여기 마우스 표피 신경 능선의 줄기 세포를 (에피 NCSC) 분리하기 위해 방법을 보여줍니다. 기술과 관련된 마이크로 해부, 수염 모공 볼록한 분리하고 조직 문화에 그것을 placeing. 사일 - 에피 NCSC 3 이내 하층에 팽창의 explants에서 이민을 시작합니다.
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이 논문에서
요약
초록
에피 NCSC는 성인 위치, 모낭의 팽창에 배아 신경 문장의 잔해입니다. 그들은 뉴런, 신경 세포 지원, 평활근 세포, 뼈 / 연골 세포와 melanocytes를 포함한 차별화된 세포 유형의 다양한 배열을 생성하는 생리 특성을 보유 multipotent 줄기 세포입니다. 에피 NCSC는 털이 피부에 쉽게 접근할 수 있으며 줄기 세포의 높은 순수 인구로 격리 수 있습니다. 이 동영상은 수염의 모공에서 마우스 에피 NCSC의 문화를 준비 상세한 프로토콜을 제공합니다. 성인 마우스의 수염 패드는 제거하고, 수염 머리카락이 해부하는 것입니다. 모공은 다음 팽창 지역 위 아래 길이 방향과 이후 transversely 절단됩니다. 팽창은 콜라겐 캡슐에서 제거하고 문화 접시에 배치됩니다. 에피 NCSC 3 ~ 4 일후 팽창의 explants에서 이민을 시작합니다.
프로토콜
성인 마우스 위스커의 모공에서 벌지의 해부
- 우리는 10 주 6 개월 생쥐를 사용합니다. 젊은 생쥐는 종종 더 많은 세포를 얻을 수 있습니다. betadine (요오드 용액)와 약 3 분 과산화수소 (약국에서 구할 수)의 1시 1분 혼합으로 마우스와 잠수함 전체 동물을 안락사.
- 물총 전체 마우스, 특히 얼굴의 75 % 에탄올과 지역, 그리고 층류 흐름 후드의 해부 현미경으로 마우스를 수행합니다.
- 조심스럽게 머리 전구로 절단하고, HBSS에 수영장을 피하기 위해, 수염 패드를 해부하다.
- 상온에서 HBSS에 수염 머리카락과 수영장을 해부하다. 포셉로 머리 뿌리 옆에있는 피부를 개최하고, 다음 바로 가위로 뿌리 주위를 절단하여이 작업을 수행합니다. 머리 전구를 손상하지 않도록 깊이 잘라.
- 수염 패드의 수염 뿌리를 허용하고 신선한 HBSS와 새 접시에 넣어.
- 수염의 모공이 청소까지, 버퍼의 squirts을 느슨하게 adipous과 피부 조직을 플러시. 필요한 경우, 수염 뿌리에 신경을 절단하고 힘든하고 HBSS의 반복 플러시하여 자기편 조직을 제거합니다.
- 뿌리 옆에있는 피부 부분에 집중을위한 microforceps를 사용하여 날카롭게 텅스텐 바늘을 사용하여 S....
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토론
자신의 철새 능력을 가진, 에피 NCSC는 체외에서 확장 가능한 줄기 세포의 높은 순수 인구로 격리 수 있습니다. 성인 위치에서 배아 잔존물로서, 에피 NCSC는 향후 세포 대체 요법, 생명 의학 공학 및 / 또는 재생 의료에 대한 잠재적으로 매력적인 후보입니다. 그들이 바람직한 특성을 보여 우리는 척수 손상의 마우스 모델에서 에피 NCSC을 테스트했습니다. LongSAGE (www.ncbi.nlm.nih.gov / 지리적, 시리즈 번호 GSE4680)에 의해 유전자 발현 프로 파일링을 통해 우리는 보여주었다, 예상대로, 배아 신경 크레스트 세포 에피 NCSC 공유 인근의에서 다른 유사한 유전자 발현 패턴을 표피 줄기 세포와 다른 피부 주민 줄기 세포 / progenitors.
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감사의 글
; 사우스 이스턴 위스콘신의 바이오 메디컬 기술 제휴, Milwauke, WI, 미국, 브라이언 Riesch 마비 재단, 밀워키, WI, 미국, 이글스의 성 주문, 중서부 장 USPHS 부여 NS38500, 신경계 장애의 국립 연구소와 stroke, NIH, 미국 : 지원 미국, 국립 척수 부상 협회, 밀워키 장, 미국, 노스 이스트 잉글랜드 줄기 세포 연구소, 뉴캐슬 대학, 영국.
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참고문헌
- Sieber-Blum, M., Grim, M., YF, H. u, Szeder, V. Pluripotent neural crest stem cells in the adult hair follicle. Dev. Dyn. 231, 258-269 (2004).
- Sieber-Blum, M., Grim, M. The adult hair follicle - cradle for pluripotent neural crest stem cells. Birth Defects....
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재인쇄 및 허가
