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방법 논문

생활 방식에 따른 가속화된 노화 병태생리를 연구하기 위한 일주기 격변 및 식이 스트레스의 조합 마우스 모델

254 조회수

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DOI:

10.3791/70866

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2026년 4월 28일

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1Department of Chinese Materia Medica, Chengde Medical University, 2School of Pharmacy, Hebei Medical University, 3State Key Laboratory for Innovation and Transformation of Luobing Theory, 4College of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Hebei University of Chinese Medicine, 5The Second Clinical Medical College, Heilongjiang University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

여기서는 불건강한 생활 방식을 모방하고 대사 장애와 노화 표현형을 유발하는 생체 리듬 이상과 고지방·고당(HFHS) 식단 마우스 모델을 구축하는 프로토콜을 제시합니다.

초록

이 프로토콜의 목표는 현대의 건강하지 않은 생활습관이 유발하는 다요인 손상을 재현하는 표준화된 마우스 모델을 구축하는 것입니다. 이를 위해 무작위 생체 리듬 교란과 고지방 고당(HFHS) 식단을 결합한 새로운 C57BL/6J 모델을 개발했으며, 단일자 HFHS와 일주기 규칙 교란군을 대조군으로 삼았습니다. 대조군과 비교했을 때, 복합 모델은 체중 증가, 공복 혈당 및 지질 수치 상승, 뚜렷한 간지방증, 명백한 인지 및 운동 장애 등 더 심각한 대사 장애를 보였습니다. 복합 모델은 또한 허약 지수와 헤마톡실린 및 이오신(HE) 염색으로 확인된 것처럼 더 유의미한 가속 노화를 보였습니다. 이 통합 모델은 생활습관 관련 대사-인지 기능 저하와 조기 노화를 신뢰성 있게 모방합니다. 이 단계별 재현 가능한 프로토콜은 생활 방식 매개 노화에 대한 기전론적 연구와 표적 치료 전략 평가를 지원합니다.

서론

가속화된 현대 생활 방식은 점점 더 리듬을 방해하는 행동과 비만성 식단에 노출시키며, 이러한 요인들이 전신 기능 저하 및 만성 질환 발병기전과 연관되어 있다는 강력한 증거가 있습니다. 역학 데이터는 눈에 띄는 동반 질환을 보여줍니다: 교대 근무자는 대사 증후군 지표의 유병률이 높고, 고지방과 고당분 식단을 장기간 섭취하면 치매 위험 증가와 강하게 연관되어 있습니다 2,3. 이러한 모욕은 다기관 병리를 촉진하며, 대사 기능 장애는 종종 가속된 인지 저하와 심혈관 재형성과 동시에 나타나며, 말초와 중추 기능 저하 간의 양방향 상호작용을 보여줍니다. 임상 시너지가 인정되었음에도 불구하고, 생활습관 유발 장기 쇠퇴의 통합적 병태생리를 포착한 표준화된 전임상 모델은 아직 미흡합니다.

분자 수준에서 만성 생체 불균형은 시상상핵에서 기원한 병리학적 연쇄 반응을 시작하여 시상부에 가는 글루타마트성 신호를 교란시키고 코르티코트로핀 분비 호르몬인 맥박 기능을 둔화시킵니다. 이로 인해 시상하부-뇌하수체-부신(HPA) 축의 음의 피드백4가 손상되어 글루코코르티코이드 수용체 둔감화와 지속적인 코티솔 상승을 유발합니다. 그 결과 간에서 글루코신생 활성화와 골격근 인슐린 수용체 기질-1 인산화 억제가 결합하여 말초 인슐린 저항성을 촉진하여 고혈당과 지질이상증의 대사적 기초를 마련합니다 5,6. 동시에 식이 포화지방산은 내피 타이트 쵸 언션단백질 7,8의 하향 조절을 통해 손상된 혈액-뇌 장벽을 통과하여 미소교세포 TLR4/NF-κB 신호를 활성화합니다. 이로 인해 TNF-α/IL-1β 매개 신경염증이유발됩니다. 핵심은 이 두 가지 건강하지 않은 생활 습관 요인이 독립적으로 작용하지 않고 시너지 효과를 낸다는 점입니다. 그러나 현재 문헌에서는 이들의 결합 노출에 대한 체계적인 연구가 여전히 크게 부족합니다. 따라서 생체 리듬 교란과 고지방 및 고당 식단을 복합 요인으로 통합한 모델링 연구를 수행하는 것이 의미가 있습니다.

