Murine 난황과 AGM에서 조기 조혈 줄기 세포의 분리

요약

이 비디오는 태아의 난황과 대동맥 - 생식선 - mesonephros 영역을 미세 절개하다 및 조혈 줄기 세포를 정렬 유동세포계측법를 사용하는 방법을 보여줍니다.

초록

마우스 배아에서 초기 조혈은 난황과 대동맥 - 생식선 - mesonephros 영역을 포함 여러 장기에 동시에 발생합니다. 이 지역은 태아의 혈액 시스템을 구축에 중요하고 태아 간 다음 bonemarrow의 성인 줄기 세포의 개발에 줄기 세포의 최종 움직임에 이르게한다. 초기 조혈 줄기 세포는 이러한 기관에서보다 순수한 인구를 얻는 흐름 cytometric 정렬 뒤에 배의 microdissection을 통해 격리 수 있습니다. 그것은 이러한 줄기 세포 인구가 태아와 성인 줄기 세포 수영장에 기여하는 방법을 명확 남아있다. 또한, 우리 연구소는 초기 줄기 세포가 기능 태아 및 성인 조혈 줄기 세포 차이가 어떻게 조사. 또한, 우리 실험실 종류의 조혈 줄기 세포의 다른 인구 및 유전자 모델의 다양한 맥락에서 자신의 기능 역할을 테스트합니다. 콜로니 assays 및 골수 이식 :이 비디오는, 우리가 일반적으로 사용하고 이러한 희귀한 인구를 분리 전형적인 외과의 plotfter의 결과를 보여 마이크로 절개 절차를 보여줍니다, 그것은 포함한 기능 assays 다양한 수행할 수 있습니다.

프로토콜

murine 난황과 대동맥 - 생식선 - mesonephros 지역에서 초기 조혈 줄기 세포의 해부 및 절연

1. 시작하기 전에 프로 시저에 필요한 모든 시약과 도구를 가지고하는 것이 중요합니다 :
   
   • 가위
   • 집게, 크기 4 및 수술 성적 벤트 - 스쳐 포셉, 크기 45분의 5 (옵션)
   • 주사기 30 게이지 바늘
   • 35mm와 100mm 페트리 접시
   • PBS 10 % 20% 태아 소 혈청과
   • 그리고 마지막으로, Collagenase
2. 절개를 시작하려면, 우리는 10.5 일 우편 개념에서 임신 여성에서 자궁 뿔을 수확해야합니다.
3. 동물이 승인 절차에 따라 euthanized 있습니다. 우리는 자궁 경부 전위 다음 이산화탄소 질식을 사용합니다.
4. 여성의 복부는 에탄올와 젖은이고 피부는 가위로 열립니다.
5. 포셉로 피부를 개최, 추가 인하는 복막을 엽니다 만들어집니다.
6. 복부가 열립니다과 자궁 뿔이 시각하실 수 있습니다. 자궁 뿔 잡고 집게를 사용하여, 각 말초 엔드 및 소비세 모두 뿔을를 중심 잘라.
7. 자궁 뿔 그런 다음 자궁 조직을 제거 10 % FBS와 차가운 PB....