연령별 피로토시스 바이오마커 분석 및 급성 호흡곤란 증후군에서의 비약물적 개입

요약

이 프로토콜은 급성 호흡곤란 증후군(ARDS)에서 연령별 열혈증 바이오마커를 식별하기 위한 통합 생물정보학 및 머신러닝 워크플로우와, LPS 유도 쥐 모델을 이용한 생체 내 방법론을 결합하여 스펙트럼 에너지, 물, 원적외선 방사선의 예비 효능을 실험적으로 검증합니다.

초록

급성 호흡곤란 증후군(ARDS)은 높은 이환율과 사망률을 가진 생명을 위협하는 염증성 폐 질환으로, 이 질환에서 열똥증이 중요한 병원성 기전으로 부상했습니다. 연령 관련 면역 및 분자 차이가 열혈증과 치료 반응에 영향을 미칠 수 있음을 고려하여, 본 연구는 연령별 열융증 관련 바이오마커를 규명하고 스펙트럼 에너지 수(SEW)와 원적외선 방사선(FIR)의 치료 잠재력을 평가하는 것을 목표로 했습니다. 프로토콜의 포괄적인 워크플로우는 전사체 데이터셋 처리, 연령 층화, 머신러닝, 면역 침윤 분석을 포함하여 연령별 허브 유전자를 식별합니다. 이 계산 단계 후에는 조직학적 평가, ELISA, 서부 블롯팅을 활용하여 조직학적 평가, ELISA, 서부 블롯팅을 사용하여 SEW+FIR 중재를 엄격히 평가하고 허브 유전자 발현을 검증하는 LPS 유도 ARDS 쥐 모델을 통한 생체 내 실험 검증이 이어집니다. 16개의 열똭증 관련 유전자가 확인되었으며, 그중 AXL과 GSDME는 고령 환자에서 ARDS 중증도와 주로 연관이 있었고, SPP1은 젊은 환자에서 더 관련이 높았습니다. 고령 환자에서는 M2 대식세포 풍부 및 면역 억제가 관찰되었으며, 젊은 환자에서는 염증 촉진 활성화가 관찰되었습니다. 기능 분석 결과 이 유전자들이 대사, 염증, 면역 조절 경로에 관여함을 밝혀냈습니다. 생체 내에서 SEW+FIR 치료는 폐 손상을 완화하고, 염증성 사이토카인(IL-1β, IL-18, IL-6, TNF-α 생성을 억제하며, AXL, GSDME, SPP1의 발현을 조절했습니다. 종합적으로 이 결과들은 ARDS에서 열혈증 관련 기전의 연령 의존적 차이를 강조하며, AXL, GSDME, SPP1을 추가 임상 검증이 필요한 예비 바이오마커 후보로 식별합니다. 현재 쥐 실험 모델에서 SEW+FIR은 전신 염증 완화와 열융증 관련 신호 조절을 통해 보호 효과를 입증하여, 비약물적 보조 전략으로서의 잠재력을 생체 내에서 근거로 뒷받침했습니다.

서론

급성 폐손상(ALI)/급성 호흡곤란 증후군(ARDS)은 주로 확산성 폐포 손상에 의해 발생하는 심한 저산소혈증과 비심성 폐부종이 급성 발병을 특징으로 하는 심각한 호흡기 질환입니다^. 폐 및 폐외 손상에 의해 유발될 수 있습니다. 폐 원인에는 감염성 폐렴, 위 내용물 흡인, 심각한 흉부 외상이 있으며, 폐외 유발 요인은 폐 이식 또는 혈전 절제술 후 발생하는 비폐 손상에 따른 전신 염증 반응(패혈증, 췌장염, 비흉부 외상, 심한 화상, 대량 수혈, 재관류 손상 등)에서 발생합니다 ^1,2. 지지 치료의 발전에도 불구하고, ARDS는 여전히 중환자 의학에서 주요 임상 과제로 남아 있으며, 전 세계적으로 높은 이환율과 사망률을 보이고 있습니다^. 따라서 ALI/ARDS의 발병 기전을 이해하는 것은 효과적인 치료법 개발에 매우 중요합니다.

