선형 이온 트랩 질량분석법을 기반으로 한 화오샹 정기 경구 액체 내 미확인 화합물 구조 분석의 기술적 접근법

Summary

여기서는 다단계 질량분석기와 화향정기(Huoxiang Zhengqi) 경구용 액체를 기반으로 한 단편화 과정을 결합한 표준 프로토콜을 보여줍니다.

Abstract

중국 한방 화합물(CHC)은 중국 의학에서 대체 불가능한 역할을 하며, 그 복잡한 성분을 규명하는 것이 최근 몇 년간 중요한 연구 초점이 되었습니다. 화향정기(Huoxiang Zhengqi) 경구용 액체는 분자 수준에서 화학 조성이 추가적인 연구가 필요한 고전적인 중국 특허 의약품입니다. 전통적인 질량분석기(time of-flight and Orbitrap)는 일반적으로 2차 파편 정보만 제공합니다. 선형 이온 트랩 질량분석기를 기반으로 화합물을 더 철저하게 분해하여 더 깊은 조각 정보를 얻을 수 있었습니다. 본 논문은 시료 전처리, 초고성능 액체 크로마토그래피 준비, 질량 분석법 준비, 전스펙트럼 시험, 2차 질량 분석법, 다단계 질량분석법 및 결과 분석을 포함하는 CHC 내 미확인 화합물에 대한 구조 탐구 기법을 개발합니다. 대표적인 결과는 복합 구조의 유도 과정을 보여줍니다. 이성질체, 폴리하이드록시 화합물, 기기 해상도 등 실험 기법에 영향을 미치는 요인들에 대해 논의합니다. 다단계 질량분석법을 통해 미확인 화합물의 미세 분자 구조를 도출한 결과, 확립된 실험 방법은 전통 중의학에서 생리활성 소분자의 구조 특성 규명과 약리학적 메커니즘과의 연관성에 다재다능하고 적용 가능합니다.

Introduction

중국 한방 화합물(CHC)은 전통 중의학(TCM)의 귀중한 자산으로서 수천 년에 걸친 검증된 임상 경험을 축적해 왔습니다^. 이들은 질병 예방, 치료 개입, 재활 분야에서 대체 불가능한 역할을^{수행합니다.} 다중 허브 시너지를 통해 CHC는 인체를 전체적으로 치료하며, 전체론과 증후군 차별화 기반 치료의 핵심 원칙을 실현합니다^. 현대 의학 체계 내에서 CHCs는 다표적 경로를 관여하는 다약물학적 메커니즘으로 전 세계적으로 인정받고^{있으며, 소}화 장애, 호흡기 감염, 면역조절 등 광범위한 응용을 지니고 있습니다^. 화향 정기(HXZQ)는 고전적인 CHC 제형의 전형^입니다. 이 조성은 파출리, 페릴라 잎, 당골 다후리카, 아트라크틸로데스, 포리아, 말린 귤 껍질 등 여러 약용 허브를 통합합니다. 이 식물은 땀을 내고, 열 제거하며, 습기를 해소하며, 비장 위장 강화 효과를 부여하는 것으로 유명합니다⁷. HXZQ는 습기성 인플루엔자 유사 증후군, 상복....

Protocol

1. 샘플 전처리

1. 상업용 HXZQ 포장을 열어보세요. 정확히 0.1 mL의 HXZQ를 2 mL 샘플 병에 옮긴 후 0.9 mL의 물을 추가하세요. 용액을 완전히 섞을 때까지 흔들면 됩니다.
2. 주입용 주사기(1 mL)와 미세다공성 막 필터(0.22 μm)를 준비합니다. 용액을 2mL 샘플 병에 걸러서 넣으세요.
   참고: 실험 절차 중에는 적절한 개인 주의를 기울이시기 바랍니다.

2. 초고성능 액체 크로마토그래피(UPLC) 준비

1. Xcalibur 소프트웨어를 더블 클릭하세요. 다운로드 준비를 클릭한 후 직접 제어 버튼을 클릭하세요. 팝업 창에서 펌프 모듈 열을 클릭하고, %B를 50, %C를 0, %D를 0으로 설정하세요(그림 1).
2. 모터 버튼을 클릭하면 켜짐 상태로 전환됩니다. 더 많은 옵션 버튼을 클릭....

Results

우리는 먼저 모든 m/z 정보를 수집한 후, 부모 이온과 조각 이온 간의 질량 차이를 계산해야 한다고 제안했습니다. 데이터베이스나 문헌에 보고된 화합물을 찾아내고, 그 알려진 구조를 바탕으로 미지의 화합물 구조를 역으로 추론했습니다.

검출된 모든 화합물과 그에 상응하는 조각 이온은 m/z 값으로 제시되었습니다. 이 조각 이온의 일부는 인증된 기준²⁰과 일치할 수 있습니다. 이 구조적으로 진단적인 중간체들의 체계적인 기능기 변형을 통해 알려지지 않은 표적 화합물 구조들은 단계적으로 조립되었습니다.

우리는 m/z=623.21의 미지화 화합물에 대해 MS/MS 단편화를 수행했습니다. 헥소스 단위 하나를 제거한 후, 화합물은 m/z=461.15의 조각 중간체를 얻었다. 3차 질량분석법(MS³).......

Discussion

LIT-MS와 MSⁿ 단편화 기술의 결합은 CHC에서 미확인 화합물을 식별하는 방법을 제공합니다. Orbitrap 및 Q-TOF MS의 전통적인 탠덤 MS 모드와 달리, 선형 이온 트랩은 표적 이온을 특이적으로 포획할 수 있어 공용^{출 이온}의 간섭을 효과적으로 방지합니다. 이 방법은 분자 수준의 정밀도를 달성하여 비교적 정확한 화학 구조 정보를 제공하여, 데이터베이스 공백으로 인한 미지의 화합물 선정 문제를 부분적으로 해결합니다.

당체, 다당류, 플라보노이드 및 기타 화합물은 CHCs에 널리 존재합니다²⁴. 선형 이온 트랩에서 이들 성분의 단편화 패턴에 주목할 필요가 있습니다. 다당류의 MSⁿ 절단 과정에서 당시 결합 절단이 가장 쉽게 일어납니다²⁵. 단당.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
아세토니트릴	써모 사이언티픽	CAS 75-05-8	액체 상태
개미산	써모 사이언티픽	CAS 64-18-6	액체 상태
화향정기 경구 액체	충칭 태지공업(그룹) 유한회사.	주 의약품 표준 코드 Z50020409	연구 대상
선형 이온 트랩 질량분석기	써모 사이언티픽	LTQ XL	IT-MS 기기
액체 크로마토그래프	써모 사이언티픽	U3000	UPLC 기기
엑스칼리버	써모 사이언티픽	버전 2.0	UPLC-IT-MS 운영 소프트웨어