.C.T. 화합물을 녹이기 위해 5분간 차가운 PBS로 절단을 세척하세요.
3. 1% 소 혈청 알부민(BSA)을 PBS에서 실온(RT; 21-23 °C)에서 1시간 배양하여 비특이적 결합을 차단합니다.
4. 흡입으로 1% BSA를 제거한 후, RT(21-23 °C)에서 각각 10분씩 차가운 PBS로 세 번 세척합니다.
5. 마우스 대 마우스 IgG 차단액을 PBS에서 RT(21-23 °C)에서 1시간 배양하여 비특이적 결합을 차단하는데, 이는 내인성 IgG의 결합을 줄이고 마우스 항체 IgG를 사용할 때 특이성을 향상시킵니다.
6. 흡입으로 차단액을 제거한 후, 절편을 차가운 PBS로 RT(21-23 °C)에서 각각 10분씩 세 번 세척합니다.
7. RT(21-23 °C)에서 1시간 동안 BSA 차단을 반복합니다.
8. 1차 항체로 절편을 배양하세요. 아노크타민-1(ANO1), KIT, 베타-튜불린 클래스 III(TUBB3)는 1% BSA에 0.3% Triton X-100을 희석하여 희석함. 별도의 실험에서는 마이오신 중쇄 11(MYH11), E-카데린, 그리고 KIT을 사용했습니다. 4°C에서 하룻밤(12-16시간) 부양하세요.
9. 1차 항체 용액은 부드러운 흡입으로 제거하세요. 부위를 냉각 PBS로 세 번, 각각 10분씩 RT(21-23 °C)에서 세척하세요.
10. 2차 항체로 절편을 인큐베이팅하세요. Alexa Fluor (AF) 488 항토끼 IgG, AF555 항생쥐 IgG, AF647 항염소 IgG(모두 5 μg/mL; 1:400)를 1% BSA(RT, 21-23 °C)에서 1시간 동안 투여합니다.
11. 흡입으로 2차 항체 용액을 제거한 후, 절편을 차가운 PBS로 RT(21-23 °C)에서 각각 10분씩 세 번 세척합니다.
12. 4′,6-디아미디노-2-페닐린돌(DAPI, 1:300 희석 비율)으로 절면을 RT(21°-23 °C)에서 1시간 염색합니다.
    주의: 신경핵은 일반적으로 다른 위장세포 유형보다 DAPI 신호가 약한 편입니다; 최적의 시각화를 위해 최소 1시간 잠복이 권장됩니다.
13. 잔여 염분을 제거하기 위해 초순수수로 한 번 절면을 씻어내세요.
14. 안티페이드 마운트를 사용해 슬라이드를 장착하세요.
15. 커버슬립 모서리를 비형광성 래커 매니큐어로 밀봉하세요. 부드러운 흡입력으로 과도한 장착 매체를 제거하세요. 그 다음, 커버슬립 전체 둘레를 밀봉하세요.

3. 공초점 현미경을 이용한 면역형광 영상

1. 공초점 영상 소프트웨어에서 DAPI, AF488, AF555, AF647용 레이저와 검출기를 구성하여 스펙트럼 분리와 신호 포화 방지를 통해 다중 채널 Z-스택 획득을 설정했습니다.
   주의: 각 형광체별로 레이저 출력과 노출 시간을 개별적으로 조정하여 교차 토킹을 방지하고 모든 채널에서 신호를 동적 범위 내에 유지하세요(그림 2A).
2. 공초점 영상 소프트웨어에서 픽셀 포화를 피하고 고강도 영역에서 신호 세부 사항을 보존하도록 노출 매개변수를 설정하세요(그림 2B).
   주의: 모든 채널의 신호가 다이내믹 레인지 내에 머물며 포화 상태에 도달하지 않도록 주의하세요.
3. 전체 위 스위스 롤을 캡처하려면 큰 이미지 획득 설정(예: 6× 6필드)(그림 2C)을 사용한다; 하지만 이 설정은 말린 조직의 전체 크기와 조임 정도에 따라 조절해야 합니다.
4. 공초점 영상 소프트웨어에서 Z-시리즈 획득을 사용하여 3D 이미지를 획득할 수 있습니다. N차원(ND) 획득의 상세 워크플로우는 그림 2D에 나와 있습니다.
5. Z -스택 옵션을 선택하여 Z-시리즈 이미징을 활성화하세요.
6. Z-범위를 정의하려면 위와 하부 초점 위치를 전체 위층을 포함하도록 설정하세요.
7. 배 윗부분을 초점에 맞추고 상단 버튼을 눌러 상한 Z-리밋을 설정하세요.
8. 위근육 하단에 초점을 맞추고 하단 버튼을 눌러 하단 Z-리밋을 설정하세요.
9. 위근육 전체 깊이를 가리기 위해 Z-스택 스텝 수를 8단계로 설정하세요.
10. Z-스택 이미지 획득을 시작하려면 '지금 실행' 을 클릭하세요.
11. 개별 및 병합된 형광 채널에 대해 최대 강도 투영을 생성하여 2차원 이미지에서 3차원 데이터를 시각화합니다.

