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방법 논문

다양한 추출 방법이 Terfezia claberii시험관 내 생리활성 프로필에 미치는 영향

308 조회수

DOI:

10.3791/69950

2026년 3월 20일

이 논문에서

요약

Terfezia claveryi 추출물의 시험관 내 생체활성은 생물물리학적 추출 방법과 용매 극성에 의존했습니다. 마세레이션 보조 추출(MAE)에서 추출한 물 추출물이 가장 강한 항산화 활성을 보인 반면, Soxhlet 추출(SE) 추출물은 SH-SY5Y 세포에서 더 큰 세포독성을 유발했습니다. 이 결과는 Terfezia claveryi 추출물의 시험관 내 생체 활성에 대해 명확한 방법별 차이를 보여줍니다.

초록

테르페지아 클라베리(Terfezia claveryi)는 전통적으로 건조 지역에서 소비되는 식용 사막 송로버섯입니다. 최근 몇 년간 항산화, 항균, 치료 특성 가능성으로 인해 과학적 관심을 점점 더 받고 있으며, 식품 및 건강 관련 분야에서의 응용 가능성을 시사합니다. 그러나 생물학적 잠재력에 대한 증거가 증가하고 있음에도 불구하고, 다양한 추출 전략이 생리활성 화합물 회수와 Terfezia claveryi의 시험관 내 생활성 프로필에 미치는 영향은 아직 문헌에서 명확히 밝혀지지 않았습니다. 본 연구에서는 다양한 추출 방법과 다양한 극성을 가진 용매를 사용해 얻은 Terfezia claveryi 추출물의 시험관 내 생체 활성을 평가하였습니다. 추출 수율을 산정하고, 얻은 추출물을 항산화, 항생제, 항생체막 및 세포독성 활성 여부를 검증하였으며, 이는 확립된 시험 시스템을 사용하였습니다. 항산화 능력은 2,2-디페닐-1-피크릴히드라질(DPPH), 2,2′-아지노-비스(3-에틸벤조티아졸린-6-설폰산)(ABTS), 철 환원 항산화력(FRAP) 검사를 통해 측정되었으며, 세포독성 효과는 SH-SY5Y 신경모세포종 세포에서 조사되었습니다. 추출 수율은 방법과 용매 극성에 따라 달라졌으며, 초음파 보조 추출법(UAE)으로 제조된 수용성 추출물에서 가장 높은 수율이 18.40%로 나왔습니다. 항산화 활성은 추출 방법에 따라 유의미한 차이를 보였으며, 마세레이션 보조 추출법(MAE) 방법으로 얻은 수용성 추출물은 페놀 화합물이 풍부한 프로필과 가장 강한 라디칼 스캐빈싱 능력을 보였다. 이 추출물에 대한 LC-MS/MS 분석 결과, 9가지 페놀 화합물이 존재함이 밝혀졌으며; 퀴닉산과 엽록산이 우성 성분으로 확인되었습니다. 반면, Soxhlet 유래 추출물은 SH-SY5Y 세포에서 더 강한 세포독성 효과를 유도했습니다. 항균 및 항생생물막 반응은 추출 방법 간 변동이 상대적으로 적어 추출 전략에 대한 의존도가 약함을 나타냈다. 전반적으로 이 결과들은 생물물리학적 추출 방법과 용매 선택이 Terfezia claveryi 추출물의 시험관 내 생리활성 프로필을 결정하는 중요한 요인임을 보여주며, 항산화 및 세포독성 활성에서 뚜렷한 효과를 관찰합니다.

서론

건강을 개선하고 질병을 예방 및 치료하기 위해 다양한 버섯 종을 사용한 것은 고대로 거슬러 올라갑니다 1,2,3. 거대균류는 일반적으로 두 그룹으로 분류됩니다: 에피지어스(버섯)와 지하지오스(트러플)4. 사막 송로버섯으로 알려진 Terfezia claveryi(T. claveryi)는 세계적으로 유명하고 식용 가능한 송로버섯 종으로, Terfezia5 속에 속합니다. T. claveryi헬리안테움 종이 널리 퍼지는 건조 및 반건조 지역에 흔히 분포합니다 6,7,8,9,10,11.

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프로토콜

참고: T. claveryi 추출물의 전체 실험 작업 흐름은 식적으로 1에 요약되어 있습니다. 연구에 사용된 모든 재료 는 재료표에 설명되어 있습니다.

