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방법 논문

제브라피시 악성 및 비악성 림프구를 채취하는 새로운 규모 생검 방법

120 조회수

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DOI:

10.3791/72153

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2026년 8월 7일

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cell Biology, University of Oklahoma Health Sciences Center, 2Division of Pediatric Hematology-Oncology, Department of Pediatrics, Stephenson Cancer Center, 3Department of Microbiology & Immunology, University of Oklahoma Health Sciences Center

이 논문에서

요약

새로운 규모 생검 방법은 살아있는 제브라피시에서 급성 림프구성 백혈병 세포를 채취할 수 있게 합니다. 결과는 야생형(WT) 어류 비늘에서 풍부한 림프구가 존재하며, ALL(급성 림프구성 백혈병) 어류 비늘에서 림프구가 극적으로 증가함을 보여줍니다. 이 기법은 표피의 정상 및 악성 림프구를 최소 침습적으로 연구할 수 있게 합니다.

초록

제브라피시(Danio rerio)는 림프산과 림프암 연구에 강력한 모델로, 제브라피시와 인간은 B세포와 T 세포를 포함한 유사한 적응 면역 체계를 공유합니다. 림프아세포 특이적 인간 MYC(hMYC)를 발현하는 어류를 포함해 여러 D. rerio T세포 급성 림프구성 백혈병(T-ALL) 모델이 기술되어 있습니다. 우리는 rag2:hMYC 어류도 B세포 급성 림프구성 백혈병(B-ALL)을 발병시키며, 이를 모든 유형 연구에 유용하게 만들었다고 보고했습니다. 제브라피시 ALL 모델의 한계는 ALL의 연속 샘플링을 위한 비치명적 방법이 없다는 점입니다. 이를 해결하기 위해 우리는 살아있는 제브라피시에서 모든 세포를 채취하는 새로운 '스케일 생검' 방법을 개척했습니다. 하지만 정상적인 제브라피시 비늘에 어떤 림프구가 존재하는지에 대한 지식은 매우 부족합니다. 따라서 정상적인 표피 림프구 정체를 정의하기 위해 rag2:hMYC가 결여된 림프구 표지 형질전환 계통에 대해 스케일 생검을 수행하였습니다. 우리는 일반 현미경과 공초점 현미경을 사용해 비늘을 분석했고, 풍부한 표피 림프구를 발견했습니다. 또한 T-및 B-ALL이 포함된 물고기 비늘을 분석하여, 여러 비늘에서 ALL 세포의 융합 시트에서 림프구가 현저히 증가하는 것을 보였습니다. 다음으로 형광활성화 세포 분류(FACS)를 사용하여 비악성 및 전부 림프구를 비생체 내 비비검사에서 정제하였습니다. 동일한 물고기의 비늘이나 다른 조직에서 모든 세포의 유세포 유전자 발현이 다른 모든 세포와 유사하다는 것을 보여주었습니다. 또한 스케일별로 정제할 수 있는 정상 T, B, T-ALL, B-ALL 세포의 수를 정량화했습니다. 전반적으로 스케일 생검은 비살상적이고 최소 침습적인 방법으로 제브라피시 표피 림프구를 연구할 수 있는 기술을 제공하여, 악성 샘플 분석을 포함한 체외 연구를 가능하게 합니다.

서론

포유류 피부의 장벽 기능과 면역에서의 역할은 1,2,3. 포유류 림프구는 피부 면역에 기여하며, 세포독성 T 세포는 표피에, B, T, 자연 살해(NK) 세포는 진피 1,3,4,5에 존재합니다. 제브라피시는 이러한 림프구를 가지고 있으며, 표면 면역글로불린, T 세포 수용체, 주요 조직적합성 복합체(MHC) 수용체, 사이토카인 및 그 수용체, 그리고 기타 면역 분자를 가지고 있어 포유류 면역학적 특징 6,7,8,9를 공유합니다. 최근 제브라피시 피부와 비늘에 대한 연구에서는 상피 T 및 B 세포 등 다양한 피부 림프구 집단과 T 세포 수송 및 항원 감시를 촉진하는 림프구 네트워크가 확인되었습니다 12. 철골어류와 포유류 림프구 간의 유사성은 D. rerio를 림프구성 및 림프구 기능, 그리고 급성 림프모세포 백혈병(ALL)을 포함한 림프구성 질환을 연구하는 강력한 생체 내 모델로 만듭니다.