Results

새로운 방법을 사용하면, 쥐 위스위스 롤은 위의 세 주요 부위인 기저, 혈체, 전부와 식도, 십이지장의 일부를 한 구역에 포함시켰습니다. 한 구역에 전체 위를 포함하면 포괄적인 지역 분석이 가능합니다(그림 1). 위 스위스 롤의 전체 이미지에 헤마톡실린과 에오신(H&E) 염색을 적용하여, 모든 부위에 걸쳐 위 구조가 잘 보존되어 점막, 점막하, 근층을 명확히 시각화할 수 있게 되었습니다(그림 3). 그림 4는 카할(ICC; 위상 장 운동의 기저에 리드미컬한 느린 파동을 생성하는 박동 조율 세포; KIT 및 ANO1로 확인), 장신경세포(위장 운동성을 조절하는 장신경계 신경세포; TUBB3 면역염색으로 식별됨), 핵(DAPI)의 세포 간 세포의 대표적인 면역형광 염색을 보여줍니다. 위 점막에서는 이전에 보고된 ^9,10,11과 같이 판네스 세포와 잔 세포에서도 발현됩니다. ANO1은 위상피, 특히 기저의 기둥 상피세포에서 매우 많이 발현되어 염화물 운반과 점막 분비에 관여하는 역할을 부합한다¹¹. 또한, TUBB3는 인간 단백질 아틀라스^12,13의 데이터에 따르면 특정 위 내분비 세포와 점액 분비 세포에서 발현됩니다. 그림 5는 MYH11에 의해 표지된 평활근 세포, E-카데린에 의해 표지된 위 점막 상피세포, 그리고 KT에 의해 표지된 ICC의 대표적인 면역형광 염색을 보여줍니다. MYH11^{은 앞서} 보고된 바와 같이 위 점막의 근섬유아세포에서도 발현됩니다. 이 면역형광 결과들은 우리 프로토콜이 조직 구조를 보존한다는 것을 확인시켜 줍니다.

그림 1: 냉동절을 위해 쥐 위를 '스위스 롤' 준비하는 과정. (A) 조직 완전성을 유지하기 위해 제거 직후 검은색 실리콘 코팅 해부접시에 차가운 인산염 완충 식염수(PBS)를 채운다. (B) 십이지장 중앙부를 따라 위가 열려 있습니다. (C) 배를 부드럽게 늘려 접시에 고정하여 과도한 긴장 없이 평평하게 눕힌다. 조직을 따라 빨간 점선이 그려져 있어 말리기 쉽게 다듬어야 할 부분을 나타냅니다. (D) 열리고 고정된 위를 PBS에 적셔 필터 페이퍼 위에 올려 압축 형태로 말아야 합니다. 빨간 화살표는 위가 굴러가는 방향을 나타냅니다. (E) 조직 조각은 최적 절단 온도(O.C.T.) 화합물에 박혀 드라이아이스 위에 냉동하여 냉동절부 준비를 합니다. (F) 냉동 블록은 −80 °C에 저장되어 5 μm 두께로 냉동 절반되어 후속 분석에 사용됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.

그림 2: Z-스택 이미징 중 ND 획득 설정 및 포화 시각화. (A) 다중 채널 스펙트럼 이미징을 위해 공초점 영상 소프트웨어에서 설정된 레이저 및 검출기 설정. 네 가지 형광체가 사용되며, 각각 각각 여기 레이저 및 방출 검출기와 함께 사용됩니다. 스펙트럼 그래프는 여기 및 방출 곡선을 표시하여 조정하여 교차 토크를 최소화하고 신호 검출을 최적화할 수 있습니다. (B) 각 형광체별로 노출 설정을 개별적으로 조정하여 픽셀 채도를 피하고 고강도 영역의 세부 사항을 보존합니다. (C) 6개 × 6개 필드 같은 대형 이미지 획득 설정으로 위 전체 스위스 롤을 시각화할 수 있습니다; 영상 필드 크기는 말린 조직의 크기와 조짐에 따라 조절되어야 합니다. (D) ND 획득 창에서 Z-스택 매개변수 설정을 보여줍니다. Z 범위는 위근육의 상단과 하단 위치를 선택하여 정의되며, 조직의 전체 깊이를 포착하여 3차원(3D) 분석을 위해 8단계로 구성됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보시려면 여기를 클릭해 주세요.

