토양 샘플에서 박테리아 배양 및 나열

1. 토양 희석제 준비

1. 절차를 시작하려면 토양 샘플 10g의 무게를 측정하고 95 mL의 탈온 화 물을 추가합니다. 서스펜션을 잘 흔들어 "A"라고 표시합니다.
2. 토양이 정착하기 전에 멸균 파이펫으로 서스펜션 1mL를 제거하고 9mL 의 증분 비워로 옮기습니다. 소용돌이를 철저히 표시하고"B"로 라벨을 붙입니다.
3. 이 희석 단계를 세 번 반복하며, 매번 이전 서스펜션의 1mL및 9mL 의 분수 블랭크를 반복한다. 이러한 레이블을 튜브 C, D 및 E로 순차적으로 라벨을 지정합니다. 이로 인해 mL당 10-1~10-5그램의 토양희석이 발생합니다.

2. 세균 문화를 위한 스프레드 플레이트 만들기

1. 세균성 식민지를 성장시키기 위하여는, 3개의 미리 준비된 펩톤 효모 한천 판을 취하고 C, D 및 E. 소용돌이 견본 C, D 및 E, 및 파이펫 0.1 mL각 접시에 그(것)들을 레이블을 붙입니다. 이렇게 하면 희석 값을 10배 증가시킨다(C^=10-3,D =^10-4,E =^10-5).
2. 다음으로 유리 스프레더를 에탄올에 담급드세요. 스프레더를 화염에 몇 초 동안 놓고 에탄올을 점화하고 태워버린다. 이렇게 하면 스프레더가 소독됩니다.
3. 불꽃이 꺼질 때까지 스프레더를 첫 번째 접시 위에 놓습니다. 뚜껑을 닫고 접시를 빠르게 엽니다. 스프레더를 접종(이노쿨룸 = 배양시 시작에 사용되는 세포)에서 멀리 떨어진 천에 터치한 다음, 자유 액체의 흔적이 사라질 때까지 천자의 표면 주위에 접종을 퍼뜨립니다. 플레이트 뚜껑을 교체합니다.
4. 스프레더를 다시 불태우고 다음 플레이트로 프로세스를 반복하여 공기 중 유기체로 한고를 오염시키지 않도록 신속하게 작업합니다.
5. 1 주일 동안 실온에서 박테리아 플레이트를 배양하십시오. 복어질 중에 플레이트가 반전되어 응축으로 인한 수분 방울이 천 표면에 떨어지는 것을 방지하십시오.

3. 액티노미세테스용 스프레드 플레이트 만들기

1. 액티노마이세테를 성장시키기 위해 미리 준비된 글리세롤 카제인 플레이트 3개를 가지고 B, C 및 D. 이전에 도시된 기술을 사용하여 서스펜션 B, C 및 D에서 0.1 mL를 확산시니다. 저희석은 작용근세테가 전형적으로 세균 집단의 1/10^th(B = 10-2, C =^10-3,D = 10-4)로 존재하기 때문에 사용된다.
2. 실온에서 액티노미세테 플레이트(반전)를 2주 동안 배양한다.

4. 세균 및 액티노미세테 카운트

1. 인큐베이션 후 모든 박테리아 플레이트를 주의 깊게 살펴보고 식민지 크기와 모양의 차이를 주의하십시오. 한천에서 재배할 때 박테리아는 무색에서 밝은 오렌지, 노란색 또는 분홍색에 이르는 끈적끈적한 식민지를 생성합니다. 대조적으로, actinomycete 식민지는 백악질, 단단한, 가죽, 그리고 압력에서 중단됩니다, 그밖 세균성 식민지는 얼룩질 것입니다. 이를 통해 식민지는 멸균 루프와 접촉하여 구별할 수 있습니다.
2. 계산 하 고 세균성 식민지의 수를 기록, 어떤 actinomycetes를 포함 하 여. 플레이트당 30-200개의 콜로니가 있는 플레이트만 계산합니다.

5. 순수한 문화의 고립

1. 플레이트 중 하나에서 개별 세균 성 식민지를 선택합니다. 토양에 특별한 관심이 있는 경우 더 많은 식민지를 선택할 수 있습니다. 그것은 잘 분리 된 순수한 식민지를 가지고하는 경향이 있기 때문에, 높은 희석 판을 사용합니다. 이웃 식민지와 잘 분리된 식민지만 선택하고 서로 형태학적으로 구별되는 것처럼 보입니다.
2. 알코올에 찍어 그것을 불타는하여 루프를 살균. 페트리 요리를 빠르게 열고 루프를 한천의 맨 자리에 터치하여 식힙니다. 그런 다음 루프에 소량의 관심 있는 콜로니를 제거합니다.
3. 신선한 펩톤 효모 접시를 가지고, 한쪽에 몇 센티미터 길이의 줄무늬를 합니다. 살균하고 다시 식힌 다음 첫 번째 패스에서만 초기 연승을 가로지르는 연승을 만듭니다. 이 프로세스를 동일한 방식으로 두 번 더 반복합니다. 이 줄무늬 "희석"은 루프의 셀이 서로 분리되는 결과를 낳습니다. 2 주 동안 실온에서 배양하는 어두운 영역에 접시를 배치합니다.