2.12: X선 회절 분석을 위한 커지는 결정

1. 크리스탈 튜브 및 필터의 준비

1. NMR 튜브를 에렌마이어 플라스크에 놓습니다.
2. 파이펫 필터를 준비합니다.
   1. 파이펫에 보풀이 없는 와이프(1인치 by 1in.)를 배치하여 필터를 구성한 다음 막대를 사용하여 파이펫의 병목 현상 부분에 닦아 넣습니다(도1).
   2. 필요한 모든 크리스탈 튜브에 대해 두 개의 파이펫 필터를 만듭니다.

2. 크리스탈 튜브에 샘플 추가

1. 용매 (디클로로메탄)의 0.75 mL에서 화합물 (테트라페닐포르피린, 10 mg)를 용해하십시오.
2. 파이펫을 사용하여 필터를 통과하여 튜브 상단에 혼합물을 부드럽게 추가합니다.
   1. 입자는 핵 형성 부위의 생성을 피하기 위해 여과되어 원하는 큰 단일 결정 대신 작은 다중 결정으로 이어질 수 있습니다.
3. 시료가 결정관에 매우 느리고 부드럽게 배치되면 새로운 필터 파이펫을 통해 튜브에 항용매 (메탄올 1.5 mL)를 추가하십시오. 용매 방지가 이전에 추가된 용액에 천천히 레이어되도록 허용합니다(그림 2). 전구를 사용하여 파이펫을 통해 용매를 밀어 내지 말고 용매가 필터를 통해 자체적으로 흐르도록 하십시오.
   1. 먼저 고밀도의 용매가 결정 튜브에 추가되는지 확인하십시오.
   2. 두 용매가 서로 잘못 처리되어 있는지 확인합니다. 이것은 용매를 첨가하기 전에 수행됩니다.
4. NMR 캡으로 튜브를 밀봉합니다.

3. 크리스탈 성장

1. 두 용매가 섞이는 원인이 되지 않고 크리스탈 튜브(들)를 캐비닛에 놓습니다.
2. 결정화 시간은 각 화합물에 따라 달라집니다 - 일반적으로 결정 튜브는 일주일 동안 방해받지 않고 남아 있어야합니다.
3. 일주일 후, 결정 성장을 위해 튜브를 검사합니다.
   1. 결정 성장은 전형적으로 두 용매의 인터페이스에서 발생합니다.
   2. 결정 성장의 증거를 위해 튜브를 육안으로 검사합니다. 용매의 혼합을 용이하게하지 않도록주의, 화합물이 결정 형성을위한 추가 시간이 필요한 경우.
   3. 결정 성장이 발생한 것으로 나타나면 현미경을 사용하여 튜브를 추가로 검사합니다.

4. 크리스탈 선택

1. X선 회절 결정은 잘 정의된 면을 가져야 합니다.
2. 가능하면 함께 클러스터된 크리스탈을 피해야 합니다.
3. 크리스탈을 디락토미터에 놓기 직전에 크리스탈을 수확할 준비가 될 때까지 크리스탈 튜브에 놓습니다.
   1. 결정을 튜브에 보관하면 결정이 솔바게 유지됩니다. 해결 절제는 결정이 균열을 일으키고 결정의 회절을 방해할 수 있습니다.

그림 1. 파이펫 필터의 이미지입니다. 보풀이 없는 작은 와이프가 파이펫의 병목 현상에 단단히 쐐기를 박았다. 이 솔루션은 결정 튜브에 도입되기 전에 이러한 파이펫 필터를 통과합니다.

그림 2. 표적 화합물을 함유한 용액이 결정관에 배치되면, 항용매는 새로운 파이펫 필터를 통과하여 천천히 위에 겹쳐져 있습니다.

단결정은 그 구조를 결정하는 데 필요합니다. 결정의 품질은 구조적 결정의 품질과 정확성에 큰 영향을 미칩니다.

단결정은 분자 배열이 3차원 모두에서 반복되는 고체입니다. 결정질 고체 내 원자의 공간 배열은 X선 결정학을 사용하여 결정할 수 있습니다. 이 기술에서는 순수한 결정질 샘플이 X선 빔으로 둘러싸여 있습니다. 결정은 결정 구조 및 분자 구성과 관련된 독특한 패턴으로 X선을 회절시킵니다. 결정이 너무 빨리 형성되면 분자가 무질서해지거나, 불순물이 결정에 혼입되거나, 단결정 대신 두 개 이상의 용융 결정이 형성될 수 있습니다. 따라서 X선 결정학에 충분한 품질의 결정을 생산하기 위해서는 느린 성장에 중점을 둔 특수 방법이 필요합니다.

이 비디오는 X선 품질 결정의 원하는 특성을 설명하고, 이를 성장시키는 절차를 보여주며, 화학에서 이 기술의 몇 가지 응용 분야를 소개합니다.

전자는 부딪히면 구형 X선파를 방출하여 X선을 산란시킵니다. 원자가 질서 정연하게 배열되어 있으면 파동 사이의 건설적인 간섭이 X선 검출기에 특징적인 회절 패턴을 생성합니다. 결정은 여러 각도에서 회절 패턴을 수집하기 위해 빔 내에서 회전합니다. 충분한 회절 패턴을 통해 분자 구조를 도출할 수 있습니다.

