유전자 변형 식품 검사

1. 식품 샘플에서 DNA 추출

1. 이전 파이프 또는 200-1,000L 조절 가능한 볼륨 마이크로파이프를 사용하여 구입한 PCR 믹스 매트릭스 500 μL을 2개의 스크류 캡 튜브에 추가합니다. 각 알리쿼트 사이의 파이펫을 위아래로 피펫하여 PCR 매트릭스를 고르게 혼합합니다.
2. 나사 캡 튜브 "비 GMO"와 다른 "테스트"에 레이블을 지정합니다.
3. 인증된 비GMO 식품의 0.5 g를 계량하여 박격포에 넣습니다.
4. 증류수 2.5mL를 넣고 유봉으로 2분 동안 갈아서 슬러리를 만드시다.
5. 증류수 2.5mL를 추가한 후 슬러리가 파이프에 충분히 부드러워질 때까지 유봉으로 계속 연마합니다.
6. 50 μL의 PCR 프리믹스를 포함하는 나사 캡 튜브에 대한 파이펫 50 μL은 졸업된 파이프에 50 μL 마크를 사용하여 "비-GMO"라고 표시합니다. 요약 튜브.
7. 테스트 식품 샘플을 준비하기 위해 1.3-1.6 단계를 반복합니다.
8. "테스트"라고 표시된 나사 캡 튜브에 대한 지상 테스트 식품 슬러리의 파이프 50 μL. 요약 튜브.
9. 비GMO 식품 및 테스트 식품 PCR 튜브를 1 분 동안 소용돌이시키고 95 °C 수조에 튜브를 5 분 동안 배치합니다. 소용돌이가 없는 경우 튜브를 여러 번 섞어 수조에 넣습니다.
10. 원심분리기에 튜브를 5분 간 배치합니다. 단단한 펠릿은 튜브의 바닥에 형성되어야합니다. 펠릿이 5분 후에 형성되지 않으면, 펠릿이 형성될 때까지 2분 간격으로 원심분리기를 다시 한 번 분리합니다.
11. 튜브는 PCR에 즉시 사용하거나 최대 1 주일 동안 냉장고에 저장할 수 있습니다.

2. PCR 반응 설정

1. 번호 PCR 튜브 1-6 을 초기. 숫자는 표 1에나열된 다음 튜브 내용에 해당해야 합니다.
2. 표지된 각 PCR 튜브를 마이크로튜브 홀더에 놓고 캡을 열어 놓습니다.
3. 각 추가에 대한 신선한 팁을 사용하여 각 PCR 튜브에 표 1에 표시된 프라이머의 20 μL을 추가합니다. 캡 튜브.
4. 각 튜브에 대한 신선한 팁을 사용하여 표 1에 표시된 DNA 샘플의 20 μL을 각 PCR 튜브에 추가하여 수퍼나탄에서만 파이펫을 피하고 튜브 바닥의 고체 펠릿을 피하십시오.
5. 각 DNA 샘플이 해당 PCR 튜브로 파이펫화된 후 파이펫을 사용하여 DNA와 프라이머를 부드럽게 위아래로 피펫하여 혼합합니다. 요약 튜브.
6. PCR 튜브를 열 사이클러에 배치하고 다음을 위한 사이클러를 프로그래밍합니다.
   초기 자연: 2 분 동안 94 °C에서 1 사이클.
   증폭: 94°C에서 1분(변성), 59°C1(아닐링), 2분 동안 72°C(확장).
   최종 연장: 10 분 동안 72 °C에서 1 사이클.
   보류: 4°C 무기한.

