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방법 논문

Ki-67과 호중구-림프구 비율 및 CD4 양성/CD8 양성 비율이 비소세포폐암에서 조기 반응을 예측합니다

231 조회수

⸱

DOI:

10.3791/70014

⸱

2026년 3월 20일

 ,  ,  , 
1Department of Oncology, Binhaiwan Central Hospital of Dongguan, 2Department of internal medicine, Binhaiwan Central Hospital of Dongguan

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 PD-1/PD-L1 억제제를 투여받는 NSCLC 환자에서 기저선 NLR, 유세포 CD4/CD8 비율, 종양 Ki-67 면역조직화학 점수, 2주기 후 RECIST 1.1 평가를 통합하여 초기 반응 평가를 표준화하며, 재현성 중심의 품질 관리 체크포인트를 전반에 걸쳐 적용합니다.

초록

본 연구는 PD-1/PD-L1 억제제 치료를 받는 비소세포폐암 환자에서 단기 반응 평가를 위한 종양 Ki-67 발현 상태, 말초혈구 호중구-림프구 비율(NLR), CD4 양성/CD8 양성 T세포 비율의 복합 예측 가치를 평가하였습니다. 2021년 1월부터 2023년 10월까지 빈하이완 중앙병원에서 두 차례 치료 주기를 완료한 102명의 연속 환자를 후향적으로 분석하였습니다. 반응은 고형 종양 반응 평가 기준(RECIST) 버전 1.1을 사용하여 평가하였으며, 13명은 완전 반응, 26명은 부분 반응, 54명은 안정 질환, 9명은 진행성 질환을 달성했습니다. 분석을 위해 반응은 완전 반응과 부분 반응으로, 비반응은 안정 질환과 진행성 질환으로 정의했습니다. 단변량 선별 검사를 통해 반응 상태와 관련된 후보 예측인자를 확인하였고, 이를 연령, 동부 협동종양학 그룹 수행 상태, 흡연 이력을 조정한 다변수 로지스틱 회귀분석에 입력하여 Ki-67 상태, NLR, CD4-양성/CD8 양성 비율을 단기 반응 분류의 독립 예측인자로 확인하였습니다. 수신자 운영 특성 분석은 단일 마커에 비해 결합 바이오마커 모델의 구별력이 향상되었음을 보여주며, 임상 환경에서 조기 반응 층화를 위한 실용적이고 최소 침습적인 접근법을 강조했습니다.

서론

폐암의 거의 85%를 차지하는 비소세포폐암(NSCLC)은 가장 흔한 조직학적 아형이며 주로 중국에서 중장년층에 영향을 미칩니다. 병인은 다요인으로 나타나며, 담배 노출, 산업 먼지 또는 오염물질과의 장기 접촉, 유전적 감수성, 그리고 환경 발암물질에 대한 만성 노출 등이 포함됩니다. 초기 NSCLC는 종종 비특이적 호흡기 증상으로 나타나며, 1차 진료에서 흔한 기도 질환으로 잘못 귀인될 수 있어 인식 지연과4.5단계로 진단되는 환자 비율이 높게 나타납니다.

최근 몇 년간 면역 검사점 차단은 진행된 NSCLC 전신 치료의 핵심 요소가 되었습니다. 프로그램사망 1(PD-1) 및 프로그램사망 리간드 1(PD-L1) 억제제는 선택된 환자에서 지속적인 임상적 이점과 생존율 향상을 입증했습니다6. 그러나 반응 이질성은 여전히 상당하며, 장기 치료의 재정적 부담과 잠재적 독성은 결코 가볍지 않습니다. 종양 PD-L1 면역조직화학과 종양 돌연변이 부하(TMB)와 같은 임상적으로 사용되는 예측 인자는 귀중한 정보를 제공하지만, 두 지표 모두 균일한 배치를 제한하는 실용적 제약이 있습니다. PD-L1 평가는 종양 내 이질성과 검사/플랫폼 변이성에 의해 영향을 받을 수 있으며, TMB는 일반적으로 시퀀싱 자원, 더 긴 처리 기간, 더높은 비용이 필요합니다. 이러한 제약은 일상적으로 이용 가능한 재료를 활용하고, 실험실 수용 능력이 가변적인 센터에서 표준화된 품질 관리를 통해 실행할 수 있는 워크플로우를 개발하는 것이 임상적으로 의미가 있음을 의미합니다.