이전 연구에서는 T-계통과 B-계통 모두 (T-ALL, B-ALL) 모두 형질전환 rag2:hMYC 제브라피시에서 발생하여, 이 계통이 ALL 유형13, 15, 21, 22 모두를 연구하는 데 유용함을 보여주었습니다. D. rerio ALL 모델의 주요 한계는 특히 종단 발현 연구나 약물 시험 연구에서 개별 동물로부터 연속 ALL 샘플을 수집하는 방법이 없다는 점입니다. 역안과 혈액 채취와 같은 이전 방법들은 D. rerio의 크기가 작아 연속 혈액 채취가 어렵기 때문에 기술적으로 도전적이었습니다23. 따라서 대부분의 연구자들은 모든 세포를 얻기 위해 제브라피시를 안락사시킵니다. 이는 실험실과 대부분의 현장에서 흔히 시행되어 왔지만, 살아있는 동물에 대한 종단 실험을 수행하는 것은 불가능하다. 이를 극복하기 위해 최근 비치명적 비늘 생검 전략10을 사용해 제브라피시 비늘에서 상피성 T 및 B 림프구를 기술하였습니다. 또 다른 최근 연구에서는 인접한 비늘12 사이에 제브라피시 표면 또는 근처에서 T 세포 저장소가 있음을 보여주었습니다. D. rerio는 수백 개의 비늘을 보유하고 있으며, 제거 후 며칠 만에 빠르게 재생됩니다. 이러한 발견과 특징들은 제브라피시 비늘이 안락사가 필요 없는 림프구의 공급원임을 시사하며, 살아있는 어류에서 종단 연구가 가능함을 보여준다.

여기서는 림프구 특이적 형광체 표지자를 가진 어류에서 얼마 표피 림프구를 수집하는 스케일 생검 방법을 설명합니다. T-계통 세포를 연구하기 위해 잘 확립된 lck:GFP 어류와 유사한 lck:mCherry 계통을 사용했습니다; 두 세포 모두 T 및 T-ALL 세포10, 13, 15, 20을 표지합니다. B-계통 세포를 연구하기 위해 우리는 형광 표지된 B 및 B-ALL 세포 10,13,17을 가진 cd79a:GFP와 cd79b:GFP 형질전환 어류를 사용했습니다. 이 각 선들은 형광 현미경과 유세포 세포 분류 정제를 통한 시각화를 가능하게합니다. 우리는 생검 후 비늘을 조사하고, 비늘 내 림프구의 고해상도 이미지를 생성하고, qRT-PCR을 이용한 표피 림프구 유전자 발현을 확인하며, 같은 물고기의 다른 림프구 조직의 림프구와 비교하고, 유세포분석/형광 활성화 세포 분류를 통해 비늘당 림프구를 정량화했습니다. 요약하자면, 이 프로토콜은 실험 서열에서 여러 시점에 걸쳐 개별 동물을 종방향으로 샘플링하는 등 살아있는 제브라피시에서 림프구를 얻는 간단하고 실용적인 방법을 설명합니다. 이 방법은 제브라피시 림프구 생물학, 백혈병 진행, 약물 반응 또는 개별 제브라피시의 반복 샘플링이 필요한 기타 종단 실험 설계를 연구하는 데 목적이 있습니다. 우리는 형광 표지된 림프구 집단을 가진 성체 형질전환 제브라피시를 사용하여 프로토콜을 개발하고, 형광 현미경, 유세포분석/형광 활성화 세포 분류, RNA 발현 분석 및 생존 가능한 림프구가 필요한 기타 체외 연구 등 후속 응용에 대해 검증했습니다.

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프로토콜

모든 동물 시술은 오클라호마 대학교 보건과학센터의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(프로토콜 24-028-EAH 및 25-068-EACHIR)의 승인을 받았습니다. 이 프로토콜은 살아있는 제브라피시 비늘에서 정상 및/또는 악성 림프구를 분리하고 분석하는 접근법을 제시하며, 이러한 절차의 목적, 실행 및 원리에 대한 자세한 내용을 제공합니다.

주의: MS-222는 유해한 화학 마취제이므로 실험실 장갑, 눈 보호구, 실험실 코트 등 적절한 개인 보호 장비(PPE)를 착용하여 다루어야 합니다. MS-222 용액은 기관 화학 폐기물 지침을 준수하여 폐기하세요. 바늘과 겸자를 다룰 때는 날카로운 부상을 방지하기 위해 주의하세요. 모든 생물학적 샘플을 잠재적으로 생물학적 위험으로 간주하고, 기관의 생물안전 절차에 따라 폐기물을 처리해야 합니다.