고립된 노화 메커니즘 연구에 유용함에도 불구하고, 현재의 마우스 모델은 생활습관 유발 악화의 통합된 병태생리를 재현하지 못하고 있습니다. 자연 노화는 개체 간 변동성이 뚜렷하며, 실험 효율성과 양립할 수 없는 긴 일정이 필요합니다. 독소루비신과 같은 약리학적 약물은 주로 DNA 손상과 급성 노화를 유발하지만, 만성 대사 조절 이상을 복제하지 않습니다10. 유전자 변형 모델은 전신 신경내분비-대사 교차 반응을 무시하고 단일 분자 경로를 표적으로 합니다11,12. D-갈락토스 투여는 산화 스트레스를 유발하지만, 일주기 규칙 교란이 글루코코르티코이드 리듬이나 식이 지질 매개 신경염증에 미치는 영향을 충분히 모방하지 못한다13. 중요한 점은, 단일 요인 중재만으로는 임상적으로 관찰되는 시너지 작용적 다기관 감소 패턴을 포착할 수 없다는 점입니다. 이러한 번역 격차는 만성 일주기 격차와 비만성 식이 스트레스를 동시에 통합하여 상호 의존적인 신경퇴행, 심장 기능 장애, 대사 장애를 충실히 가속화하는 첨단 조합 플랫폼을 필요로 합니다.

이 문제를 해결하기 위해 우리는 확률적 생체 규칙 교란과 고지방 및 고당분 식단을 결합하여 시너지 효과를 가진 현대 생활 습관 모욕을 재현하는 C57BL/6J 마우스 모델을 개발했습니다. 쥐를 순환 조명 스케줄에 노출시키고 지속적인 비만성 먹이를 제공하면, 비탈 증가, 공복 고혈당, 지질이상증 등 대사 이상이 크게 악화되었습니다. 인지 평가에서는 공간 및 인식 기억에 뚜렷한 결함이 있었고, 운동 검사에서는 지구력이 감소하는 것으로 나타났습니다. 특히 허약 지수의 종단 정량화는 연령 관련 결핍의 가속화된 축적을 보여주었습니다. 우리의 이중 도전 패러다임은 다면적이고 가속화된 노화를 견고하게 재현하며, 라이프스타일 주도 병태생리를 연구할 검증된 새로운 플랫폼을 제공합니다.

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프로토콜

모든 실험 절차는 허베이 이링 제약연구소 동물 연구 윤리 위원회(승인 번호: N2024043)의 승인을 받았습니다. 8개월 된 수컷 C57BL/6J 쥐 32마리(재료 표 참조)가 허베이이링제약연구소 신약평가센터 산하 특정 병원체가 없는 동물 시설에 수용되었습니다. 사육 환경은 표준화된 조건 하에 유지되었으며, 주변 온도는 20–26°C 범위였고, 상대습도는 40%에서 70%로 조절되었으며, 12시간 빛/12시간 어둠 주기가 시행되었습니다. 쥐들은 표준 실험실 설치류 사료와 멸균된 식수를 무료로 이용할 수 있었습니다.

1. 생체 조절 교란과 식이 스트레스의 조합 마우스 모델 구축(그림 1)

참고: 실험 중 갑작스럽게 사망했거나, 심각한 체중 감소를 보였거나, 모델링 절차를 완료하지 못한 동물은 최종 분석에서 제외되었습니다. 초기 개체 수는 그룹당 8마리였고, 최종 유효 표본 크기는 그룹당 5마리였습니다.