실질적인 관점에서, 소수의 접근 가능한 바이오마커를 통합한 프로토콜 기반 접근법은 치료 시작 후 조기 추적 계획을 지원할 수 있습니다. 예를 들어, 첫 주입 전 표준화된 기저선 샘플링과 정의된 2주기 평가 창은 임상의가 더 면밀한 모니터링이나 조기 재평가가 필요한 환자를 식별하는 데 도움을 주며, 측정값을 여러 부위에서 재현하는 데 필요한 절차에 대한 투명성을 유지하는 데 도움을 줍니다. 이러한 타당성과 재현성에 대한 강조는 방법론적 단계와 품질 체크포인트가 기여의 중심인 JoVE 프로토콜 문서에서 특히 중요합니다.

Ki-67은 종양 성장 역학을 반영하는 핵증식 마커로, 면역 구조와 관련하여 논의되어 왔습니다. Ki-67 수치 상승은 PD-L1 발현과 상관관계가 보고되었으며, 면역 검사점 억제제(ICI)에 대한 민감도를 형성하는 면역 탈출 표현형과 연관될 수 있습니다10. 동시에 호중구-림프구 비율(NLR)은 전신 염증 상태를 쉽게 확인할 수 있는 지표로, PD-1/PD-L1 억제제 치료를 받는 환자에서 예후 또는 예측 요인으로 널리 연구되어 왔습니다11. 높은 NLR은 일반적으로 상대적 중성구애 및/또는 림프감소증을 통한 면역억제 환경을 반영하는 것으로 해석되며, 여러 집단에서 반응 저하와 생존율 감소와 연관되어 있습니다12. 말초 CD4-양성/CD8 양성 T세포 비율은 적응 면역 항상성에 대한 추가적인 창을 제공하며, 보조 세포와 세포독성 T세포 구획 간의 기능적 균형은 PD-1/PD-L1 차단 하에서 효과적인 항종양 면역에 기전적으로 중요합니다.13.

Ki-67, NLR, CD4-양성/CD8 양성 비율은 각각 개별 마커로서 잠재적 가치를 보여주었으나, NSCLC에서 조기 반응 평가를 위한 운영적이고 최소 침습적인 워크플로우로서의 통합적 활용은 아직 충분히 특성화되지 않았습니다. 따라서 본 연구는 종양 Ki-67 발현 상태와 말초혈 NLR 및 CD4-양성/CD8 양성 비율을 결합하여 PD-1/PD-L1 억제제 치료 2주기 후 단기 반응 분류를 개선하는지를 조사하여, 조기 위험 층화 정보를 제공하고 일상적인 임상 재평가를 적시에 지원하는 것을 목표로 하였습니다.

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프로토콜

1. 윤리 및 규제 준수

  1. 동관 빈하이완 중앙병원 윤리위원회(승인 번호: 2021045)로부터 승인을 받으세요.
  2. 모든 절차가 헬싱키 선언을 준수하는지 확인하세요.
  3. 치료 전에 서면 동의가 이루어졌는지, 그리고 연구 파일에 동의 상태를 문서화하세요.

