미국 말굽 게, Limulus polyphemus은 틀림없이 모든 무척추 동물의 혈액의 다량을 위해 가장 편리한 소스입니다. 혈액의 일반적인 순환, 세분화 amebocyte, 그리고 플라즈마, hemocyanin, C - 반응 단백질 및 α2 - macroglobulin에서 3 풍부한 단백질에 하나의 셀 유형, 구성의 간단하다. 혈액은 심장에서 수집되고 혈액 세포 및 플라즈마 원심 분리로 구분됩니다.
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이 논문에서
요약
초록
말굽 게 어떤 긴 무척추 동물의 가장 특징 면역 체계가 있습니다. 말굽 게는에서 면역의 연구는 혈액의 대량 수집 용이성으로하고 혈액의 단순에서 촉진되었다. 말굽 게는 일반적인 순환, 세분화 amebocyte에서만 하나의 셀 유형을 보여줍니다. 플라즈마는 바닷물의 염분 성분을 가지고 있으며, 단지 세 풍부한 단백질, hemocyanin, 호흡기 단백질, C - 반응 박테리아 세포를 포함한 외부 세포의 cytolytic 파괴 기능 단백질, 및 α2 - macroglobulin은 프로 테아제를 억제하는 병원균을 침해니다. 혈액은 lipopolysaccharide (일명, 내독소, LPS), 그람 음성 세균의 제품으로 오염을 최소화 조건 하에서 직접 심장 주사에 의해 수집됩니다. 혈액 400 ML - 대형 동물은 200를 얻을 수 있습니다. 플라즈마의 연구, 혈액 세포는 즉시 원심 분리에 의해 혈장에서 제거되며 플라즈마 다음의 구성 단백질로 fractionated 수 있습니다. 혈액 세포가 편리하게 다음 그 coverglasses를 장착, 문화 접시 표면에 대한 자세한 중 하나 LPS 무료 coverglasses를 삽입하여 직접 현미경 검사를 허용 조건 LPS 무료 isotonic 호수 (0.5 M NaCl)에 혈액 작은 볼륨을 수집하여 미세 공부 아르 세포 부착 다음과 같은 간단한 관측 실 인치 직접 관찰을위한 두 번째 준비 3를 수집하는 것입니다 - LPS없는 배아 요리의 혈액 5 ML하고 다음 실로 총체적 amebocytes의 조각을 explanting하는 슬라이드와 coverglass 사이에 샌드위치가 조직. 이 준비에서 운동성이있는 amebocytes 그들이 쉽게 볼 수 있습니다 coverglass 표면에,에 마이 그 레이션. 혈액 응고 시스템 amebocytes의 집합과 혈액 세포의 분비 과립의에서 발표되는 단백질, coagulin의 세포외 응고의 형성을 포함한다. 세탁 혈액 세포의 생화 학적 분석 2퍼센트 트윈 - 20, 0.5 M LPS 무료 NaCl, 세포의 원심 분리에 의해 다음과 0.5로 세척 M의 0.1 볼륨으로 혈액을 수집하여 수행할 수 수 집합과 degranulation가 발생하지 않습니다을 필요로 NaCl.
프로토콜
출혈과 관련된 말굽 게의 해부 학적 특징 (그림 1)
그림 1
- 신체의 세 가지 주요 부문은 사후에 앞쪽에에서 prosoma (P), opisthosoma (O), 그리고 텔슨 (T) 1입니다.
- prosoma의 앞쪽에과 측면 무료 마진은 플랜지입니다.
- 텔슨은 articulates opisthosoma의 사후 - 대부분의 들여쓰기는, 터미널 베이입니다.
- prosoma과 opisthosoma가 명확 조인트 경첩 (H)입니다.
- 마음은 단지 prostoma 및 opisthosoma 2 (그림 2)의 등딱지 아래, 등의 정중선을 따라 위치하고 있습니다.
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토론
말굽 게 4 종의, 동쪽의 북아메리카 해안 세 종 일본에서 벵골 만 해당 범위에서 Limulus polyphemus의가 있습니다. 해부학적인 몸의 구조와 유사한 형태가 27 4억4천5백만년 전에서 화석으로 발견 되었기 때문에 동물은 "살아있는 화석"으로 식별됩니다. 성숙에 도달 13 년 최소한 20 년은 28 생활 - 말굽 게 10을 필요로하는, 긴 동물을 나타냅니다. 그것은 장어와 콘치 어업 29 미끼로 광범위한 수확의 대상이되어 있지만, 미국의 말굽 크랩은 여전히 합리적인 풍부하며 비파괴 작은 성인 혈액의 50 ML의 수집 및에서 많은 400 ML 수 있습니다 대형 여성. 도이 정도의 혈액 수집은 10 분 미만으로 완료할 수 있습니다. 너무 작은 노력으로 많은 혈액을 내실수가 다른 어떤 즉시 사용할 수 무척추 동물의 알아요.
내독소에 대한 랄 테스트의 중요성, 그람 음성 박테리아의 존재에 대한 지표는 말굽 게 13 면역 시스템에 관심을.......
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감사의 글
위에서 설명한 기존 연구는 NSF 교부금 0,344,630에 의해 지원되었다.
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참고문헌
- Lochhead, J. H. Selected Invertebrate Types. Brown, F. A. , John Wiley and Sons, Inc. New York, NY. 360-381 (1950).
- Shuster, C. N. The circulatory system and blood of the horseshoe crab Limulus polyphemus L.: a review. US Dept Energy, Fed Regul. Comm. , Washington. (1978).
- Conrad, M. L., Pardy, R. L., Wainwright, N., Child, A., Armstrong, P. B.
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재인쇄 및 허가