1. 분류 매체 준비

  1. RPMI 1640 배지액 1×에 태아 소 혈청(FBS) 1%와 페니실린/스트렙토마이신 1%를 보충합니다.
    참고: RPMI 1640 배지는 림프구 생존력을 체 외에서 유지합니다. RPMI 1640은 0.9× PBS로 대체할 수 있습니다. 태아 소 혈청(FBS)은 세포 생존 능력을 촉진하는 성장 인자를 제공합니다. 페니실린과 스트렙토마이신은 박테리아 오염을 제한합니다.
  2. 매체를 1.5mL 마이크로 원심분리관에 500μL 용량으로 넣고, 각 튜브는 10–20 스케일에 맞춰 설계됩니다. 분류용 미디어 튜브는 얼음 위에 보관하세요.

2. 제브라피시 마취, 형광 현미경 스크리닝 및 영상

  1. 기관 동물 관리 지침에 따라 어류 시스템에서 추출한 물을 사용해 완충 0.02% 트리카인 메탄설포네이트(MS-222)로 D . rerio 를 마취합니다.
  2. 진정 후에는 충분한 시스템 수분(및 0.02% MS-222)이 포함된 세포 배양 접시에 조심스럽게 넣어 이후 취급 시 수분을 유지합니다.
  3. 마취된 어류를 에피형광 현미경으로 검사하고 영상화하여 형질전환유전자에서 나오는 형광을 감지합니다. 이 단계는 생검을 위한 형광 척도를 식별합니다.
    참고: 형광 형질전환 유전자가 없는 계통은 표준 광학 현미경으로 관찰할 수 있습니다.
  4. 형광을 사용해 T 세포(lck:GFP 또는 lck:m체리 피쉬) 또는 T-ALL(rag2:hMYC + lck:GFP 또는 lck:m체리 피시)을 식별합니다. T-계통 세포는 이 선들에서 밝게 형광을 발하며; B-ALL 세포는 lck:GFP와 lck:m체리 배경13, 15, 21에서 희미한 형광을 띱니다.
  5. 표피 B 계통 표지된 cd79a:GFP 또는 cd79b:GFP 어류(rag2:hMYC 유무 여부 모두 포함) 를 대상으로 GFP를 사용하여 생검 비늘을 선별하여 선별합니다.
  6. 생검 전에 제브라피시 위치 조정과 현미경 설정 연습을 하세요, 영상 촬영이 필요하다면
    참고: 영상 및 생검은 0.02% MS-222를 이용한 5–7분간의 진정이 필요합니다. 수술부 움직임을 지속적으로 모니터링하세요. 수술술 움직임이 현저히 느려지거나 멈추면 즉시 마취제가 없는 수역으로 옮기고 생검을 중단하세요. 영상 및 생검 중 피부, 오페르클럼, 아가미에 1–2분마다 50–100 μL의 마취제 함유 어선 물을 재발라하여 표면 수분을 유지하세요.