3. 아가로즈 젤 제제 3%

1. 실험실 또는 마스킹 테이프를 사용하여 젤 트레이의 열린 끝을 단단히 테이프로 고정하십시오. 테이프가 트레이의 가장자리에 밀봉되어 용융 아가로즈가 누출되는 것을 방지합니다.
2. 250mL 또는 더 큰 에를렌마이어 플라스크에 아가로즈 3 g의 무게를 내세요.
3. 1x TAE 버퍼 100mL(농축액에서 구입 또는 준비)를 추가합니다.
4. 교반바가 있는 마그네틱 핫 플레이트를 사용하여 아가로즈가 버퍼에 완전히 녹고 용액이 끓어오르고 선명해질 때까지 비커를 가열합니다. 또는 전자 레인지는 비커를 오븐에 넣고 30 년대 간격으로 가열하여 볶음 봉을 사용하여 10 s를 혼합하고 혼합물이 끓고 투명해질 때까지 반복하여 사용할 수 있습니다.
5. 50mL Erlenmeyer 플라스크를 250mL 플라스크의 개구부로 되돌리면 역류역할을 하여 아가로즈 용액이 증발하는 것을 방지합니다.
6. 아가로즈 용액을 60°C로 식히고 30-50mL를 각 테이프젤 트레이에 붓도록 하십시오.
7. 젤 빗을 첫 번째 노치에 넣어 젤 웰을 만듭니다.
8. 테이프와 빗을 제거하기 전에 젤을 완전히 식힙니다. 젤은 약 10-20 분 준비되면 고체화되고 맑고 흐린 것으로 바뀝니다.

4. PCR 제품의 전기 전광

1. 미리 만들어진 3% 아가로즈 젤을 젤 트레이에 놓거나 3% 아가로즈 젤을 캐스팅하는 데 사용된 젤 트레이를 사용한다.
2. 음극 (검은) 끝에 가장 가까운 우물과 전기 전광 챔버에 젤 트레이를 밀어 넣습니다.
3. 1x TAE 버퍼를 챔버에 붓고 겔 트레이 의 상단 위에 2mm의 버퍼를 가질 수 있습니다.
4. 열 사이클러에서 PCR 튜브를 얻고 마이크로튜브 홀더에 배치합니다.
5. 매번 신선한 파이펫 팁을 사용하여 구입 한 오렌지 G 로딩 염료 (LD)의 10 μL을 각 샘플에 추가하고 잘 섞습니다.
6. 분자량 눈금자의 20 μl및 각 시료의 20 μL을 겔내로 적재(표2).
7. 젤 전기 전도를 100 V에서 30 분 동안 실행하십시오.
8. 챔버에서 젤 트레이를 제거하고 젤을 밀어 트레이에서 제거합니다. 염색 트레이에 젤을 놓습니다.
9. 구입 한 DNA 젤 얼룩에 젤을 5 분 동안 담그고 조심스럽게 트레이를 흔들어 젤 전체에 얼룩을 분배합니다.
10. 젤을 세척 용기에 옮기고 약 10s의 수돗물(40-55°C)으로 헹구는 다.
11. 따뜻한 수돗물로 3배 씩 씻아 6분 간 부드럽게 흔들어 최상의 결과를 만들어 보입니다. 필요한 경우 원하는 대비에 도달할 때까지 따뜻한 물에 계속 유색하십시오.

튜브 번호	입문서	DNA 샘플
1	20 μL 식물 프라이머 (녹색)	20 μL 비 GMO 식품 제어 DNA
2	20 μL GMO 프라이머(빨간색)	20 μL 비 GMO 식품 제어 DNA
3	20 μL 식물 프라이머 (녹색)	20 μL 테스트 식품 DNA
4	20 μL GMO 프라이머(빨간색)	20 μL 테스트 식품 DNA
5	20 μL 식물 프라이머 (녹색)	20 μL GMO 양성 대조군 DNA
6	20 μL GMO 프라이머(빨간색)	20 μL GMO 양성 대조군 DNA

표 1. 적절한 튜브 번호, 프라이머 및 DNA 샘플 목록입니다.

웰 1	식물 프라이머 20 μL을 가진 비 GMO 식품 제어 샘플 1.
웰 2	샘플 2 GMO 프라이머 20 μL을 가진 비 GMO 식품 제어.
음 3	식물 프라이머 20 μL로 음식을 시험하는 3 샘플 3.
음 4	샘플 4 GMO 프라이머 20 μL로 음식을 테스트합니다.
웰 5	식물 프라이머 20 μL을 가진 5 GMO 양성 DNA를 샘플링합니다.
음 6	GMO 프라이머 20 μL을 가진 6 GMO 양성 DNA.
음 7	PCR 분자량 눈금자 20 μL.
웰 8	비워 둡니다.

표 2. 분자량 눈금자의 20 μL 및 각 시료의 20 μL을 젤에 적재하는 적절한 순서입니다.