2. 환자 식별 및 적격성 선별

  1. 2021년 1월부터 2023년 10월까지 연구 센터에서 프로그램된 세포사결단백질 1/프로그램사망리간드 1 억제제 치료를 시작한 비소세포폐암 진단을 연속적으로 확인한다.
  2. 병리 진단을 확인하려면 병리 보고서를 검토하세요.
  3. 두 번의 치료 주기를 완료했는지 확인하고, 한 번의 주기를 3주로 정의하세요.
  4. 포함 기준을 적용하세요.
    1. 치료 시작 시 나이 35세에서 80세 사이임을 확인하세요.
    2. 기초 영상에서 간 전이가 없음을 확인하세요.
    3. 다른 원발성 악성 종양이 없음을 확인하세요.
    4. 의료 기록에 12개월> 예상 생존 기간이 문서화되어 있는지 확인하세요.
    5. 완전한 기초 의료 기록 및 기초 영상 데이터의 가용성을 확인합니다.
  5. 제외 기준을 적용하세요.
    1. 치료 시작 6개월 전 심장흉부외과 수술을 받은 환자는 제외합니다.
    2. 추적 관찰에 영향을 미치는 낮은 준수 사례가 있는 환자는 제외합니다.
    3. 프로토콜 준수에 지장을 주는 중증 정신질환 환자를 제외합니다.
    4. 기초 평가 시 혈액학적 또는 응고 이상 환자를 제외합니다.
    5. 기저 시 중증 활성 감염을 가진 환자는 제외합니다.
    6. 등록 30일 이내에 면역치료 또는 표적 치료를 받은 환자는 제외합니다.
    7. 전이, 재정적 제약, 사망으로 인해 2주기 평가 기간 내에 치료를 중단한 환자는 제외합니다.
  6. 각 자격이 있는 환자에게 고유한 연구 ID를 할당하고, 분석 전에 모든 기록을 식별 해제하세요.
  7. 두 명의 조사관이 독립적으로 자격을 확인하고 합의에 따라 불일치를 해결합니다.
  8. 심사 결과를 연구 ID, 심사 문항, 불일치 설명, 심사자, 날짜를 포함한 선별 로그에 기록하세요.
    참고: 염증 지표를 변화시킬 가능성이 있는 기저 질환(예: 발열, 임상적으로 의심되는 감염, 전신 코르티코스테로이드 노출)을 선별 검사 로그에 기록하여 배제 결정 및 해석을 지원한다14.

3. 기초 임상 데이터 추출

  1. 전자 의무기록 시스템에서 기준 변수를 검색하세요.
  2. 성별, 연령, 체질량지수, 교육 수준, 종양 위치, 최대 종양 직경, 종양-림프절-전이 단계, 치료 방식, 흡연 이력, 동부 협동종양학 그룹 수행 상태를 기록합니다.
  3. 모든 기준 변수를 비식별화된 스프레드시트로 내보내세요.
  4. 타임스탬프가 있는 읽기 전용 복사본을 저장하여 데이터셋을 분석할 수 있도록 잠가세요.
  5. 데이터 정확성을 최소 10% 이상의 항목과 출처 기록과 교차 검증하여 검증하세요.
  6. 필드명, 원본 값, 수정된 값, 심사자 이니셜, 날짜를 포함한 수정 로그에 수정 사항을 기록하세요.
  7. 응답 상태별로 기준 특성을 요약하고, 표 1로 보고할 기준선 특성 표를 작성하세요.

4. 기초 말초혈액 채취 및 혈액학에서 유래한 호중구-림프구 비율

  1. 첫 번째 억제제 투여 2시간 이내에 EDTA 항응고제 튜브를 사용하여 상지 정맥에서 공복 정맥혈을 채취하세요(재료 표 참조).
  2. 각 튜브를 수집 직후 8–10번 뒤집어 투여합니다.
  3. 채취 후 2시간 이내에 자동 혈액학 분석기(재료표에 기재 된 모델)를 사용해 완전한 혈액 수치 검사를 수행하세요.
  4. 샘플 테스트 전에 분석기의 일일 내부 품질 관리 상태를 확인하고, 품질 관리 합격/실패 상태, 제어 수준, 운영자, 분석기 모델을 연구 로그에 기록하세요.
  5. 분석기 출력에서 절대 호중구 수치와 절대 림프구 수를 기록하세요.
  6. 호중구 대 림프구 비율을 NLR = 절대 호중구 수 / 절대 림프구 수 수(Absolute Neutroball count) 수로 계산하세요.
  7. 연구 로그에서 응고되거나 용혈된 샘플을 무효로 표시하세요.
  8. 임상적으로 가능한 경우 동일한 치료 전 기간에 혈액 채취를 반복하고, 누락되거나 유효하지 않은 결과의 원인을 문서화하십시오.
  9. 혈액 채취 시간과 CBC 실행 시간을 기록하여 ≤ 2시간 전 분석 창을 기록합니다.