1. 곰팡이 물질의 검증 및 준비

  1. 자료 수집 및 처리
    참고: 2023년 5월, 터키 중앙 아나톨리아 키르세히르 주의 초원과 모래 토지에서 신선한 T. claveryi 송로버섯이 채집되었습니다. 샘플링은 세 곳에서 이루어졌습니다: 데델리 마을(북위 38°54′15.8", 동경 34°06′40.3"; 해발 ~1050m), 부유카야파 마을(북위 38°53′45.1", 동경 34°19′37.5"; 해발 ~1020m), 악자길 마을(북위 39°01′39.9", 동경 34°12′39.8"; 해발 ~1100m)입니다. 채집지는 반건조 대륙성 기후로, 겨울은 춥고 여름은 덥고 건조하며, 연평균 강수량은 약 380–420mm입니다. 모든 샘플은 최근 농업 활동이 없는 자연 열매 기간 동안 수확하여 잠재적 인위적 오염을 최소화하였습니다.
    1. 깨끗하고 손상되지 않은 ....

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결과

T. claveryi의 분자 식별
ITS 영역의 PCR 증폭은 T . claveryi 의 분자 동정을 위해 범용 프라이머 ITS1과 ITS4를 사용하여 수행되었습니다. 결과된 서열은 BLAST 알고리즘을 사용해 NCBI 데이터베이스의 참조 서열과 분석하여 종 식별을 확정할 수 있었습니다(보완 파일 1).

추출 효율
추출 효율은 추출 방법과 용매 극성에 따라 달랐습니다(표 1). MAE 방식의 추출 효율은 다음과 같은 순서로 감소했습니다: 물> 메탄올, 에틸 아세테이트> 아세톤> 아세톤 > n-헥산(2.15–15.01%). SE와 UAE 방법도 유사한 용매 의존적 경향을 보였으며, 추출 효율은 다음 순서로 감소했습니다: 물> 메탄올 > 에틸 아세테이트> n-.......

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토론

본 연구는 T. claveryi에 대한 비교 및 표준화된 추출-생물활성 플랫폼을 확립하여, 추출 전략이 화학적 조성과 생물학적 기능 모두에 결정적인 영향을 미친다는 것을 입증합니다. 이 프로토콜의 주요 방법론적 강점은 추출 매개변수의 엄격한 제어, 특히 고정된 고체-액체 비율, 표준화된 용매 양, 동일한 추출 후 처리 과정, 그리고 바이오어세이 전 균일한 용액 준비에 있습니다. 이 단계들은 워크플로우 내의 중요한 제어 지점을 나타냅니다. 용매 부피의 변동성, 용매 제거 불완전, 재구성 농도의 불일정은 항산화제 또는 세포독성 비교에 상당한 편향을 줄 수 있습니다. 따라서 동일한 하류 준비 조건을 유지함으로써 관찰된 생물학적 차이가 농도 인공물이 아니라 질적 조성 변화를 반영하도록 보장했습니다. 또한 UAE와 수성 SE 기간 동안 온도 조절이 필수적이었습니다. 초음파 추출 중 공동현상은 국소적으로 고에너지 미세환경을 생성하여 질량 전달을 촉진할 수 있지만,.......

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공개 사항

저자들은 상충하는 이해관계가 없다고 선언한다. 이 연구 결과를 뒷받침하는 모든 데이터는 주요 원고와 보조 정보 파일에서 확인할 수 있습니다. 현재 연구 중 생성 및 분석된 데이터셋은 교신저자가 합리적인 요청 시 제공할 수 있습니다.