열융증은 종양 억제와 종양 치료 맥락에서 광범위하게 특성화된 프로그램성 세포사멸의 염증성^형태로, 현재 ARDS 병태생리학에서 중요한 역할을 하는 것으로 인식되고 있습니다. 세포자멸사와 달리, 파이로토시스는 인플라마좀 활성화와 그에 따른 가스더민 D(GSDMD) 절단에 의해 매개되며, 막 기공 형성, 세포 용해, 인터루킨-1β(IL-1β) 및 인터루킨-18(IL-18⁾⁶과 같은 염증성 사이토카인의 분비를 이끕니다. ARDS에서는 폐포 대식세포, 상피세포, 내피세포에서 과도한 열발사(열융증) 활성화가 염증 반응 과도, 폐포모세혈관 장벽 파괴, 폐부종, 저산소혈증 진행에^{기여합니다.} 점점 더 많은 증거는 열융증 경로의 핵심 조절자를 표적으로 삼는 것이 ARDS ^8,9에서 염증을 완화하고 임상 결과를 개선하는 새로운 전략이 될 수 있음을 시사합니다. 그러나 ARDS의 감수성과 예후를 결정하는 주요 요인인 노화가 화염학 지형에 미치는 영향에 대해서는 여전히 중요한 지식 공백이 남아 있습니다. 현재 연구들은 종종 ARDS를 단일 질환으로 취급하며, 연령별 분자 요인이 개인 맞춤형 치료 반응을 결정할 수 있다는 가능성을 간과합니다.

최근 몇 년간, SEW 및 원적외선(FIR) 방출체와 같은 새로운 생물리학적 개입과 첨단 기능성 재료의 적용이 면역 반응을 조절하고 염증을 억제하는 비약물적 전략으로 주목받고 있습니다^10,11. 이 치료법들은 백혈구 증식과 식성 활동을 증진시키고, 조직 부종을 줄이며, 내독소에 의한 미세순환 장애(백혈구 부착, 적혈구 응집, 혈소판 활성화, 내피 손상 등)를 완화하는 것으로 보고되었습니다 12,13,14. 지지다당류(LPS) 유도 ARDS 쥐에서 SEW와 FIR 병용 치료는 혈청 및 기관지 폐포 세척액(BALF) 모두에서 피롭토틱 연쇄의 대표 하류 효과자인 IL-1β와 IL-18 수치를 유의하게 감소시켰습니다. 이 증거는 SEW+FIR의 보호 효과가 염증종에 의해 유발되는 세포 사死 억제를 통해 매개될 수 있음을 강하게 시사합니다. 더욱이 SEW는 독립적으로 또는 용매 배지로 적용되었을 때, 인터루킨-8(IL-8)과 종양괴사 인자-α(TNF-α)의 발현 수준을 낮추는 반면, 혈청 내 인터루킨-4(IL-4)와 인터루킨-10(IL-10)의 발현 수준을 증가시키고 조직병리학적 폐 손상을 완화하는 것으로 나타났다 15,16,17,18.

이러한 관찰을 바탕으로, 우리는 ARDS에서 SEW와 FIR 결합(SEW+FIR)의 치료 효능이 연령별 화염 경로를 조절하여 폐 면역 항상성을 표적으로 회복하는 능력에 기반한다고 가설을 세웠습니다. 현재 ARDS 관리의 주된 수단은 인공호흡기와 코르티코스테로이드와 같은 제한된 약물에 의존하고 있으며, 이들은 인공호흡기로 인한 폐 손상이나 전신 면역억제 위험을 자주 동반합니다¹⁹. 이러한 기존 치료법과 비교할 때, SEW+FIR은 2차 장기 독성 없이 초기 염증 연쇄 반응을 안전하게 완화할 수 있는 비침습적이고 비약물적인 대안을 제공합니다. 실질적으로 이 프로토콜은 경증에서 중등도의 ARDS에 대한 조기 보조 중재로 가장 적합합니다. 주요 한계는 중증 후기 섬유화성 ARDS에서의 효능이 입증되지 않았으며, 중환자 치료 환경에서 필수적인 생명 유지 수단을 대체할 수 없다는 점입니다. 가설을 검증하기 위해, 우리는 연령별 전사체 프로파일링과 머신러닝을 vivo 검증과 연결하는 통합 파이프라인을 개척했습니다. 이 접근법은 AXL, GSDME, SPP1을 새로운 연령별 치료 표적으로 식별할 뿐만 아니라, SEW+FIR이 ARDS에 대한 정밀한 비약물적 중재로서 임상적 잠재력을 갖는 최초의 기전적 증거를 제공합니다.