그림 3: 헤마톡실린과 에오신 염색이 묻은 쥐 위장 스위스 롤 이미지. 타일 스캔은 8주 된 암컷 C57BL/6J 마우스의 위스위스 롤 전체를 시각화할 수 있음을 보여줍니다. 주요 해부학적 부위는 식도(빨간 점선), 하부 식도 괄약근(보라색 점선), 저저부(검은색 점선), 뇌질(파란색 점선), antrum(초록색 점선), 십이지장(주황색 점선) 등이 표시되어 있습니다. 스케일 바: 1000 μm. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭해 주세요.

그림 4: 전체 쥐 위의 스위스 롤 공초점 이미지: ANO1, KIT, TUBB3. 상단 패널: 8주 된 암컷 C57BL/6J 마우스의 위스위스 롤을 대표적으로 꿰매 공초점 이미지로, ANO1(녹색), KIT(청록색), TUBB3(노란색), 핵(파란색)에 대한 면역염색을 보여줍니다. 안저, 코퍼스, 그리고 안트럼을 포함한 전체 굴러간 위가 시각화됩니다. 스케일 바: 1000 μm. 하단 패널: 상단 패널의 흰색 점선 상자로 표시된 영역의 확대 뷰로, 카할의 간질 세포(ANO1⁺ 및 ^KIT+; 노란색 화살표)와 장내 신경세포(TUBB3⁺; 빨간 화살표)의 세포 세부 사항을 강조합니다. 스케일 바: 100 μm. 이 그림의 확대 버전을 보시려면 여기를 클릭하세요.

그림 5: 전체 쥐 위장의 스위스 롤 공초점 이미지: MYH11, KIT, E-cadherin. 상단 패널: 8주 된 암컷 C57BL/6J 마우스의 위스위스 롤 대표성 공초점 이미지로, MYH11(녹색), KIT(청록색), E-카데린(노란색), 핵(파란색)의 면역 염색을 보여줍니다. 안저, 코퍼스, 그리고 안트럼을 포함한 전체 굴러간 위가 시각화됩니다. 스케일 바: 1000 μm. 하단 패널: 상단 패널의 흰색 점선이 그려진 영역의 확대 뷰. 흰색 점선은 점막 상피(E-카데린)와 근육층(MYH11)을 구분합니다. 흰색 화살표는 KIT⁺ 카할 간질세포(ICC)를 나타냅니다. 스케일 바: 100 μm. 이 그림의 확대 버전을 보시려면 여기를 클릭하세요.

Discussion

새로 최적화된 위스위스 롤 방법을 사용하면, 위의 세 마디(안저, 코퍼스, antrum)와 식도, 십이지장을 하나의 슬라이드에 포함시킵니다. 이 포괄적인 임베딩은 연구자들이 위 전체의 구조 및 분자 변화를 분석할 수 있게 하며, 시약 절획 및 염색 비용을 절감할 수 있게 합니다(그림 1).

면역염색 시 모든 위 부위에 동일한 염색액을 동시에 노출시키면 일관성을 보장하고 정확도가 향상됩니다. 위스위스 롤의 면역염색은 위벽의 뚜렷한 층을 명확히 드러냅니다. 그림 4 와 그림 5에서 볼 수 있듯이, 이 방법은 위 분절 간 형태학적 차이를 시각화할 수 있게 하며, ICC(KIT 및 ANO1⁾¹⁰, 뉴런(TUBB3)¹⁵, 평활근 세포(MYH11), 점막 상피세포(E-카데린), 핵을 검출할 수 있게 합니다.

조직 상태와 연구 목적에 따라 약간의 수정이 있을 수 있습니다. 예를 들어, 붙은 지방을 제거하는 것은 고정 시 롤의 형태를 유지하는 데 도움이 됩니다. 단면 두께 조절은 조직 구조를 보존하거나 슬라이드에 대한 접착력을 높이는 데도 도움이 될 수 있습니다. 또 다른 잠재적 개선 방법은 장내 스위스 롤¹⁶처럼 금속 몰드를 사용하여 더 일관된 절단을 하는 것입니다. 이 프로토콜은 냉동 절제에 중점을 두지만, 파라핀 함침 조직에도 적용될 수 있습니다. 파라핀 임베딩은 조직 구조적 완전성을 보존하는 반면, 냉동절부는 더 빠른 처리와 더 나은 항원 보존을 가능하게 하여 면역형광에 더 적합합니다.