  1. 실험 전에 고지방/고당(HFHS) 식단( 재료표 참조)과 유연한 밝-어둠 주기 조절을 위한 프로그래밍 가능한 타이머가 설치된 독립된 방을 준비하세요.
    참고: 산화를 방지하기 위해 식단을 4 °C 또는 -20 °C에 보관하세요; 결로가 성분에 영향을 미치지 않도록 사용 전에 실온으로 보관하세요.
  2. 동물 적응과 무작위 분류
    1. 실험을 시작하기 전에 8개월 된 모든 쥐를 표준 환경에서 7일간의 적응 급식 주기를 가집니다.
    2. 적응 기간 후 체중(n=8개)에 따라 쥐를 무작위로 네 그룹으로 배정합니다: 대조군, 복합 스트레스 모델(모델) 그룹, HFHS 그룹, 그리고 생체 리듬 교란(CR) 스트레스 그룹.
  3. 8개월간 HFHS 식이요법과 생체 리듬 교란을 결합한 중재를 결합하여 복합 스트레스 모델 그룹에 적용합니다. HFHS 그룹에는 같은 기간 동안 HFHS 식단만으로 급여를 주세요.
  4. CR 그룹은 오직 일주기 리듬 교란에만 노출시키세요. 실험 내내 대조군에게는 표준 유지 식단을 먹이세요. 모든 동물에게 식수를 무료로 제공하세요.
    참고: 8개월 개입은 일시적으로 중단할 수 있습니다(예: 쥐의 일상적인 건강 검진을 위해) 실험 결과에 영향을 주지 않으며, 검사가 완료된 후 중재를 재개할 수 있습니다.
  5. 일주기 리듬 교란 프로토콜 (그림 2A, B)
    1. 프로그래밍 가능한 타이머( 재료표 참조)를 사용해 주간 빛과 어둠 주기를 유연하게 조절하세요. 네 가지 뚜렷한 빛 체계를 적용하세요: 빠른 빛-어둠 전환(매일 2시간 연속 7분마다 빛과 어둠을 번갈아 가며), 빛-어둠 역주기(매일 8시에 불을 끄고 20시에 켜짐), 지속적인 빛(24시간 조명), 그리고 지속적인 어둠(24시간 어둠).
    2. 매주 초에 통계 소프트웨어(R 언어, 고정된 무작위 시드를 사용)를 사용해 무작위 시퀀스를 생성합니다. 네 가지 조명 모드를 일주일 중 각 요일에 무작위로 할당하여 각 모드가 1일에서 2일 동안 연속적으로 적용되도록 합니다.
  6. 쥐에게 HFHS 식단을 자유롭게 제공하고, 음식 섭취량을 매주 모니터링하세요. HFHS 식이의 상세 성분은 표 1에 제시되어 있습니다.
    참고: 먹이 부족이나 식량 결핍을 방지하기 위해 식품 공급 점검이 필요합니다.
  7. 8개월 중재 기간 동안 고정된 시간대(목요일 오전 9시)에 전자 저울을 사용해 매주 쥐를 체중 측정합니다. 모든 체중 데이터를 상세히 기록하세요.
    참고: 체중 측정 과정을 신속히 수행하세요(각 세션은 30초 이내에 완료)하여 스트레스와 생체 리듬 교란을 최소화하세요.

2. 새로운 물체 인식

  1. 훈련 하루 전에 60cm× 60cm× 40cm 테스트 박스에 쥐를 넣고 5분간 자유롭게 탐색해 환경에 적응하게 하세요.
    참고: 각 시도 후에는 상자에서 배설물과 소변을 제거하세요. 남은 냄새를 제거하기 위해 75% 에탄올로 상자를 닦으세요.
  2. 테스트 박스의 왼쪽 아래 모서리와 오른쪽 아래 모서리에 각각 동일한 원통 두 개(A와 B)를 놓습니다. 각 마우스를 물체에서 등을 돌리고 상자에 넣고 5분간 자유롭게 탐색하게 하세요.
    1. 두 원통의 좌우 위치를 무작위로 교차하여 자세 편향을 방지하세요.
    2. 5분 탐사 훈련 후에는 최대 23시간까지 실험을 일시정지하고, 훈련 후 24시간 이내에 새로운 물체 교체 단계(단계 2.3)를 완료하여 인식 테스트의 타당성을 확인하세요.
  3. 훈련 후 24시간 후에 왼쪽 하단의 객체 A를 새로운 큐브(객체 C)로 교체하세요. 오버헤드 카메라 작동해. 마우스를 상자에 넣고 5분간 행동을 기록하세요.
    참고: 익숙한 물건과 크기는 비슷하지만 재질, 색상, 질감이 뚜렷이 다른 새로운 물건을 사용해 쥐가 새로움을 인식할 수 있도록 하세요.
  4. 영상 추적 시스템( 재료표 참조)을 사용해 영상을 분석하세요.
    1. 탐험을 쥐가 주둥이를 물체 쪽이나 2cm 이내로 향하는 것으로 정의하세요. 익숙한 대상(TB)과 새로운 대상(TC)을 탐험하는 데 소요된 시간을 기록하세요.
    2. 인식 지수를 다음 공식에 따라 계산합니다: 인식 지수 = TC / (TB + TC) × 100%.
      참고: 주관적 편향을 피하기 위해 분석가가 실험 그룹에 대해 눈가림을 놓지 않도록 하세요; 탐사 시간 기록에서 등반이나 갉아먹는 등 탐색적이지 않은 행동은 체계적으로 제외합니다.