프로토콜

모든 동물 실험 절차는 베이징 중의대 동즈먼병원 실험동물복지윤리위원회(승인번호 19-54)가 승인한 지침에 따라 엄격히 수행되었으며, 연구 시작 전이었습니다.

데이터 소스 및 데이터 처리
두 개의 유전자 발현 데이터셋(GSE89953과 GSE116560)은 Gene Expression Omnibus(GEO) 데이터베이스에서²⁰번을 가져왔습니다. 다양한 연령대의 ARDS 환자들의 전체 폐포 대식세포 전사체 데이터를 포함하는 데이터셋 GSE89953는 차별 발현 및 네트워크 분석에 사용되었습니다. 기계적 환기 상태와 같은 임상 정보를 포함하는 GSE116560 데이터셋은 기계 학습과 예후 모델링에 사용되었습니다. 또한, 1보다 큰 상관관계 점수를 선별 기준으로 사용하여 포괄적인 인간 유전자 주석 데이터베이스에서 608개의 유전자를 추출하였습니다. 유전자 발현 데이터는 R의 limma 패키지를 사용해 정규화되었습니다. 임상시험 번호: 해당 없음.

DEG의 식별
GSE89953 데이터셋의 환자들은 두 가지 연령대, 즉 저연령(<45세)과 고연령(≥45세) 두 그룹으로 계층화되었습니다. 이 기준은 ARDS 발병 중위 연령이 약 45세(²¹세)임을 시사하는 역학적 증거를 바탕으로 선정되었습니다. 이 임계값의 견고성을 보장하기 위해 50세와 55세라는 대체 연령 기준을 사용하여 민감도 분석이 수행되었습니다. 이 분석들은 허브 유전자 식별과 모듈 클러스터링에서 일관된 패턴을 보여주어, 이후 후속 분석의 45년 기준을 통계적으로 검증했습니다. 데이터셋은 R의 limma 패키지를 사용해 정규화되었으며, 연령대 간 차별 발현 유전자(DEGs)를 경험적 베이즈 조절을 이용한 선형 모델링을 통해 확인하였다. 조정된 P 값이 0.05< |log₂ fold|를 가진 유전자는 변화합니다| ≥ 0.5명이 통계적으로 유의미한 DEGs로 간주되었습니다. 화산 플롯과 히트맵이 생성되어 R의 ggplot2 패키지를 사용해 DEG를 시각화했습니다.

열놉증 관련 유전자 식별 및 풍부화 분석
열융증 관련 유전자는 "pyroptosis" 키워드를 사용하여 유전자 주석 데이터베이스에서 검색되었습니다. DEGs와 열똭증 관련 유전자의 교차점은 차별발현된 열똥증 관련 유전자(DEPGs)로 정의되었습니다. 유전자 온톨로지(GO)와 교토 유전자 및 유전체 백과사전(KEGG) 경로 풍부도 분석을 R²²의 clusterProfiler 패키지를 사용하여 수행되었습니다. 생물학적 과정(BP), 세포 구성요소(CC), 분자 기능(MF) 범주가 주석을 달았으며, Z 점수 ≥ 1과 조정 P 값 0.05< 유의한 것으로 간주되었습니다.