3. 저울 수집 및 준비

  1. 생검을 위해 물고기를 위치시키려면 진정된 물고기를 세포 배양 접시에 옆으로 눕혀 놓으세요.
  2. 생검 중 물고기가 미끄러지지 않도록 선형 또는 V자형 컷아웃이 있는 축축한 스펀지를 사용해 세포 배양 접시에 넣어 물고기를 받치세요.
  3. 또는 시스템 수위가 세포 배양 접시 바닥을 간신히 덮을 정도로(표면을 촉촉하게 유지할 만큼) 표면장력으로 물고기를 안정시키도록 하세요.
  4. 영상 및 생검 중 수분 유지와 마취를 유지하기 위해 시스템 물에 준비된 0.02% MS-222 약 ~50–100 μL 양을 주기적으로 오퍼큘럼과 아가미에 바릅니다.
  5. 형광 현미경을 이용해 림프구가 풍부한 고형광 비늘 또는 ALL 세포를 선택해 생검을 수행합니다.
  6. 첫 번째나 두 번째 수평 색소 줄무늬 내에 단일 고형광 영역에서 인접한 비늘 10–20개를 채취하세요.
    참고: 영상 촬영에는 일반적으로 하나의 체중계로 충분합니다. 10–20개의 스케일 집합은 일반적으로 WT 어류에서 >,1,000개의 림프구를 얻을 수 있으며, 유동세포검사(flow cytometry)와 qRT-PCR과 같은 하류 분석에 권장됩니다.
  7. 주력 손(바늘): 31게이지 주사기 바늘을 사용해 바늘 끝을 비늘 뒤쪽 가장자리 아래에 부드럽게 대고 앞으로 뒤집으세요(즉, 두팔라드). 각 물고기마다 다른 멸균 바늘을 사용하세요. 물고기 사이에 깨끗한 겸자; 기관 절차에 따라 불임 수술을 하십시오.
    참고: 바늘로 비늘을 들어 올리는 것이 겸자만 사용하는 것보다 더 바람직한데, 이는 표면 긁힘을 최소화하기 위해 비늘을 들어 올려줍니다. 이로 인해 비늘 아래의 섬세한 표피층이 비늘 표면에 잘 붙어 있어 세포 수율을 극대화하는 데 매우 중요합니다.
  8. 비우세 손(겸자): 바늘로 비늘을 앞으로 뒤집은 상태로 잡고, 겸자로 비늘의 단단한 바깥 표면을 잡습니다. 부드러운 동작으로 주머니에서 저울을 꺼내세요.
    참고: 경미한 출혈은 일반적으로 스스로 제한되는 스케일 추출 부위에서 발생할 수 있습니다.
  9. 과도한 출혈이 발생하면 겸자로 부드럽게 압력을 가하고 시스템 물에 0.02% MS-222로 잠시 세척하세요.
    참고: 지혈은 다음 체중계로 넘어가기 전 몇 초 내에 달성할 수 있습니다.
  10. 여러 비늘을 생검하려면, 물고기 한 마리당 10–20개의 비늘을 채취하고, 인접한 비늘을 한 수평 색소 줄로 제거하세요. 여러 몸 부위나 양쪽 부위를 모두 제거하지 않습니다.
  11. 개별 비늘을 순차적으로 뽑고, 채취 시 겸자 끝에 고정하여 내측 비늘 표면이 위를 향하게 합니다.
  12. 축적된 비늘이 이후 비늘 제거에 방해가 되지 않도록 각 비늘을 먼저 앞으로 뒤집고, 그 뒤쪽 가장자리에서 잡습니다. 5개의 비늘을 채취할 때마다, 또는 겸자 끝에 추가 비늘을 단단히 고정할 수 없을 때는 분류 매체가 담긴 관으로 비늘을 옮깁니다.
  13. 비늘 채취 후에는 샘플을 최대한 빠르게 처리하세요. 즉시 핀셋에서 비늘을 1.5mL 튜브에 500 μL 냉분류 배지를 얼음 위에 옮겨 세포 생존을 유지합니다. 이후 샘플을 채취하기 전에 70% 에탄올로 어류 사이의 겸자를 오염 제거하세요. 각 어류에서 별도의 튜브에서 수집, 해리, 그리고 하류 분석을 위한 공정 규모가 이루어집니다.
  14. 비늘을 수집한 후에는 즉시 MS-222가 없는 담수 시스템이 있는 회수 어항으로 물고기를 옮기세요.
  15. 호흡과 자세가 정상으로 돌아올 때까지 수술의 움직임과 수영 행동을 모니터링하세요. 생검 부위에서 지속적인 출혈이나 고통 징후가 있는지 관찰한 후 물고기를 순환계로 돌려보내세요.
  16. 정상적인 평형 상태가 되면 물고기를 원래 어항으로 돌려보내고 수영을 재개하세요.

4. 세포 해리 및 필터링

  1. 튜브 바닥에 있는 저울을 확인하세요. 비늘은 해리 전에는 육안으로 쉽게 보입니다. 멸균 플라스틱 마이크로튜브 공약 균질기를 사용하여 30–60초 동안 부드럽고 통제된 수동 압력을 가하여 비늘을 해리합니다.
  2. 천천히 회전하며 위아래로 움직이며 표피 세포를 방출하면서도 비늘의 과도한 전단을 피하세요.
  3. 분리 매체가 눈에 띄게 탁해질 때까지 해리를 계속하세요.
    참고: 이 시술의 성공은 배지가 흐려지는 것으로 나타났으며, 이는 해방된 세포가 많이 현탁되어 있음을 나타냅니다.
  4. 균질화된 샘플을 35 μm 나일론 메쉬 필터를 통과시켜 이물질을 제거하고 단일 세포 현탁액을 생성하여 유세포분석/형광 활성화 세포 분류를 수행합니다.
  5. 초기 여과 후 세포 집합체가 보이면, 유동 세포분석 직전에 신선한 35 μm 메시 필터를 한 번 더 통과시킵니다. 세포 손실을 최소화하기 위해 총 여과를 2회 이하로 반복하세요.