5. CD4 양성/CD8 양성 T세포 비율에 대한 유세포 검사

  1. 50 μL EDTA 항응고 전혈을 12× 75mm 유량관에 분리하여 투여합니다( 재료표 참조).
  2. 4가지 플루오로색소를 사용하여 CD3, CD4, CD8, CD45를 식별하는 4색 T세포 소집합 시약 20 μL을 추가합니다( 재료표 참조).
  3. 1–2초 동안 소용돌이를 하고 20–25°C에서 빛으로부터 보호한 상태로 15분간 부화합니다.
  4. 10× 농축액에서 1× 적혈구 용해액 450 μL를 추가합니다( 재료표 참조).
  5. 부드러운 역전으로 혼합한 후 빛을 차단한 채 20–25 °C에서 10분간 배양합니다.
  6. 인산염 완충 생리식염수 2mL를 추가하고( 재료표 참조) 3–5번 반전하여 혼합합니다.
  7. 350 × g에서 실온에서 5분간 원심분리기를 사용하세요.
  8. 상청액은 펠릿을 흐트러뜨리지 않고 버리세요.
  9. 펠릿을 300–500 μL 인산염 완충 식염수에 재현탁하여 채취합니다.
  10. 기기 워크플로우에 따라 매일 세포계 성능 점검을 수행하고, 실행 시트에 합격/불합 상태를 기록하세요.
  11. 염색되지 않은 진공관을 사용해 광전자 증배기 전압을 설정하세요.
  12. 각 플루오로색소에 대해 단일 색상 대조군(셀 또는 비드)을 실행하세요.
  13. 획득 소프트웨어 내에서 단일 색상 컨트롤을 사용하여 보상을 계산하세요.
  14. 동일한 배치 및 기록 날짜, 연산자, 전압 스냅샷, 보상 파일 이름 내의 모든 샘플에 대해 동일한 전압 설정과 보상 매트릭스를 유지하세요.
  15. 각 샘플을 저에서 중간 정도의 유량으로 채취하고, 샘플당 최소 10,000건의 림프구 이벤트를 수집하세요.
  16. CD45를 이용한 게이트 림프구와 측면 산란 방식의 차이.
  17. 전방 산란 면적과 전방 산란 높이를 비교하는 게이트 싱글렛.
  18. 게이트 CD3 양성 T 세포.
  19. CD3 양성 사건 내 CD4 양성 및 CD8 양성 하위 집합을 정량합니다.
  20. CD4-양성/CD8 양성 비율을 계산하려면 CD4-양성/CD8-양성 비율 = (CD3 양성 중 % CD4 양성) / (CD3 양성 중 % CD8 양성)
  21. 이변량 플롯에서 CD4 양성 및 CD8 양성 집단의 분리를 검증합니다.
  22. 예상 개체군 분리와 일치하지 않는 중복이 관찰되면 보상을 재계산하고 통제군을 재실행합니다.
  23. 각 배치(CD45/SSC, 싱글렛, CD3 게이트, CD4 대 CD8)의 대표 플롯을 저장하고, 배치 ID와 날짜로 보관하세요.
    참고: 배치 추적15를 지원하기 위해 내부 런시트에 시약 로트 번호와 실행일을 기록하세요.