가중 유전자 공동 발현 네트워크 분석 (WGCNA)
피롭토시스와 관련된 유전자 모듈을 식별하기 위해 WGCNA R 패키지를 사용하여 WGCNA가 수행되었습니다. 부호 네트워크는 스케일 프리 토폴로지²³을 보장하기 위해 소프트 임계값 멱제곱(β)을 26으로 구성했습니다. 모듈은 동적 트리컷 알고리즘을 통해 최소 모듈 크기가 30, 딥 스플릿은 2, 병합 임계값(절단 높이)이 0.25인 것으로 식별되었습니다. 모듈 고유유전자와 열융증 형질 간의 상관관계를 계산하였다. 유전자 집합 변이 분석(GSVA)은 MsigDB^24,25에서 다운로드한 대표 유전자 집합을 사용하여 선택된 모듈에 대해 수행되었습니다.

머신러닝
GSE116560 데이터셋은 45세를 기준으로 고연령과 저연령 그룹으로 나누었고, 두 그룹 모두 머신러닝 알고리즘을 사용해 분석되었습니다. 최소 절대 축소 및 선택 연산자(LASSO) 회귀분석은 R의 glmnet 패키지(버전 4.1-2)를 사용하여 구현되었으며, 최적 페널티 매개변수(λ)는 10배 교차 검증(1-SE 기준)으로 결정되었습니다. 랜덤 포레스트(RF) 알고리즘에서는 500개의 트리(ntree = 500)를 구성하고, 각 분할(mtry)에서 샘플링되는 특징 수를 전체 예측 변수의 제곱근으로 설정하여 모델 안정성을 보장했습니다. 두 방법에서 겹치는 유전자는 연령 특이적 서명 유전자로 정의되었습니다.

진단 모델의 구성 및 평가
확인된 서명 유전자를 기반으로 진단 예측 모델이 구축되었습니다. 이 모델을 개발하기 위해 로지스틱 회귀가 사용되었고, 예측력을 시각화하기 위해 노모그램이 만들어졌습니다. 모델의 성능은 수신기 작동 특성(ROC) 곡선을 사용하여 평가되었고, 곡선 아래 면적(AUC)을 계산하여 진단 정확도를 평가하였습니다. 내부 검증은 부트스트랩 재샘플링을 통해 수행되었습니다. 모델 안정성과 임상 유용성에 대한 추가 평가는 보정 플롯과 결정곡선 분석(DCA)을 사용하여 수행되었습니다.

면역 침윤 분석
LM22 서명 행렬을 기반으로 한 CIBERSORT 알고리즘을 사용하여 고연령 및 저연령 그룹의 면역 세포 구성을 추정하였습니다. 22가지 면역 세포 유형의 상대적 비율을 그룹 간 비교하였다. 면역 세포 하위 집합 간 허브 유전자의 차별 발현을 단일 샘플 데이터를 사용하여 분석하고 히트맵과 히스토그램으로 시각화하였습니다.

유전자 집합 풍부화 분석 (GSEA)
GSEA는 고연령군과 저연령군의 허브 유전자에 대해 별도로 수행되었습니다. 유전자 집합 풍부 분석(GSEA)은 교토 유전자 및 게놈 백과사전(KEGG) 유전자 세트를 활용하여 수행되었습니다. 유전자는 고발현군과 저발현군 간의 신호 대 잡음비(또는 폴드 변화)를 기준으로 순위가 매겨졌습니다. 그 후 1,000가지 순열을 사용하여 농축 및 정규화 농축 점수(NES)를 계산하여 유의미하게 농축된 경로를 식별하였습니다. 거짓 발견률(FDR)이 0.25 미만이고 명목상 P 값이 0.05 미만인 경로는 유의하게 풍부해졌습니다. 이 분석을 통해 각 허브 유전자가 조절할 수 있는 생물학적 경로를 추론하였습니다.

실험 동물
이 연구에는 6주에서 7주 사이의 SPF 수컷 Sprague Dawley 쥐 18마리± 180g 사용되었습니다. 상세한 공급업체 정보는 자재표에 나와 있습니다.