X선 품질의 결정은 일반적으로 대칭 모양을 형성하고 매끄럽고 빛을 반사하는 면을 가지고 있습니다. 편광 현미경으로 보면 투명하지만 대부분 90도 회전하면 어두워집니다. 이는 고도로 정렬된 구조를 나타냅니다. 이러한 결정을 성장시키기 위해 액체-액체 확산이 자주 사용됩니다. 이것은 두 가지 혼화성 용매를 사용합니다 : 저밀도 용매 또는 침전제, 여기서 재결정 할 화합물은 불용성입니다. 및 화합물이 용해되는 고밀도 용매. 일반적으로 침전제와 용매의 부피 비율은 2:1입니다.

저밀도 침전제는 고밀도 용매에서 화합물의 농축 용액 위에 층을 이룹니다. 시간이 지남에 따라 화합물은 침전제가 용액과 혼합됨에 따라 용해도가 낮아집니다. 용매 계면이 작을수록 확산 속도가 느려지므로 더 크고 순수한 결정을 얻을 수 있습니다. 이제 X선 품질의 결정을 성장시키는 원리를 이해했으므로 액체-액체 확산으로 결정을 성장시키는 절차를 살펴보겠습니다.

시작하려면 텍스트 프로토콜에 있는 필요한 장비를 구하십시오. 화합물에 대한 용매와 밀도가 낮은 침전제를 획득하십시오.

피펫 필터를 준비하려면 유리 피펫 상단에 작은 Kimwipe 조각을 놓고 종이에 구멍이 나지 않도록 주의하면서 막대나 다른 피펫 줄기를 사용하여 종이를 피펫 본체 바닥까지 부드럽게 누릅니다. 두 개의 피펫 필터를 준비합니다. NMR 튜브에 하나를 넣습니다. 필요한 경우 실험실 cl로 어셈블리를 고정하십시오.amp 및 링 스탠드. 0.75mL의 용매에 재결정화할 화합물 약 10mg을 용해합니다.

이제 샘플 용액을 피펫 필터에 조심스럽게 추가합니다. 전구를 상단에 부착하고 천천히 짜서 용액을 NMR 튜브에 통과시켜 고체 불순물을 제거합니다. 흡입으로 인해 여과지가 제거되므로 전구가 부착된 동안 전구가 다시 팽창하지 않도록 하십시오.

그런 다음 사용한 피펫 필터를 제거하고 두 번째 필터를 NMR 튜브에 넣습니다. 약 1.5mL의 침전제를 튜브에 피펫팅합니다. 용매가 중력에 의해 필터를 통과하도록 합니다. 이제부터는 조작하는 동안 필터를 방해하지 않도록 주의하십시오. 모든 침전제가 튜브로 여과되면 필터를 제거하고 튜브를 덮습니다. 흔들리지 않는 캐비닛이나 쉽게 확인할 수 있는 위치에 두십시오.

적어도 하루 후, 결정 성장에 대해 튜브를 검사하십시오.? 결정이 없거나 결정이 매우 작은 경우 샘플 튜브를 방해받지 않고 그대로 두십시오. 결정이 보이면 용매 층을 방해하지 않고 크기와 모양을 확인하십시오.

결정이 크고 잘 정의되어 있으며 함께 모여 있지 않은 경우 현미경으로 결정을 검사하여 X선 품질 가능성을 확인하십시오. 회절분석기가 스캔을 시작할 준비가 될 때까지 튜브에서 결정을 제거하지 마십시오. 용매 분자가 결정 구조에 통합되면 결정이 건조되면 결정이 저하됩니다. X선 결정학을 사용하여 이러한 짙은 적자색 결정의 분자 구조가 테트라페닐포르피린으로 확인되었습니다.

X선 결정학은 화학 및 생화학에서 필수적인 분석 도구입니다.

재결정화 방법에는 가열 및 냉각, 액체-액체 확산, 증기 확산 및 느린 증발이 포함됩니다. 단일 용매 시스템의 느린 증발에서 화합물은 소량의 용매에 용해되어 캡에 작은 구멍이 있는 용기에 배치됩니다. 용매가 증발함에 따라 화합물이 결정화되기 시작할 때까지 농도가 증가합니다.

단백질의 기능은 종종 단백질의 구조와 관련이 있습니다. 그러나 단백질은 결정화하기가 매우 어려울 수 있습니다. X선 품질의 단백질 결정을 성장시키기 위해서는 특수 기술을 개발해야 합니다. 여기서, 단백질 용액 한 방울을 침전제 한 방울과 혼합하고이 혼합물을 순수한 침전제와 함께 챔버에 밀봉합니다. 용매 증기가 방울 밖으로 확산됨에 따라 방울 내 단백질의 용해도가 감소하고 단백질이 천천히 결정화됩니다. 또 다른 기술은 단백질 용액과 침전제를 미네랄 오일의 밑에 혼합하는 것입니다. 이러한 기술을 사용하여 분석을 위해 다양한 단백질을 결정화할 수 있습니다.

분말 회절에서 가능한 각 공간 방향은 샘플에 동시에 표시됩니다. 분말 회절은 3차원 구조 데이터의 손실로 인해 단결정 X선 회절만큼 구조에 대한 정보를 제공하지 않습니다. 대신, 분말 회절은 결정질 고체의 혼합물을 분석하고 비정질 구조의 결정도를 평가하는 데 탁월합니다.

X선 결정학을 위한 결정 성장에 대한 JoVE의 소개를 방금 시청했습니다. 이제 X선 품질 결정의 특성, 결정 성장 절차 및 화학에서 이 기술의 몇 가지 응용 분야에 대해 잘 알게 되었을 것입니다.

시청해 주셔서 감사합니다!