3. 악력 검사

  1. 쥐의 앞다리 그립 강도를 그립 강도미터 14(재료표 참조)를 사용해 측정하세요. 각 테스트 세션 전에 힘 게이지를 수직으로 90도 회전시키고 금속 받침대에 단단히 고정하여 시스템의 완전한 고정을 보장합니다.
  2. 꼬리 밑부분을 부드럽게 잡아주세요. 앞발이 바를 자연스럽게 잡도록 하세요. 측정값이 안정되면 게이지를 0으로 맞추고, 꼬리를 일정하고 느린 속도로 수평으로 뒤로 당겨 마우스가 그립을 놓을 때까지 계속하세요.
  3. 해제 순간의 최대 최대 힘(kgf)을 그립 강도로 기록하세요. 쥐당 하루에 세 번 연속 시험을 수행하세요. 이후 분석에는 세 가지 측정값의 평균을 사용하세요.
    참고: 당기는 속도를 균일하게 유지하고, 마우스가 당김에 완전히 저항할 수 있도록 충분히 느리게 유지하세요.
  4. 다음 중 하나라면 실험 결과를 분석에서 제외할 수 있습니다: 쥐가 한 쪽 앞발만 사용하거나, 뒷다리가 바에 닿거나 그립에 기여하거나, 쥐가 당길 때 몸을 비틀거나, 바가 적극적인 저항 없이 풀리는 경우.
    참고: 모호하거나 예외적인 임상시험은 검토 대상으로 표시하세요. 필요할 때 측정을 반복하세요.

4. 허약 지수 (FI)

참고: 테스트 전에 모든 장비 매개변수를 표준화된 설정으로 보정하세요. 피로로 인한 표현형 변화를 피하기 위해 각 마우스의 총 평가 시간을 30분 이내로 제한하세요. 모든 검사는 정해진 아침 시간대(오전 9시–정오) 내에 실시하여 생체 리듬의 영향을 최소화하세요.

  1. 실험 전에 12시간 동안 물을 자유롭게 사용할 수 있도록 단식하여 음식 섭취가 생리적 측정에 미치는 급성 영향을 최소화합니다.
  2. 평가 30분 전에 쥐를 테스트 환경으로 옮겨 적응시키고 스트레스 관련 간섭을 줄이세요.
  3. 종양, 감염, 사지 기형 등 심각한 병리학적 상태가 있는 쥐는 허약 평가에 혼동을 방지하기 위해 제외합니다.
  4. 운동 기능, 영양 상태, 감각 기능, 자발적 활동 및 행동, 생리적 결함 등 5개 영역에서 31개의 표현형 결핍 지표를 기반으로 허약 지수를 평가합니다.15,16.
    참고: 구체적인 31개 평가 문항은 운동 기능(7개 항목: 손잡이 힘 저하, 비정상적인 보행, 등반 능력 감소), 영양 상태(체중 감소, 체질 점수 감소, 음식 섭취 감소 등 6개 항목), 감각 기능(시각 장애, 청각 장애, 촉각 둔화 등 5개 항목), 자발적 활동 및 행동(7개 항목: 자발적 활동 감소, 미용 행동 감소와 탐색 행동 감소), 그리고 생리적 결함(눈 결함, 귀 결함, 피부 결함 등 6가지 항목). 모든 품목은 이진 점수 체계(0 = 결함 없음, 1 = 결함 있음)를 채택하며, 최종 허약 지수는 결함 품목 총 수 ÷ 31입니다.
  5. 실험 그룹에 블라인드 연구자 두 명을 배정하여 모든 평가를 독립적으로 수행하게 합니다.
  6. 각 지표를 그립 힘, 보행 속도, 체중 변화, 털 상태, 감각 반응, 자발적 활동 능력, 신체 이상 등 사전 정의된 기준에 따라 0점(결핍 없음) 또는 1점(결손)으로 평가하세요.