시약 및 기기
전자기장 처리 수질 준비 장치와 원적외선 방출 기기가 각각 스펙트럼 에너지 수(SEW)와 원적외선 복사(FIR)를 제공하는 실험적 개입에 사용되었습니다. ARDS를 모델링하는 데 지폴리당류(LPS)가 사용되었습니다. 사이토카인 수치(IL-1β, IL-18, IL-6, TNF-α)는 특정 ELISA 키트를 사용하여 정량화하였습니다. 단백질 발현 수준(AXL, SPP1, Caspase-3, GSDME, GAPDH)은 특정 1차 항체와 이에 대응하는 HRP 결합 2차 항체를 사용하여 평가하였습니다. 샘플 처리 및 분석은 생현미경, 미세토름, 고속 원심분리기, 초저온 냉동고, 마이크로플레이트 리더기 등 표준 실험실 장비를 사용하여 수행되었습니다. 모든 시약, 항체 및 기기와 해당 제조사에 대한 자세한 내용은 재료표에 제공되어 있습니다.

동물 분류와 모델링
18마리의 스프래그-도울리 쥐가 무작위로 대조군, 모델군, SEW+FIR 그룹에 배정되었으며, 그룹당 6마리씩 배정되었습니다. 각 그룹은 매일 체중 측정과 기록을 거두었습니다. SEW+FIR 그룹은 매일 20분간 온도 조절 환경(22 °C ± 2 °C)에서 FIR 치료(파장 4 μm–14 μm, 등면 표면에서 20 cm 방사선 거리)를 받았으며, 동시에 경구 가비지⁷ 용량으로 1 mL/100 g/d의 SEW를 받았습니다. 증류수는 대조군과 모델군에게 동일한 용량인 1 mL/100 g/day로 경구 투여되었습니다. SEW와 증류수는 60°C 온수에서 가열한 후 7일간 하루 한 번 투여되었습니다. 7일째, 수유 6시간 후, 모델 그룹과 SEW+FIR 그룹은 꼬리 정맥을 통해 2 mg/kg 용량의 LPS 용액을 주입했으며, 대조군은 체중 기준 2 mg/kg 용량의 0.9% 생리식염수로 투여되었습니다. 이 모델링 기법은 꼬리정맥을 통한 단일 LPS 주사만으로 전신 염증 반응을 유도하는 성숙하고 안정적인 방법으로 간주되었습니다. 모델링 그룹의 폐 병리에서 발견된 폐 조직은 ARDS 특성과 일치하였다²⁵. 체크포인트: 성공적인 ARDS 유도는 주사 후 16시간 이내에 눈에 띄는 무기력, 빈호흡, 체중 ~10% 감소로 표시됩니다²⁶.

쥐 관련 지표 수집
16시간 후, 세 그룹 모두 3% 펜토바르비탈 나트륨을 체중 무게당 30 mg의 복강 내 주사로 마취를 유도했다. 중요: 마취 깊이는 시술 개입 전에 페달 철회 반사가 상실된 것으로 엄격히 확인해야 합니다. 또한 엄격한 생물안전 프로토콜이 유지되었으며; 모든 LPS 오염 물질, 생물학적 액체, 동물 사체는 지정된 생물학적 위험 폐기물 용기에 폐기되어 적절한 소각을 진행했습니다. 복부 대동맥에서 5밀리리터의 혈액을 멸균관에 채취하였고, 혈청은 1,000 x g 에서 4 °C에서 20분간 원심분리하여 분리하였다. 혈청은 추가 분석을 위해 −80 °C에 보관되었다. 흉강 절개술과 오른쪽 폐폐폐문 결찰 후, 기관내캐뉼라를 통해 미리 냉각된 인산염 완충 생리식염수(PBS)로 왼쪽 폐를 세 번 세척하여 기관지 폐조 세척액(BALF)을 얻었습니다. BALF는 1,000 x g 압력으로 4 °C에서 10분간 원심분리되었고, 상청액은 −80 °C에서 저장되었습니다. 오른쪽 폐의 상엽을 제거하여 차가운 생리식염수로 혈액을 제거했습니다. 조직 무게에 비해 생리식염수 9부피가 추가되었고, 샘플은 안과 가위를 이용해 얼음 목욕에 다져졌다. 균질제를 이용해 10% 폐 조직 균질액을 제조한 후, 700 x g 에서 4 °C에서 15분간 원심분리하였습니다. 상청액은 추가 생화학적 분석을 위해 −80 °C에서 수집 및 저장되었습니다. 또한, 각 쥐의 오른쪽 폐 조직 일부를 4% 파라포름알데히드에 고정하여 조직학적 검사를 수행하였습니다.