6. 종양 Ki-67 면역조직화학 및 이진 상태 분류

  1. 포르말린 고정 파라핀 내비 종양 조직 절편을 4 μm 크기로 절단하고 전하 슬라이드에 단편을 장착합니다( 재료표 참조).
  2. 절면은 자일렌으로 탈파라핀화하고, 등급 에탄올을 통해 물로 재수화합니다.
  3. 시트레이트 회상 버퍼(pH 6)를 사용하여 열에 의한 에피토프 회수를 수행한다(재료 표 참조).
  4. 회수 버퍼를 끓는 온도에 가까운 온도로 예열한 후 타이밍을 맞추세요.
  5. 회수 버퍼에서 20분간 열슬라이드.
  6. 실온에서 20분간 슬라이드를 식히세요.
  7. 세척 완충제로 슬라이드를 헹구어 잔류 회수 용액을 제거하세요.
  8. 3% 과산화수소와 함께 실온에서 10분간 부위를 배양하세요.
  9. 세척 후 세척 완충제를 사용해 1–2분씩 세 번 슬라이드합니다.
  10. Ki-67 1차 항체(클론 MIB-1; 즉시 사용 제형; 재료표 참조)로 실온에서 20분간 인큐베이션합니다.
  11. 세척 후 세척 완충제를 사용해 1–2분씩 세 번 슬라이드합니다.
  12. HRP 기반 검출 시스템을 적용하고 제조사 지침에 따라 DAB로 크로모겐을 현상하세요(재료 표 참조).
  13. 핵 얼룩이 명확히 보이고 배경이 낮아지면 물로 세척하여 염색체 발생을 멈추세요.
  14. 헤마톡실린으로 반스테인을 하고, 헹구고, 블루를 입힌 후 등급 에탄올로 탈수하고, 자일렌으로 투명하게 처리하며, 영구 마운팅 매체로 마운트합니다( 재료표 참조).
  15. 400×에서 밝은 시야 현미경으로 절면을 검사합니다.
  16. 겹치지 않는 다섯 개의 생존 가능한 종양 영역을 선택하여 괴사, 크러시 인공, 가장자리 효과를 피하세요.
  17. 각 영역마다 최소 100개의 종양핵을 세고, 명확한 갈색 핵염색으로 핵 수를 기록하세요.
  18. 다섯 분야 전반에 걸쳐 최소 500개의 종양 핵을 집계하세요.
  19. 사례 수준 Ki-67 표지 지수를 공식으로 계산하세요 (%) = (총 양성 종양핵 / 총 종양핵 수) × 100%입니다.
  20. 각 사례별 염색 강도는 0(없음), 1(연한 노랑), 2(갈색-노랑), 3(짙은 갈색)로 점수를 부여하는데, 이는 집계된 종양핵 전체의 우세 강도를 기준으로 합니다.
  21. 각 사례별로 양성 세포 비율을 0(0–5%), 1(6–25%), 2(26–50%), 3(51–75%), 4(>75%)로 점수를 부여합니다.
  22. IRS = 강도 점수 × 백분율 점수를 사용하여 면역반응성 점수를 계산하세요.
  23. 분석용 Ki-67 표현 상태를 IRS 0–4에서는 Ki-67 음성, IRS 5–12에서는 Ki-67 양성으로 지정하고, 표 1–4 와 모델링 출력 전반에 걸쳐 이 이진 상태를 일관되게 사용하세요.
  24. 두 명의 병리학자가 맹검 채점합니다.
  25. 병리학자 모두에게 임상 결과와 혈액 바이오마커 값을 눈가리게 하세요.
  26. 점수 차이는 공동 검토를 통해 해결하고 최종 합의 분류와 날짜를 기록합니다.
  27. 각 사례별 대표 이미지와 연구 ID와 확대 자료를 보관합니다.
  28. 각 염색 검사에 알려진 양성 대조군과 음성 대조군(1차 항체는 생략)을 포함하세요.
  29. 제어 실패 시 또는 배경 염색 시 반복 염색하여 해석을 방해합니다.
    참고: 5개 필드 집계, 분류 지수, 강도 점수, 백분율 점수, IRS, 그리고 감사 가능성16의 최종 긍정/부정 상태를 포함한 채점 워크시트를 보관하세요.

