출처: 이안 페퍼 박사와 찰스 게르바 박사의 연구소 – 애리조나 대학교 데모 저자: 알렉스 와시미
바이러스는 진핵생물과 대핵생물을 모두 감염시키는 생물학 실체의 유일한 그룹입니다. 그(것)들은 신진 대사 능력이 없는 의무 기생충이고, 복제하기 위하여, 호스트 물질 대사에 의지하여 호스트 세포 안쪽에 자기 조립하는 바이러스성 부분을 생성합니다.
바이러스는 초미세이며, 전자 현미경의 더 큰 해상도로만 볼 수있는 가벼운 현미경으로 볼 수 없을 정도로 작습니다. 바이러스 성 입자는 단백질 하위 단위 또는 카포머로 구성된 캡슐화로 알려진 단백질 코트로 둘러싸인 DNA 또는 RNA 인 핵산 게놈으로 구성됩니다. 좀 더 복잡한 바이러스에서 캡시드는 추가 지질 봉투로 둘러싸여 있으며 일부는 스파이크 모양의 표면 부속물이나 꼬리를 가지고 있습니다.
인간과 동물의 장관을 감염시키는 바이러스는 장 바이러스로 알려져 있습니다. 배설물에서 배설되어 국내 폐수에서 분리될 수 있습니다. 박테리아를 감염시키는 바이러스는 박테리오파주로 알려져 있으며, 대장균 균을 감염시키는 바이러스는 대장균(도1)이라고합니다. 대장균 박테리아의 파지는 대장균 박테리아가 발견되는 곳이면 어디에서나 발견됩니다.
그림 1. 대장균 T2.
Principles
Procedure
대장균을 함유한 하수 또는 물의 샘플을 가져옵니다. Tris 버퍼를 사용하여 샘플을 1:10 및 1:100으로 희석합니다. 1.0mL의 배양을 트리스 버퍼9mL로 전송한 다음 두 번째 10배 희석을 수행합니다. 부드러운 한천 튜브 3개(3mL 튜브당 0.7% 영양소 천 또는 트립티케이스 대두 아가르)를 한증탕이나 오토클레이브에 넣음으로써 녹입니다. 한천의 온도가 45°C로 조정되도록 15분 동안 45-48°C의 수조에 한천을 놓습니다. 첫 번째 튜브에, 희석되지 않은 시료의 대장균1 및 1 mL의 로그 상 국물 배양1mL을 추가한다. 수조에서 튜브를 제거하고 부드럽게 2-3 s에 대한 서스펜션을 혼합손 사이에 바위. 종이 타월로 튜브에서 물을 닦고 바닥 한천 (일반 영양소 한천 또는 트립티 케이스 대두 사가르)가 들어있는 이전에 준비된 페트리 접시 위에 한천을 붓습니다. 플레이트를 빠르게 회전하여 상단 한천을 펼치게 합니다. 한천이 표면 전체를 덮는지 확인합니다. 5-8단계는 각 시료 희석의 박테리아 1mL 및 1mL를 사용하여 다른 두 개의 연한 천튜브와 함께 반복한다(그림2). 한천이 굳어진 후 페트리 접시를 반역하고 37°C에서 48h로 배양한다. 페트리 접시 뚜껑에서 습기를 떨어 뜨려 줍니다. 수분 방울이 플라크에 떨어지면 바이러스가 천 표면에 퍼집니다. 인큐베이션 후, 각희석(도 3)에플라크 수를 계산하고 원래 샘플에서 파지의 농도를 계산한다. 플라크의 크기 나 모양의 주요 차이점을 기록합니다. 그림 2. 대장균 열거를 위한 최고 한고를 사용하여 세균 잔디의 준비를위한 절차. 그림 3. 세균 잔디에 파지 플라크. 1대장균 균주 ATCC 15597은 일반적으로 하수 샘플에서 가장 많은 수의 플라크를 생성합니다. 250mL 에렌마이어 플라스크에서 영양분이나 트립티케이스 콩 육물을 100mL로 함유하고 파지 분석 이1mL을 100mL의 영양또는 시도용 수량37°C의 신선한 플라스크로 접종하기 전에 35°C.3h의 흔들림 조건에서 배양해야 한다. 이것은 박테리아가 성장의 로그 단계에 있는지 확인합니다.