관측 지표 및 탐지 방법
오른쪽 폐의 하엽은 표준 임베딩, 조직 절단, 탈왁, HE 염색, 색 분리, 탈수, 고정 후 4% 파라포름알데히드 고정 후 필름 밀봉을 통해 처리되었습니다. 각 그룹의 폐 조직에서 광학 현미경으로 관찰된 병리학적 변화가 관찰되었습니다.

치포 구조와 중격의 병리학적 이상, 염증 세포 침윤 정도, 고혈전, 폐모세혈관 부종을 광학 현미경으로 확인하였다. 베이징 중의대 병리학과가 관찰을 지원했습니다. 조직학적 폐손상 점수는 다음과 같이 계산되어 폐손상을 평가했습니다: 부상 없음 = 0, 필드 인원 25% 미만 부상 = 1, 필드 전체 25–50% 부상 = 2, 50–75% 부상 = 3, 75% 이상 부상 = 4. 10개 분야가 무작위로 선정되어 조사관들이 그룹에 대해 눈가림 없이 평가했습니다.

ELISA는 제조사의 지침에 따라 이전에 수집된 BALF 상청액, 폐 조직 균질 및 혈청 샘플에 대해 시행되었습니다. 샘플은 37°C에서 미리 코팅된 웰에서 90분간 배양되었습니다. 워시 버퍼로 5번 세척한 후, 37°C에서 60분 동안 비오티닐화 검출 항체(1:100 희석)를 적용하였다. 또 다른 세척 단계 후, HRP 결합체를 첨가하여 37°C에서 어두운 환경에서 30분간 배양했습니다. 이후 마이크로플레이트 리더기를 사용해 450nm 거리에서 흡광도를 측정하여 샘플 농도를 계산했습니다.

서부 블롯 분석을 수행하여 −80°C에 저장된 폐 조직 및 BALF 샘플에서 AXL, SPP1, caspase-1, GSDMD, caspase-3, GSDME, GAPDH의 발현 수준을 평가하였습니다. 단백질은 단백질 추출 키트의 지침에 따라 채취되어 용해되었습니다. 각 레인당 동일한 양의 단백질 추출물(40 μg)을 적재하고 SDS-PAGE로 분해했습니다. 그 후 폴리펩타이드를 분리하여 PVDF 막으로 전달했습니다. 막은 5% 무지방 건조 우유로 TBST에서 1시간 동안 상온에서 차단한 후, 4°C에서 1:1000 희석된 1차 항체와 함께 하룻밤 배양하였습니다. TBST로 세 차례 각각 10분씩 세척한 후, 막을 상온에서 차단액에서 1시간 동안 HRP 결합 2차 항체(희석된 1:5000)와 함께 배양했습니다. GAPDH는 내부 참조 단백질로 사용되었습니다. 단백질 밴드는 1–5분 노출 시간의 향상된 화학발광(ECL) 키트를 사용해 시각화되었고, 결과 분석 소프트웨어로 분석되었습니다. 표적 단백질의 상대적 발현 수준은 표적 단백질과 GAPDH의 비율로 계산되었습니다.

통계 분석
정량적 지수는 평균± 표준편차로 표현되었고, 통계 분석은 통계 소프트웨어를 사용해 수행되었습니다. Kruskal–Wallis 검정 또는 일방향 ANOVA를 사용하여 데이터가 정규 분포인지 여부에 따라 여러 그룹 간 차이를 비교하였습니다. 모든 통계는 양측 가설 검정을 사용하여 평가하였습니다. 차별 유전자 발현 및 면역 세포 침윤 프로파일링과 같은 다중 비교가 포함된 분석의 경우, P 값을 벤자미니-호흐버그 거짓 발견률(FDR) 방법으로 조정하였다. 조정 후 P 값이 0.05 이하인 경우 통계적으로 유의미한 것으로 간주되었습니다. 도표 작성에는 그래프 소프트웨어가 사용되었습니다.