이 방법에는 한계가 있습니다. 염증, 비만, 당뇨병, 노화와 같은 질환에서 흔히 볼 수 있는 비대, 섬유화성 또는 석회화된 위는 말기 어려울 수 있으며, 최적의 염색^17,18,19,20에 도전이 될 수 있습니다. 이러한 한계에도 불구하고, 이 기술은 전통적인 지역별 임베딩에 비해 큰 장점을 제공합니다. 모든 위 부위를 동일한 조건에서 처리하면 일관성이 향상되고 변동성이 줄며, 시간과 시약 모두를 절약할 수 있습니다.

이 접근법은 특히 지역별 변화 연구에 유용합니다. 또한 여러 세포 유형의 공간 분석을 지원하며 이미지 기반 정량화와 함께 사용할 수 있습니다. 전반적으로 이 새롭게 최적화된 위 스위스 롤 방법은 건강 및 질병 분야에서 포괄적인 위 조직 분석을 위한 실용적이고 확장 가능한 플랫폼을 제공합니다.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
#5SF 겸자	파인 과학 도구	11252-00
소 혈청 알부민	시그마-올드리치	A7906
콜드비전 MC-LS LED 광원	쇼트	MC-LS
공초점 소프트웨어와 nbsp;	니콘	니콘 NIS-엘리먼스 이미징 소프트웨어
크라이오실 XYL	에프레디다	9312-4
DAPI (4', 6-디아미디노-2-페닐린돌, 딜락테이트)	써모피셔 사이언티브	D3571
해부 접시, 대형	리빙 시스템  악기 편성	SKU: DD-90
당나귀 안티-고트 AF647 pAb	라이프 테크놀로지	A21447	로트: 1739289 RRID:AB_2535864
당나귀 안티마우스 AF555 pAb	라이프 테크놀로지	A31570	로트: 1774719 RRID:AB_2536180
당나귀 안티-래빗 AF488 pAb	라이프 테크놀로지	A21206	로트: 2668665 RRID:AB_2535792
E-카다린 (1:400 희석)	BD 생명과학	610181	부지: 25510 RRID:AB_397580
이오신	ELITechGroup	$SS-071C
에폭시 코팅 겸자	파인 과학 도구	11210-10
에탄올	시그마-올드리치	459828-4L
플렉스 튜브 1.5 mL	에펜도르프	22364111
거즈 스펀지	피셔사이언티브	22-362-178
경화된 파인 가위	파인 과학 도구	14090-09
헤마톡실린	에프레디아	7211
KIT (0.2 & 마이크로; g/mL; 1:1000 희석)	R& D 시스템즈	AF1356	로트: IEO0217101 리드: AB_354750
렌즈 세정용 1온스 스프레이 병	니콘	77013066
현미경 커버 유리	피셔 사이언티브	12541016
현미경 슬라이드	카디널헬스	M6133A
민분대 핀	파인 과학 도구	26002-20
MYH11 (1:400 희석)	생의학 기술	BT-562	RRID:AB_10013421
매니큐어	죄악 있는 색깔	7.33855E+11
바늘 30g x 1/2인치 & nbsp;	BD 생명과학	305106
파라포름알데히드	시그마-올드리치	158127-500G
페르소나 단일 엣지 블레이드	레이저 블레이드 컴퍼니	76247-652
ReadyProbes 마우스 간 IgG 차단 솔루션 (30x)	써모피셔 사이언티브	R37621	로트: 3226230
슬로우페이드 다이아몬드 안티페이드 마운턴트 (마운팅 미디어)	써모피셔 사이언티브	S36972
스테인트레이 10 슬라이드 스테인 시스템	소포트 사이언티픽	M918-2
입체 현미경 0.8x-5x	니콘	SMZ645
자로스	시그마-올드리치	S9378-1KG
서피스-앰프 X-100 (트라이톤 X)	써모피셔 사이언티브	28314
TMEM16A (ANO1: 1:400 희석)	앱캠	ab53212	로트: GP3295656-1 RRID: AB_883075
전송 피펫	팔콘	357575
TUBB3 (1:400 희석)	세포 신호 전달 기술	4466	부지: 5 RRID: AB_1904176
자일렌	피셔 사이언티브	X3P-1GAL	많이 206238