환경 검체에서 박테리오파지 검출

1. 대장균을 함유한 하수 또는 물의 샘플을 가져옵니다.
2. Tris 버퍼를 사용하여 샘플을 1:10 및 1:100으로 희석합니다. 1.0mL의 배양을 트리스 버퍼9mL로 전송한 다음 두 번째 10배 희석을 수행합니다.
3. 부드러운 한천 튜브 3개(3mL 튜브당 0.7% 영양소 천 또는 트립티케이스 대두 아가르)를 한증탕이나 오토클레이브에 넣음으로써 녹입니다.
4. 한천의 온도가 45°C로 조정되도록 15분 동안 45-48°C의 수조에 한천을 놓습니다.
5. 첫 번째 튜브에, 희석되지 않은 시료의 대장균¹ 및 1 mL의 로그 상 국물 배양1mL을 추가한다.
6. 수조에서 튜브를 제거하고 부드럽게 2-3 s에 대한 서스펜션을 혼합손 사이에 바위.
7. 종이 타월로 튜브에서 물을 닦고 바닥 한천 (일반 영양소 한천 또는 트립티 케이스 대두 사가르)가 들어있는 이전에 준비된 페트리 접시 위에 한천을 붓습니다.
8. 플레이트를 빠르게 회전하여 상단 한천을 펼치게 합니다. 한천이 표면 전체를 덮는지 확인합니다.
9. 5-8단계는 각 시료 희석의 박테리아 1mL 및 1mL를 사용하여 다른 두 개의 연한 천튜브와 함께 반복한다(그림2).
10. 한천이 굳어진 후 페트리 접시를 반역하고 37°C에서 48h로 배양한다. 페트리 접시 뚜껑에서 습기를 떨어 뜨려 줍니다. 수분 방울이 플라크에 떨어지면 바이러스가 천 표면에 퍼집니다.
11. 인큐베이션 후, 각희석(도 3)에플라크 수를 계산하고 원래 샘플에서 파지의 농도를 계산한다. 플라크의 크기 나 모양의 주요 차이점을 기록합니다.

그림 2. 대장균 열거를 위한 최고 한고를 사용하여 세균 잔디의 준비를위한 절차.

그림 3. 세균 잔디에 파지 플라크.

¹대장균 균주 ATCC 15597은 일반적으로 하수 샘플에서 가장 많은 수의 플라크를 생성합니다. 250mL 에렌마이어 플라스크에서 영양분이나 트립티케이스 콩 육물을 100mL로 함유하고 파지 분석 이1mL을 100mL의 영양또는 시도용 수량37°C의 신선한 플라스크로 접종하기 전에 35°C.3h의 흔들림 조건에서 배양해야 한다. 이것은 박테리아가 성장의 로그 단계에 있는지 확인합니다.