5. 공복 혈당 측정

참고: 급성 섭식 관련 혈당 영향을 최소화하기 위해 12시간 동안 물을 자유롭게 사용할 수 있는 단식을 하세요. 오전 9시부터 오후 12시까지 측정을 수행하여 생체 변동을 줄이세요. 실험 전 표준 포도당 용액으로 혈당계를 보정하여 배치 간 일관성을 확인하세요.

  1. 쥐를 부드럽게 제지하고, 꼬리 끝을 75% 에탄올로 소독하세요. 멸균 일회용 란셋으로 꼬리 정맥에 1–2mm 절개를 하세요. 조직액 오염을 피하려면 첫 방울의 혈액을 버리세요.
  2. 소량의 모세혈관혈을 채취하여 휴대용 혈당계( 재료표 참조)와 호환되는 테스트 스트립을 사용해 즉시 분석하세요. 각 샘플을 복제하여 데이터 정확성을 확인하세요.

6. 혈중 지질 검사에 총 콜레스테롤(TC)이 포함됨

참고: 심한 용혈 또는 탁도가 있는 샘플은 분석에서 제외하십시오. 삼중 계수가 10%인 반복 측정>.

  1. 비응고제 튜브에 혈액을 채취한 장소. 상온에서 2시간 동안 자연스럽게 응고되도록 두세요. 1000 × g 에서 4°C에서 15분간 원심분리기를 통해 혈청을 분리합니다.
    참고: 작동 전에 원심분리기가 적절히 균형을 맞추고 안전 내부 뚜껑을 단단히 닫으세요.
  2. 상부 혈청층을 조심스럽게 흡인하여 알리오토를 추출한 후 즉시 -80 °C에서 보관하여 지질 산화를 방지하세요.
    참고: 혈청을 분리하여 -80 °C에서 보관한 후에는 실험을 며칠에서 몇 주간 중단할 수 있습니다; 이후 총 콜레스테롤 검사(6.3단계)는 검사 키트와 장비가 준비되면 수행할 수 있으며, 혈청이 반복적으로 냉동 및 해동되지 않도록 합니다.
  3. 제조사 지침에 따라 상업용 Greiss의 TC 검사 키트(재료표 참조)를 사용하여 혈청 총 콜레스테롤 수치를 측정하세요. 각 샘플을 3중으로 테스트하고 표준 기준 샘플을 동시에 사용하여 보정을 진행합니다.

7. 헤마톡실린-에오신 염색(HE 염색)