Results
하수 시료 희석 = 10-1 획득한 플라크 수 = 9 따라서 하수 샘플의 파지 농도= 10 x 9 ÷ 1mL= 90 플라크 형성 단위 / mL 원시 하수는 일반적으로 mL 당 103 – 104 대장균을 포함하고, 범위는 102 – 10 mL 당8.
Applications and Summary
환경 지표로 대장균의 많은 잠재적 인 응용 프로그램이 있습니다. 여기에는 하수 오염, 물 및 폐수 처리의 효율성, 환경 내 장 바이러스 및 박테리아의 생존의 지표로서의 사용이 포함됩니다. 장내 세균 및 동물 바이러스의 존재와 행동의 지표로 박테리오파지를 사용하는 것은 파지 애약과 관련된 검출의 용이성과 저렴한 비용으로 인해 항상 매력적이었습니다. 또한, 장내 바이러스에 대한 일 또?…
내레이션 대본
대장균을 함유한 하수 또는 물의 샘플을 가져옵니다. Tris 버퍼를 사용하여 샘플을 1:10 및 1:100으로 희석합니다. 1.0mL의 배양을 트리스 버퍼9mL로 전송한 다음 두 번째 10배 희석을 수행합니다. 부드러운 한천 튜브 3개(3mL 튜브당 0.7% 영양소 천 또는 트립티케이스 대두 아가르)를 한증탕이나 오토클레이브에 넣음으로써 녹입니다. 한천의 온도가 45°C로 조정되도록 15분 동안 45-48°C의 수조에 한천을 놓습니다. 첫 번째 튜브에, 희석되지 않은 시료의 대장균1 및 1 mL의 로그 상 국물 배양1mL을 추가한다. 수조에서 튜브를 제거하고 부드럽게 2-3 s에 대한 서스펜션을 혼합손 사이에 바위. 종이 타월로 튜브에서 물을 닦고 바닥 한천 (일반 영양소 한천 또는 트립티 케이스 대두 사가르)가 들어있는 이전에 준비된 페트리 접시 위에 한천을 붓습니다. 플레이트를 빠르게 회전하여 상단 한천을 펼치게 합니다. 한천이 표면 전체를 덮는지 확인합니다. 5-8단계는 각 시료 희석의 박테리아 1mL 및 1mL를 사용하여 다른 두 개의 연한 천튜브와 함께 반복한다(그림2). 한천이 굳어진 후 페트리 접시를 반역하고 37°C에서 48h로 배양한다. 페트리 접시 뚜껑에서 습기를 떨어 뜨려 줍니다. 수분 방울이 플라크에 떨어지면 바이러스가 천 표면에 퍼집니다. 인큐베이션 후, 각희석(도 3)에플라크 수를 계산하고 원래 샘플에서 파지의 농도를 계산한다. 플라크의 크기 나 모양의 주요 차이점을 기록합니다. 그림 2. 대장균 열거를 위한 최고 한고를 사용하여 세균 잔디의 준비를위한 절차. 그림 3. 세균 잔디에 파지 플라크. 1대장균 균주 ATCC 15597은 일반적으로 하수 샘플에서 가장 많은 수의 플라크를 생성합니다. 250mL 에렌마이어 플라스크에서 영양분이나 트립티케이스 콩 육물을 100mL로 함유하고 파지 분석 이1mL을 100mL의 영양또는 시도용 수량37°C의 신선한 플라스크로 접종하기 전에 35°C.3h의 흔들림 조건에서 배양해야 한다. 이것은 박테리아가 성장의 로그 단계에 있는지 확인합니다.