결과

GSE89953 연령대에서 DEGs의 식별과 해당 기능 풍부도 분석
GSE89953 데이터셋의 원시 표현 데이터는 limma 패키지의 normalizeBetweenArrays 함수를 사용해 정규화되었으며(그림 1A), 정규화 전후의 박스플롯에서 샘플 간 일관성이 개선되었습니다. 정규화 행렬을 기반으로 한 차별 발현 분석에서는 228개의 DEG가 확인되었으며(벤자미니-호흐버그 보정 적용 p < 0.05, |log₂FC| ≥ 0.5), 이 중 16개는 유의미하게 상향 조절되었고 43개는 유의미하게 하향 조절되었습니다(그림 1B, C). 이 DEGs들을 데이터베이스의 열발병 관련 유전자와 교차시켜 16개의 차별발현 열녹토시증 관련 유전자(DEPGs)를 얻었습니다(

토론

염증 손상의 축적과 면역 조절 장애는 급성 호흡곤란 증후군(ARDS)의 특징으로, 심각한 폐 손상과 높은 사망률을 초래합니다. 복잡한 병인기전과 효과적인 치료법의 부족으로 인해 정확한 치료 표적을 식별하는 것이 치료 결과를 개선하는 데 매우 중요합니다. 새로운 증거들은 프로그램된 세포사의 한 형태인 열융증이 ARDS 진행에 중심적인 역할을 한다는 것을 시사합니다. 연령이 ARDS의 발병과 중증도에 중요한 영향을 미치는 요인임을 감안하여, 우리는 45세를 기준으로 연령별로 데이터셋을 층화하여 연령별로 열폐증 관련 주요 표적을 식별했습니다. 본 연구에서는 전사체 분석, 면역 침윤 프로파일링, 실험적 검증을 통합하여 연령별 분자 특성과 ARDS의 치료 표적을 탐구하였습니다. 열발증 관련 유전자 발현에 집중하고 머신러닝을 활용함으로써, 연령대별 ARDS 진행에 진단적·기전적 관련성을 보이는 AXL, GSDM, SPP1 등 뚜렷한 허브 유전자를 확인했습니다. 방법론 중심 연구로...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
항-AXL 항체	앱캠	AB215205
항-카스파제-3 항체	앱캠	AB184787
항-GAPDH 항체	앱캠	AB8245
항GSDME 항체	앱캠	AB215191
항-SPP1 항체	앱캠	AB307994
생체현미경	올림푸스, 일본	BH2
FIR 기기	광둥 JFC 그룹	JF-802
염소 항토끼 IgG H& L (HRP)	앱캠	AB6721
그래프패드 프리즈 10.1.2	그래프패드 소프트웨어	-
고속 원심분리기	서모, 미국	소르발 ST16R
IL-18 ELISA 키트	장쑤메이비아오 생명공학유한회사.	MB-1735B
IL-1&베타; ELISA 키트	장쑤메이비아오 생명공학유한회사.	MB-1588B
IL-6 ELISA 키트	장쑤메이비아오 생명공학유한회사.	MB-50054A
이미지J	NIH	-
지지방다당류(LPS)	시그마, 미국	L6511
수컷 SPF 스프래그 도울리 쥐 (6-7주)	베이징 HFK 바이오사이언스 유한회사, 중국	SCXK(베이징)2019-008 (면허)
마이크로플레이트 리더기 (Varioskan Flash)	써모 사이언티픽	바리오스칸 플래시
미세토름	라이카	RM2235
R 소프트웨어 (limma, clusterProfiler, WGCNA, glmnet, randomForest)	R 통계 컴퓨팅 재단	-
SEW 준비 도구	광둥 JFC 그룹	JF-139
SPSS 26.0	IBM	-
테이블 밸런스	상하이 캐니 정밀 기기 유한회사.	HC· TP11· 10
TNF-&α; ELISA 키트	장쑤메이비아오 생명공학유한회사.	MB-50051A
초저온 냉동고	서모, 미국	포르마 900 시리즈