5. 유세포 분석

  1. 유세포분석으로 샘플을 분석합니다.
    참고: 유세포분석은 형광 활성화 세포 분류 정제 또는 RNA 추출 전에 시행되어 샘플 조성을 평가할 수 있습니다.
  2. GFP 검출을 위해 488nm 레이저, mCherry 검출을 위한 561nm 레이저가 장착된 유세포계를 사용하여 단일 세포 현탁액액을 분석합니다.
  3. 전방향 산란(FSC)과 측면 산란(SSC) 파라미터를 사용하여 잔해를 배제합니다. 앞서 설명한 림프구 게이트10, 13, 21을 사용하여 림프구를 식별합니다.
  4. 싱글렛 게이팅(즉, SSC-면적[SSC-A]와 SSC-높이[SSC-H]]) 매개변수를 통해 세포 집합체를 배제합니다.
  5. 프로피듐 요오다이드(PI) 또는 동등한 생염료/죽음 염료를 사용하여 세포 생존성을 평가합니다. PI 양성 세포는 이후 분석 및 분류 절차에서 제외합니다.
  6. 비형질전환 제브라피시 대조군과 단색 형광 형질전환 대조군을 사용하여 형광 게이트를 구축합니다. 음성 대조군에 비해 GFP 양성 및 mCherry 양성 집단을 정의합니다.
  7. 유세포측 표준(FCS) 파일을 내보내고 유세포측 분석 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석합니다.

6. 형광 활성화 세포 분류

  1. 세포를 분류할 때는 GFP 및 mCherry 검출을 위해 488nm 및/또는 561nm 레이저가 장착된 형광 활성화 세포 분류기를 사용합니다.
  2. 형광 기반 분류 전에 순차적으로 림프구(FSC/SSC), 단골(SSC-A 대 SSC-H), 생존 가능한 세포(PI-음성)를 게이트로 분류합니다.
  3. 음성 대조군 샘플에서 생성된 형광 게이트를 사용하여 GFPlo,GFP hi, mCherry 양성 집단을 정의합니다.
  4. GFPlo,GFP hi, mCherry 양성 집단을 냉각된 분류 배지가 담긴 수집관에 분류합니다.
    참고: 이 연구에서 lck:GFP 계통을 다룬 연구에서, 높은 GFP(GFP 하이)와 낮은 GFP(GFP lo) 세포는 이전에 설명한 10,13,15,21의 뚜렷한 림프구 계통입니다.
  5. 분류된 샘플을 얼음 위에 보관한 후 즉시 RNA 분리와 같은 후속 적용으로 넘어갑니다.

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결과

위의 단계를 따라 성체 제브라피시에서 현미경으로 형광 림프구나 ALL을 검사했습니다. 야생형(WT) lck:GFP 어류는 주로 흉선 부위에서 형광을 보였고, cd79b:GFP 어류는 머리/아가미 부위에서 형광을 보였으며, 이는 이전 관찰10 과 일치한다(그림 1A, 왼쪽). 반면, 이중 형질전환 rag2:hMYC; lck:GFP/lck:m체리 어류 중 T-ALL 또는 rag2:hMYC + cd79b:GFP 어류는 B-ALL을 가진 경우 몸 전체에 밝고 확산된 형광을 보였으며(그림 1A, 오른쪽), 이는 생검에 많은 고형광 척도를 제공한다.

제거 후에도 비늘은 온전하게 남아 표면...

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토론

이 프로토콜은 비악성 림프구와 급성 림프구성 백혈병(ALL) 세포를 포함한 제브라피시 표피 림프구를 채취하는 비치명적 척도 생검 방법을 설명합니다. 제브라피시는 림프구성 및 림프구 악성 종양의 잘 확립된 모델이지만, 림프구 획득 대부분 방법은 안락사와 조직 해부를 필요로 하여, 단일 동물에 대한 종종 연구를 불가피하게 합니다8, 10, 13, 15. 비늘은 풍부한 림프구가 있는 실험적으로 접근 가능한 상피 구획을 제공하며, 성체 제브라피시는 수백 개의 비늘이 제거 후 빠르게 재생되기 때문에 반복적으로 샘플링할 수 있습니다10,24. 따라서...