7. 두 사이클 후 반응 평가

  1. 1주기 전에 일상적인 임상 워크플로우 내에서 기초 영상을 수행하세요.
  2. 두 번의 치료 주기 후에 영상 검사를 반복하고, 각 주기를 3주로 정의합니다.
  3. 고형 종양 반응 평가 기준 버전 1.1을 사용하여 치료 반응을 평가합니다. 14
  4. 두 명의 방사선 전문의가 독립적으로 블라인드 평가를 실시하세요.
  5. 두 방사선과 의사 모두 바이오마커 값과 공변량 모델링을 눈가리에 없애세요.
  6. 합의로 의견 차이를 해결하고 판결 세부 사항(독자 이니셜, 날짜, 최종 결정)을 기록하세요.
  7. RECIST 1.1에 따라 반응 범주를 완전 반응, 부분 반응, 안정 질환, 진행성 질환으로 분류합니다.
  8. 응답 그룹에 완전 반응 + 부분 반응을 할당합니다.
  9. 비반응 그룹에 안정 질환 + 진행성 질환을 할당합니다.
  10. 기준선과 추적 영상 날짜를 저장하고, 평가 창이 두 주기에 해당하는지 확인하세요.
  11. 감사를 위해 연구 ID, 리더, 날짜가 포함된 RECIST 측정 시트를 보관하세요.

8. 통계 분석

  1. 통계 소프트웨어를 사용하여 통계 분석을 수행하세요(재료 표 참조).
  2. 표준편차± 평균으로 정규분포 연속 변수를 제시하고 독립 표본 t 검정을 사용해 그룹을 비교합니다.
  3. 범주 변수를 카운트와 백분율로 제시하고, 적절히 카이제곱 검정 또는 피셔 정확 검정을 사용해 그룹을 비교합니다.
  4. 미리 정해진 코딩 방식에 따라 독립 변수를 코딩하고, 표 2로 코딩 테이블을 컴파일합니다.
  5. 단변량 분석을 이용한 예측기를 선별하고, 다변수 모델링을 위해 미리 정해진 기준을 충족하는 변수를 선택합니다.
  6. 응답 = 0, 비응답 = 1을 종속 변수로 사용하여 다변수 로지스틱 회귀 모델을 적합시킵니다.
  7. 연령, 동부 협동종양학 그룹 성과 상태, 흡연 이력을 고려하여 다변수 모델을 조정합니다.
  8. 최종 조정 모델 추정치는 표 3으로 보고합니다.
  9. 단일 예측 변수와 결합 모델에 대한 수신자 작업 특성 곡선을 생성합니다.
  10. 유덴 지수(NLR)와 CD4-양성/CD8 양성 비율을 사용하여 ROC 기반 임계값을 결정하고, 표 4에 보고된 이분법 분석에서 일관되게 도출된 임계값을 적용합니다.
  11. 단일 예측 변수와 결합 모델에 대한 판별 및 분류 성능을 표 4에 요약하라.
  12. 호중구-림프구 비율과 CD4-양성/CD8-양성 비율을 동일한 결과 코딩 및 조정 세트 내에서 연속 예측 변수로 다루는 민감도 분석을 수행하라.
  13. 민감도 분석 결과를 보충 표 S1로 보고하세요.
  14. 원고 본문과 해당 표 및 도표 간의 일관성을 확인하고, 최종 출력 파일과 사용된 소프트웨어 버전을 보관합니다.