  1. 행동 검사 후 나트륨 펜토바르비탈(20 mg/kg)으로 쥐를 마취합니다.
  2. 후안와 정맥신경총을 통해 혈액을 채취하세요. 조직을 해부하고 4% 파라포름알데히드에 48시간 고정하세요.
    참고: 4% 파라포름알데히드에 48시간 동안 조직 고정을 한 후에는 실험을 일시 중지할 수 있습니다; 고정 조직은 4% 파라포름알데히드에 4°C에서 최대 1주일간 보관한 후 탈수 단계(단계 7.3)로 진행할 수 있습니다.
  3. 자동 프로세서로 등급별 에탄올 시리즈(1시간당 60%, 70%, 90% 에탄올; 2시간당 95%, 100% 에탄올)를 사용해 건조 고정 조직을 처리했습니다.
    주의: 에탄올은 인화점이 낮은 가연성 액체입니다. 보관 및 운영 중에는 열, 열원, 불꽃을 피하세요. 환기가 잘 되는 곳에서 사용하고, 정전기 방지 장갑과 실험복을 착용하세요. 실험 구역 내 대용량 저장은 피하세요; 전용 인화성 액체 캐비닛에 보관하세요.
  4. 탈수 조직을 자일렌에 2시간 동안 제거한 후, 60°C에서 파라핀으로 3시간 침투합니다( 재료표 참조). 표준 해부학 평면에 맞춰 조직을 삽입합니다.
    참고: 조직 취성을 방지하기 위해 투명 시간은 지나치게 길어서는 안 됩니다; 침투 시 결정화를 방지하기 위해 파라핀 온도를 일정하게 유지하세요. 파라핀 삽입 후에는 박힌 조직 블록을 상온에서 몇 달간 보관할 수 있으며, 필요할 때 절절 단계(7.5단계)를 수행할 수 있습니다.
  5. 파라핀 블록이 완전히 굳으면 파라핀 슬라이서(재료표 참조)로 4μm 연속 단면을 절단하고, 폴리-L-라이신 코팅된 슬라이드에 옮긴 뒤 실온에서 자연 건조한 후 밀봉하여 보관합니다.
    참고: 섹션 장착 및 자연 건조 후에는 슬라이드를 상온에서 먼지 없는 환경에서 최대 1개월간 보관한 후 스테인 단계(7.6단계)로 진행할 수 있습니다.
  6. 자동 염색 시스템을 갖춘 스테인 단면( 재료표 참조).
    1. 자일렌 I과 자일렌 II에서 탈파라핀(각각 10분씩).
    2. 에탄올 계열(100%, 95%, 80%, 각각 2분씩)으로 수화를 마친 후 증류수로 씻어냅니다.
    3. 핵이 명확히 보일 때까지 헤마톡실린으로 3–8분간 염색하고, 흐르는 물에 헹구어 블루잉을 촉진하며, 에오신으로 1–3분간 반염색하여 적절한 세포질 분홍색을 얻습니다.
  7. 절대알코올로 탈수 염색된 절면을 제거하고, 자일렌으로 투명하며, 슬라이드 스캐너 분석을 위해 중성 발삼으로 마운트합니다( 재료표 참조).

8. 오일 레드 O 염색

  1. 채취 후 30분 이내에 최적 절단 온도(OTC) 화합물(재료 표 참조)에 신선한 간 조직을 삽입하세요.
    참고: 신선한 간 조직을 OTC 화합물에 삽입한 후, 삽입된 조직은 절개 전 최대 1개월간 -80°C에서 보관할 수 있어 반복적인 냉동 및 해동 과정을 피할 수 있습니다.
  2. 조직을 냉동체에 넣고 완전히 냉동한 후 절절 절단하세요.
  3. 냉동조절기 온도를 -22 °C로 설정하고 완전히 얼린 조직 블록을 8 μm 두께의 연속 조각으로 절단합니다.
  4. 구간을 코팅되지 않은 유리 슬라이드에 직접 옮기고, 부드럽게 평평하게 눌러 단단히 접착되도록 합니다.
  5. 슬라이드를 중성 포르말린으로 실온에서 10분간 고정하세요. 고정 직후 절편을 60% 이소프로판올로 5초간 세척하세요.
  6. 미리 처리된 조각을 습기 챔버에 넣고, 오일 레드 O 염색 용액( 재료표 참조)을 넣은 후 20분간 배큐합니다.
  7. 염색 후에는 60% 이소프로판올로 절편을 분별하여 지질 방울과 간질 조직 경계가 명확히 구분할 수 있도록 합니다.
    참고: 분화 과정에서 과도한 분화로 인해 희미한 착색이 생기는 것을 방지하기 위해 절편을 면밀히 관찰하세요.
  8. 간지질 침착과 관련된 조직병리학적 변화를 관찰하기 위해 광학 현미경으로 분화된 염색 절편을 검사합니다.
    참고: 염색 및 분화 후에는 절편을 현미경 검사 전 최대 3일간 4°C에서 보관할 수 있어 염색 효과에 영향을 주지 않도록 합니다.