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공개 사항

저자들은 금전적 이해 충돌이 없습니다.

감사의 글

이 프로젝트에 기여해 주신 아미라 하산 박사님, 의학 경영학 박사님과 브래시 우드님께 감사드립니다. 연구는 OUHSC 스티븐슨 암 센터 파일럿 보조금 프로그램, 오클라호마 성인 줄기세포 연구 센터(OCASCR), 프레스비테리언 헬스 재단 팀 과학 및 씨앗 보조금 프로그램, W.J. 존스 가족 재단의 지원을 받았습니다. OUHSC 스티븐슨 암센터 분자생물학 및 세포분석 연구 코어의 FACS(FACS)는 NCI 암센터 지원 보조금 P30 CA225520의 지원을 받았습니다. 이 연구는 미국 암 학회(ACS-POST-BACC-23-1156971-01-DPBACC)의 일부 자금 지원을 받았습니다. 이만 오웬스는 ACS 학사 후 'STRONG' 프로그램 장학생입니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
시약 및 소모품:
트리카인 메탄설포네이트 (MS-222)Sigma-AldrichE10521마취제
RPMI 1640 배지ThermoFisher11875093림프구 생존율을 위한 배지
Fetal Bovine SerumSigma-AldrichF2442세포 생존율을 위해
페니실린-스트렙토마이신ThermoFisher15140122박테리아 오염 제한
70% 에탄올ThermoScientificT038181000포츠를 살균
CellPro 1x PBSVWR104027-280무균 물로 0.9x로 희석
프로피디움 아이오다이드InvitrogenP1304MMP흐름/FACS를 위한 생/사 세포 구별
Cut Goods Misc-Pn; 사이즈: 12 x 12 IN. 35um 필터 페이퍼
Lab Pak 03-35/16		Sefar세포 분류를 위해
참조: Burroughs-Garcia, J., Hasan, A., Park, G., Borga, C., Frazer, J. K. Isolating malignant and non-malignant b cells from lck:Egfp zebrafish. J Vis Exp. 10.3791/59191 (144), (2019).
필터 페이퍼의 대체품: EASYstrainer Cell Sieves, Greiner Bio-OneGreiner89508-342세포 분류
Eppendorf® Flex-Tubes® Microtubes, 1.5 mlEppendorf®20901-551세포 분류를 위한 마이크로센트리퓨지 튜브
UltiCare VetRx U-100 인슐린 주사기 3/10cc 31G x 5/16" 하프 유닛 마킹UltiCare9436규모 생검을 위해
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Bel-Art® 일회용 피스톤Bel-Art® BAF199230001규모 분리를 위해
E-Z Pik 6-Piece 핀셋 세트Aven18480EZ규모 생검을 위해
Corning® 현미경 슬라이드, 한 면 서리 덧칠, 한 끝Sigma-AldrichCLS294875X25이미징을 위해
커버 글래스Sigma-AldrichC8181이미징을 위해
SlowFade™ 글래스 소프트-셋 안티페이드 마운탄트, DAPI 포함ThermoFisherS36920슬라이드에 스케일 장착
RNeasy Mini KitQiagen74104RNA 추출
장비:
Nikon AZ100 현미경 및 DS-Qi1MC 카메라Nikon형광 현미경 및 카메라
CFX96 Touch-PCR 시스템Bio-Rad3600037
CytoFLEXBeckman-Coulter유세포 분석
Leica SP8Leica공초점 현미경
소프트웨어:
Kaluza 분석 소프트웨어 버전 2.1Beckman-Coulter유세포 분석
참조: https://www.beckman.com/flow-cytometry/software/kaluza/downloads
LAS-X 소프트웨어 버전 3.7.4.23463Leica공초점 현미경
참조: https://www.leica-microsystems.com/products/microscope-software/p/leica-las-x-ls/downloads/

참고문헌

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  5. Lafouresse F, Groom JR. A task force against local inflammation and cancer: lymphocyte trafficking to and within the skin. Front Immunol. 2018;9:2454. doi:10.3389/fimmu.2018.02454
  6. Danilova N, Bussmann J, Jekosch K, Steiner LA. The immunoglobulin heavy-chain locus in zebrafish: identification and expression of a previously unknown isotype, immunoglobulin Z. Nat Immunol. 2005;6(3):295–302.
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