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결과

기본 특성
비소세포폐암 환자 102명의 기초 임상 특성은 표 1에 요약되어 있습니다. 반응군(완전 반응 + 부분 반응)에는 남성 30명, 여성 9명이 포함되었고, 비반응군(안정 질환 + 진행성 질환)은 남성 50명과 여성 13명으로 구성되었습니다(p = 0.771). 반응군에서는 79.49%가 65세 미만이었으며, 비반응군은 66.67%였습니다. 체질량지수, 교육 수준, 종양-림절-전이 단계, 혈소판 수, 치료 전 최대 종양 직경 등에서 그룹 간 통계적 유의한 차이는 관찰되지 않았습니다(모두 p > 0.05). 반면, 흡연 병력, 동부 협동종양학 그룹 성과 상태, Ki-67 발현 상태, 말초혈 호중구-림프구 비율, CD4 양성/CD8 양성 T세포 비율은 그룹 간 유의하게 차이가 있었으며(모두 p < 0.05; 표 1).

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토론

면역 체크포인트 억제는 진행성 비소세포폐암(NSCLC) 전신 치료의 필수 요소가 되었으나, 임상적으로 의미 있는 이점은15 대 16 환자 일부에 집중되어 있습니다. 이러한 반응 이질성과 장기 치료의 비용 및 잠재적 독성 문제로 인해 조기 반응 계층화는 추적 계획 및 적시에 재평가하는 데 임상적으로 중요하게 만듭니다. 이 JoVE 프로토콜에서는 조직 기반 증식 측정값(Ki-67 면역조직화학)과 면역염증 상태를 반영하는 두 가지 말초혈 지수(호중구-림프구 비율 및 CD4-양성/CD8-양성 T세포 비율)를 통합하여 두 치료 주기 후 단기 반응 분류를 지원하는 실용적인 워크플로우를 설명합니다.

연령, 동부 협력 종양학 그룹 수행 상태, 흡연 이력을 조정한 분석 전반에서 Ki-67 발현 상태, 호중구 ...

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공개 사항

저자들은 본 논문에서 보도된 연구에 영향을 미칠 수 있는 상충하는 재정적 이해관계나 개인적 관계가 없다고 선언한다.

감사의 글

동관 빈하이완 중앙병원 병리학과 중앙 실험실에 면역조직화학 및 유세포검사 기술 지원을 제공해 주신 것에 감사드립니다. 이 연구는 광둥 의학과학기술연구기금 프로젝트(보조금 번호 B2022247)의 지원을 받았습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
자동 혈액학 분석기시스멕스 코퍼레이션XN-1000완전 혈구 수치 및 NLR 계산
밝은필드 현미경올림포스BX53조직학적 평가
시트레이트 항원 추출 완충제(pH 6.0)앱캠AB93678열에 의한 항원 회수
DAB 기판 킷벡터 연구소SK-4100염색 발생
EDTA 항응고제 혈액 채취관BD 생명과학367525말초 혈액 채취
유세포계BD 생명과학FACSCanto IIT-세포 하위 집합 분석
유세포검사 튜브 (12 figure-materials-1 75 mm)BD 팔콘352058샘플 채취관
포르말린 고정 파라핀 박박 종양 조직 블록임상 병리학 아카이브해당 없음NSCLC 종양 샘플
4색 T세포 소집합 시약 (CD3/CD4/CD8/CD45)BD 생명과학340499림프구 하위 집합 검출을 위해
헤마톡실린 염색시그마-올드리치H3136핵 염색 방지
HRP 탐지 키트다코 (애질런트)K50072차 항체 검출 시스템
Ki-67 1차 항체 (MIB-1 클론)앱캠AB16667면역조직화학적 검출
미세토름라이카 마이크로시스템즈RM2235컷팅 4 figure-materials-2 m FFPE 섹션
인산염 완충 식염수(PBS)써모피셔 사이언티브10010023세포 세척과 재현탁
양전하를 띤 현미경 슬라이드써모피셔 사이언티브J1800AMNZ조직 절편 장착
적혈구 용해액BD 생명과학349202유세포검사 전 적혈구 용해(Erythrocyte lysis)
통계 분석 소프트웨어IBMSPSS v26.0데이터 분석

참고문헌

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