위노그라드스키 칼럼 생성: 퇴적물 검체에서 미생물 종을 풍부하게하는 방법

1. 셋업

1. 위노그라드스키 열을 설정하려면 다음과 같은 기본 소모품이 필요합니다.
   • 현장에서 샘플을 수집하는 삽, 양동이 및 병
   • 약 1L의 졸업실린더 또는 플라스틱 물병과 같은 수직, 투명한 용기
   • 플라스틱 랩 및 고무 밴드
   • 큰 믹싱 그릇과 큰 숟가락을 저어
   • 황 공급원(달걀 노른자 또는 황산칼슘)
   • 유기 탄소의 공급원 (셀룰로오스, 파쇄 된 신문의 형태로)
   • 빛의 원천 (햇볕이 잘 드는 창문 또는 책상 램프)
   • 습지, 습지, 연못 또는 개울에서 채취한 토양 또는 진흙
   • 같은 서식지에서 물
   • 선택 사항 이 프로토콜에 설명된 일부 선택적 실험에는 다음이 필요합니다.
     • 소금
     • 다른 색의 셀로판
     • 철의 공급원(예: 네일 또는 강철 울)
     • 광원이 있는 냉장고
     • 광원 근처의 라디에이터
2. 플라스틱 물병을 사용하는 경우, 기둥이 원통모양이 되도록 목 부위를 잘라냅니다. 빛이 플라스틱을 관통할 수 있도록 포장지를 제거합니다.
3. 생 계란 살모넬라를 포함 할 수 있으며 주의처리해야합니다. 적절한 손 씻기 기술을 따라야합니다. 또는 삶은 달걀을 사용할 수 있습니다. 또한 진흙이나 퇴적물을 하수 또는 기타 유해 물질로 오염되었는지 확실히 알 수있는 방법은 없습니다. 장갑은 진흙을 혼합하고 열을 설정할 때 사용해야합니다.

2. 위노그라드스키 기둥 조립

1. 삽을 사용하여 파고 들어 양동이에 진흙을 수집합니다. 퇴적물은 물 가루 근처에 있어야 하며 물로 완전히 포화상태여야 합니다. 각 위노그라드스키 열을 채우기 에는 충분한 진흙이 필요합니다. 샘플 병으로 동일한 소스에서 일부 물을 수집합니다 (컬럼 당 약 3000 mL이 필요합니다).
2. 실험실에서 1리터 볼륨 컬럼의 ~75%를 채우기 위해 진흙을 첫 번째 믹싱 볼에 충분히 전달합니다. 다음으로, 숟가락을 사용하여 덩어리를 분해하는 동안 큰 바위, 나뭇 가지 또는 잎을 제거하기 위해 체질.
3. 교반하는 동안 믹싱 볼에 수집 한 물 중 일부를 추가합니다. 물 진흙 혼합물의 일관성이 밀크 쉐이크와 같을 때까지 추가합니다. 덩어리가 없는지 계속 확인합니다.
4. 물 진흙 밀크 쉐이크의 약 1/3을 두 번째 그릇에 옮기. 달걀 노른자와 잘게 썬 신문 한 줌을 넣고 섞습니다.
5. 기둥이 약 1/4 가득 차 때까지 진흙, 달걀 노른자 및 신문의 혼합물을 열에 추가합니다.
6. 기둥이 약 3/4 가득 차때까지 일반 물 진흙 혼합물을 열에 추가합니다.
7. 컬럼에 물을 추가하여 작은 공간(~1/2인치)만 위에 둡니다.
8. 플라스틱 랩으로 컬럼을 덮고 고무 밴드로 고정하십시오.
9. 실온에서 빛의 기둥을 배양합니다.
10. 다음 4~8주 동안 표 1에 설명된 대로 다양한 색층의 개발과 기포 형성을 위해 위노그라드스키 열의 변화를 모니터링한다. 또한 다른 레이어가 개발하는 데 걸리는 시간을 기록해야 합니다.

3. 클래식 위노그라드스키 열에 대한 선택적 수정

1. 물을 추가하고 교반하기 전에 수집 된 진흙에 1L 위노그라드 스키 컬럼 당 25-50g의 소금을 추가합니다 (단계 2.3). 소금의 추가는 할로필 (소금을 사랑하는) 박테리아를 위해 선택됩니다.
2. 철과 같은 대체 기판은 손톱이나 강철 울의 형태로 달걀 노른자 및 파쇄 된 신문 (단계 2.4)과 함께 기둥에 추가 될 수 있습니다. 이것은 갈라이오넬라와같은 철 산화 박테리아를 풍부하게 하고 녹색 층으로 나타납니다.
3. 대신 실온 (단계 2.9), 기둥은 열성 애호가 (열 사랑) 박테리아 또는 환각 (냉간 사랑) 박테리아를 선택하는 광원이있는 냉장고에서 선택하기 위해 라디에이터 근처에 배양 될 수 있습니다.
4. 컬럼이 배양(단계 2.9)으로 수신하는 빛의 양은 또한 고광, 저조도 또는 어둠에 다른 열을 배치하여 달라질 수 있습니다.
5. 들어오는 빛의 파장은 다른 세균 군을 위해 선택하는 색상을 결정하기 위해 인큐베이션(단계 2.9)으로 다르게 그늘진 셀로판으로 컬럼을 덮어 제한될 수 있다.

4. 데이터 분석

1. 1-3 주 후, 고전 위노그라드 스키 기둥의 진흙 층 의 상단에 일부 녹색 착색을 볼 수 있어야합니다 (도 2A). 이들은 시아노균 층의 성장의 첫번째 표시입니다.
2. 시간이 지남에 따라, 다른 층의 모양과 진화를 모니터링 하는 것을 계속, 각 다른 세균 성 유형을 나타내는. 힌트: 개념 및 표 1을 참조하여 어떤 박테리아가 다른 층에 기여하는지 이해하십시오.

그림 2A: 21 일 동안 실온에서 배양 된 고전 위노 그라드 스키 기둥의 사진. 기둥의 상부에 있는 시아노박테리아를 나타내는 녹색 퇴적물을 유의하십시오.

3. 클래식 위노그라드스키 열에 대한 수정도 준비된 경우 각 열의 결과를 비교합니다.
   1. 수정된 각 위노그라드스키 열의 레이어를 관찰합니다. 다음 사항에 유의하십시오.
      • 열에 동일한 수의 레이어가 있습니까?
      • 레이어가 동일한 색상과 두께입니까?
      • 레이어가 동일한 깊이에서 발생합니까?
      • 각 열을 개발하는 데 얼마나 걸었습니까?
      • 한 열이 다른 열보다 더 느리게 발전했습니까?