9. 통계 분석

  1. 모든 실험 데이터를 평균±± 표준오차(SEM)로 표현합니다
  2. 데이터가 정규분포에 부합하는지 확인하기 위해 샤피로-윌크 검정을 적용하세요. 정규성이 확인되면 그룹 간 분산의 균질성을 평가하기 위해 레벤 검정을 수행하세요.
    참고: 데이터가 정규성 가정을 충족하지 못할 경우 비모수 검정을 직접 적용하세요.
  3. 분산 일방향 분석(ANOVA)을 사용하여 여러 그룹 간 전체 차이의 통계적 유의성을 검정하고, 피셔의 최저유의차이(LSD) 검정을 사용하여 쌍별 비교를 수행합니다.
    참고: 분산이 이질적일 경우 대신 웰치 ANOVA를 사용하세요.
  4. 두 독립 표본 그룹 간 비교에는 양측 학생 t-검정을 사용하세요.
  5. 통계적 유의성을 양측 p-값 0.05< 정의하라. 모든 통계 분석을 통계 분석 소프트웨어를 사용하여 수행하세요.

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결과

이중 노출 코호트에서 대사 병리의 시너지 악화
종단적 체중 모니터링은 코호트 간 뚜렷한 성장 경로를 보여주었습니다. 모델 그룹과 HFHS 그룹은 대조군과 CR 그룹 모두에 비해 체중 증가가 가속화되었습니다. 특히, CR 그룹은 대조군에 비해 다소 가속을 보였습니다(그림 3A). 대사 기능 장애에 대한 추가 증거는 모델 그룹과 HFHS 그룹에서 공복 혈당 및 혈중 지질 수치가 대조군과 CR 그룹보다 유의하게 높았다는 관찰에서 제공되었습니다: 공복 혈당 수치는 모델 9.26 ± 0.67 mmol/L, HFHS± 8.46 0.62 mmol/L, 대조군 5.60 ± 0.69 mmol/L, CR 5.50 ± 0.71 mmol/L(모델 대조군 P < 0.05였습니다. HFHS와 통제 < 0.05); 총 콜레스테롤 수치는 모델 기준 5.12 ± 0.29 mmol/L, HFHS 기준 10.1...

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토론

현대 연구들은 일주기 조절 교란과 고지방·고당분 식단이 유기체의 전신 기능 저하를 독립적으로 유발한다는 사실을 명확히 확인했습니다. 우리의 데이터는 이 두 요인이 결합되어 유발하는 병리학적 손상이 어느 하나만의 단순한 덧셈 효과보다 훨씬 심각함을 보여줍니다. 단일 요인 중재군과 비교했을 때, 복합 모델 그룹은 HFHS 그룹에 비해 지방 형성에 유의미한 차이가 없었으나, CR 그룹과 비교했을 때는 뚜렷한 상승을 보였습니다. 공복 혈당 수치는 모델 코호트에서 가장 높았습니다. 혈청 총콜레스테롤(TC) 농도는 모델 그룹과 HFHS 그룹 모두에서 유의하게 증가하였습니다. 간 조직의 오일 레드 O 염색은 모델 그룹에서 가장 두드러진 지질 축적과 공포화를 드러냈습니다. 한편, 모델 쥐들은 새로운 물체 인식 테스트에서 인지 결함을 보였습니다. 특히 HFHS 그룹과 CR 그룹도 인지 기능 저하 경향을 보였으나, 모델 그룹보다 경미한 수준으로, 이는 악화된 신경염증에 의해 유발된 AM...

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공개 사항

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감사의 글

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재료

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이 논문에 사용된 재료 목록
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ANY-mazeScienceSA225
Accu-Chek Active 혈당 모니터스위스, Roche Diagnosticsaccu check active
C75BL/6J 마우스베이징 HFK 바이오사이언스 유한공사No.110324241101250228
그립 강도 측정기미국, Columbus Instruments1027CSM-E54
고지방 및 고당 식단중국, Xietong 생명공학 유한공사XT303
HistoCore MULTICUT - 반자동 회전 마이크로토믹독일, 라이카RM2245
오일 레드 O 용액중국, 우한 서비스바이오 기술 유한공사G1260
최적의 절단 온도 화합물일본, 사쿠라4583
프로그래밍 가능 타이머 소켓중국, GONEOGND-1
Tissue Tech Prisma Plus일본, 사쿠라20B2X00014000034
Tissue-Tek TEC 6 임베딩 모듈일본, 사쿠라M01-021E-02
전체 콜레스테롤 (TC) 분석 키트중국, 쑤저우 그레이스 생명공학 유한공사G0909W
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참고문헌

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