Question 1

자기 활성화 세포 분리란 무엇이며, 어떻게 세포를 분리합니까?

Accepted Answer

Magnetic-활성화된 셀 정렬, 또는 MACS는 세포 표면에 표현된 특정 에피토프에 기반하여 세포를 분리하는 기술입니다. 비오틴과 결합된 항체는 표적 세포에 결합하고, 스트렙타비딘이 결합된 자기 비드가 비오틴에 부착됩니다. 표시된 세포는 칼럼의 자석에 붙고 미표시된 세포는 통과하여 표적 세포의 60에서 98%를 회수합니다.

Question 2

MACS에서 비오틴-스트렙타비딘 상호작용은 어떻게 작동하나요?

Accepted Answer

특정 세포 표면 마커를 표적으로 하는 항체에 부착된 비오틴은 자기 비드에 융합된 스트렙타비딘 분자와 높은 친화력을 가집니다. 비오틴과 스트렙타비딘이 접촉하면 견고하게 결합하여 표적 세포를 자기 비드로 코팅합니다. 이러한 세포 표면 마커, 항체 및 자기 비드의 샌드위치 복합체는 자기 포획 및 분리를 가능하게 합니다.

Question 3

MACS 분리를 위해 흉선 조직을 준비하는 데 어떤 단계가 포함되어 있습니까?

Accepted Answer

흉선은 추출되고 세포 스트레이너와 플런저를 사용하여 단일 세포로 기계적으로 분리됩니다. 원치 않는 적혈구는 ACK 완충액을 사용하여 용해됩니다. 그 후 세포는 원심분리되고 태아 송아지 혈청이 포함된 HBSS에 재현탁됩니다. 세포 농도는 항-CD3 항체로 자기 표지하기 전에 밀리리터당 10의 제곱 세포로 조정됩니다.

Question 4

MACS 동안 CD3-positive T 세포는 어떻게 표시되고 포집됩니까?

Accepted Answer

세포는 20분 동안 아이스에서 비오틴 결합 항-CD3 항체와 함께 배양한 후 세척합니다. 스트렙타비딘 결합 마그네틱 비드를 추가하고 20분 동안 배양합니다. 표지된 세포 현탁액은 마그넷 위에 위치한 칼럼으로 피펫팅되며, 여기서 CD3 양성 세포는 접착되고 미표지 세포는 수집 튜브로 흐릅니다.

Question 5

MACS 분리 과정에서 컬럼을 사용하는 목적은 무엇입니까?

Accepted Answer

컬럼에는 시스템을 통과하는 세포의 경로를 길게 만드는 비자성 매트릭스가 있습니다. 이는 세포 흐름을 늦추어 자성 비드가 표적 세포를 효율적으로 포획할 수 있는 시간을 더 많이 제공합니다. 컬럼은 분리 효율을 향상시키고 컬럼 없는 직접 자성 분리에 비해 회수된 세포의 비율을 증가시킵니다.

Question 6

MACS 후 CD3-positive T 세포의 농축 효율성은 어떻게 확인됩니까?

Accepted Answer

강화된 세포 샘플과 강화되지 않은 세포 샘플은 형광 항-CD3 항체로 염색하고 유세포 분석을 사용하여 분석합니다. 점도는 CD3 양성 림프구를 표시하며, 주로 강화된 샘플에 나타나야 합니다. 모든 림프구 중 CD3 양성 세포의 빈도가 계산되며, 강화된 T 세포는 일반적으로 CD3 양성 세포가 80% 이상 나타납니다.

Question 7

양성 및 음성 자기 분류의 차이점은 무엇입니까?

Accepted Answer

양성 정렬에서는 관심 세포가 원하는 표면 마커를 타겟으로 하는 항체와 결합된 자기 비드를 사용하여 포집됩니다. 음성 정렬에서는 적절한 항체를 운반하는 자기 비드를 사용하여 원치 않는 세포를 제거합니다. 두 접근 방식은 동일한 MACS 원리를 사용하지만 어떤 세포 집단이 보존되고 어떤 것이 폐기되는지에 차이가 있습니다.

자기 활성화 세포 분류 (MACS): 흉선 T 림프구 분리 - 평가 퀴즈