감사의 글

저자들은 이 연구가 재정 지원을 받지 못했다고 선언했다.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
96웰 폴리스티렌 마이크로타이터 플레이트네스트 사이언티브701001세포 배양 / 분석 플레이트
ABTS (2,2'-아지노-비스(3-에틸벤조티아졸린-6-설폰산))시그마-올드리치A3219양이온 라디컬 스캐빈징 분석법
아세톤 (분석등급)시그마-올드리치179124추출 용매
아세토니트릴 (LC-MS 등급)시그마-올드리치34851유기 이동상
아시네토박터 바우만니ATCC미국 버지니아주 매너서스ATCC 17978
1290 인피니티 UPLC 시스템을 탑재한 트리플 쿼드 LC-MS/MS애질런트 테크놀로지스6460정량적 분석
분석 기둥 (C18, 4.6 & 100 mm, 3.5 & mu; m)애질런트 테크놀로지스 (조박스)959990-902역위상 컬럼
항산화 기준 (아스코르브산 / 트롤록스)시그마-올드리치A7506 / 238813양성 대조군
응용 바이오시스템즈 3730xl DNA 분석기응용 생명시스템 3730xl DNA 분석기DNA 시퀀싱 시스템
응용 생명 시스템 및 무역; 빅다이 &트레이드; 터미네이터 v3.1 사이클 시퀀싱 키트응용 생명시스템 4337455생거 시퀀싱 키트
박테리아 세레우스ATCC미국 버지니아주 매너서스ATCC 14579
생물정보학 분석, BioEdit 소프트웨어, 사용 알고리즘: CAP 조직 조립아이비스 바이오사이언스NA시퀀스 어셈블리 소프트웨어
셀룰로오스 추출 골무피셔브랜드&트레이드; 그리고 nbsp;11724043삭슬렛 추출에 사용
디메틸설폭사이드 (DMSO)머크102952용매
DNA 분리 키트 (Plant&; 균류 DNA 분리 키트 (폴란드)EurX 유전자매트릭스E3595DNA 분리 
DPPH (2,2-디페닐-1-피크릴히드라질)시그마-올드리치D9132급진적 청소 분석
둘벡코의 변형 독수리 미디엄염소자리, 그리고 nbsp;맘하
엔테로박터 에어로젠ATCC미국 버지니아주 매너서스ATCC 13048
장구균 대소ATCC미국 버지니아주 매너서스ATCC 29212
대장균ATCC미국 버지니아주 매너서스ATCC 25922
에탄올머크100983용매
에틸 아세테이트머크109623추출 용매
태아 소 혈청 (FBS)카프리콘 사이언티픽FBS-16A
BigDyeTerminator v3.1 사이클 시퀀싱 키트서모피셔4337455시퀀싱 키트
폴린-치오칼테우 시약시그마-올드리치  47641총 페놀 함량
개미산시그마-올드리치  33015이동상 가산법
갈릭산카를로 에르바406335보정 곡선
유전자 매트릭스 플랜트& 곰팡이 DNA 분리 키트EurX E3595DNA 분리 키트
그래프패드 프리즘 (v9)데이터 시각화 및 통계 분석해당 없음통계 분석
가열 맨틀전기열(Electrothermal) 및 nbsp;EME30500용매 역류를 유지하기 위해 사용됩니다
하이프렙&트레이드; PCR 정화 시스템마그비오AC-60005
얼음실험실 등급UAE 내 온도 조절
클렙시엘라 폐렴ATCC미국 버지니아주 매너서스ATCC 13883
L-글루타민카프리콘 사이언티픽독일
리스테리아 모노사이토제네스ATCC미국 버지니아주 매너서스ATCC 19115
라이오필라이저사이엔츠해당 없음추출물의 동결 건조
자기 비드 및 대시; 기반 PCR 정화 시스템마그비오AC-60005PCR
메탄올머크106009추출 용매
n-헥산머크103701추출 용매
페니실린/스트렙토마이신카프리콘 사이언티픽독일
Pseudomonas aeruginosa(슈도모나스 아에루기노사)ATCC미국 버지니아주 매너서스ATCC 27853
필터 페이퍼 (No. 541)시티바1541-125 V추출물 여과 과정에서
회전 증발기부치 R10011100V101용매 제거
시겔라 이질증ATCC미국 버지니아주 매너서스ATCC 13313
탄산나트륨머크106392총 페놀 분석
SPECTROstar 나노 마이크로플레이트 리더기 BMG 랩텍흡광도 측정
황색포도상구균ATCC미국 버지니아주 매너서스ATCC 25923
포도상구균 표피ATCC미국 버지니아주 매너서스ATCC 12228
통계 분석 소프트웨어 (SPSS, v23)데이터 분석NA
서모 사이언티픽 나노드롭 2000 써모피셔 사이언티브ND-2000
트립톤 대두 아가르 (TSA)머크독일
트립톤 두장 육수 (TSB)머크독일
초음파 균질기사이엔츠SCIENTZ-650L초음파 보조 추출

참고문헌

  1. Wasser, S. P., Weis, A. L. Medicinal properties of substances occurring in higher basidiomycetes mushrooms: current perspectives (Review). Int. J. Med. Mushrooms. 1 (1), 31-62 (1999).
  2. Wasser, S. P.

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재인쇄 및 허가

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