순수 배양 및 줄무늬 평판배양: 혼합 검체에서 단일 박테리아 군집 분리

1. 설정

1. 모든 미생물은 위험한 것처럼 취급되어야 합니다. 항상 실험실 코트와 장갑을 착용하고 긴 머리를 묶고 상처가 특히 잘 보호되도록하십시오.
2. 70% 에탄올을 사용하여 살균하여 작업 공간을 준비하십시오.
3. 한천 플레이트, 시료 용액, 미리 멸균된 플라스틱 접종 루프 상자 또는 금속 루프와 분센 불꽃이 가까이 있는지 확인하십시오. 일회용 플라스틱 루프는 일반적으로 사전 멸균됩니다. 금속 루프는 70% 에탄올에 담근 다음 분센 불꽃의 푸른 지역 근처에서 열리고 불타는 뜨거운 때까지 가열해야 합니다. 와이어가 플레이트 뚜껑을 올리고 (오염을 방지하기 위해 약간만) 고화 된 매체에 대해 눌러 식힙니다.
4. 작업 공간의 반복 살균과 손과 손목의 철저한 세척 / 살균으로 각 절차를 완료합니다.

2. 프로토콜

1. 미디어 준비
   1. 활용된 세균종/균주를 지탱할 고체 배지(전형적으로 1.5%(w/v) 한천을 식별하고 준비한다. 자동 분해 시 오버플로를 피하기 위해 최종 볼륨의 두 배를 보유할 수 있는 병에 매체를 섞습니다.
   2. 병을 반조개캡으로 20분 동안 121°C로 설정된 오토클레이브에 배치하여 미디어를 살균합니다.
   3. 병이 오토클레이브에서 제거되는 즉시 캡을 올바르게 닫습니다. 미디어를 곧 사용할 경우 병을 45°C로 설정된 수조에 배치하여 액체 상태로 보존하십시오. 그렇지 않으면 한천은 32-40°C 미만의 것으로 고화되며 나중에 85°C의 융점에 재가열(일반적으로 전자레인지 사용)할 수 있습니다.
2. 문화판 준비
   1. 실험자의 이름, 날짜 및 미디어 유형으로 측면 또는 하단에 멸균 페트리 접시(일반적으로 100 x 15mm)의 베이스를 표시합니다.
   2. 45°C 천 배양 배지(이전에 준비된) 20-25mL을 각 표기판에 붓습니다. 거품이 가장자리를 따라 나타나면 일반 파이펫과 멸균 팁을 사용하여 신속하게 제거해야합니다.
   3. 오염을 방지하기 위해 모든 뚜껑을 접시에 다시 놓습니다.
   4. 한천이 실온에서 약 2시간 또는 4°C에서 하룻밤 동안 고화되도록 합니다. 일단 설정되면 세균 배양 판은 중간 표면의 응축을 최소화하기 위해 4 °C에서 거꾸로 보관해야합니다.
3. 줄무늬 도금
   1. 멸균 루프를 원하는 접종에 침수하고 지그재그모션(도 1, I)을사용하여 수집된 샘플을 플레이트의 첫 번째 사분면에 즉시 분산시한다.
   2. 뚜껑을 닫고 접종 루프를 다시 살균하거나 새로운 멸균 일회용 루프를 수집합니다.
   3. 플레이트의 제2 사분면(도1, II)을향해 제1 사분면(상대적으로 조밀한 세균 집단 포함)에서 방사되는 3-4스트로크를 만듭니다.
   4. 뚜껑을 닫고 접종 루프를 다시 살균하거나 일회용 루프를 폐기하고 새로운 멸균 루프를 수집합니다.
   5. 두 번째 타분면에서 세 번째 사분면으로 3-4 스트로크의 이 줄무늬를 반복한 다음, 세 번째에서 네 번째 사분면까지, 매번 멸균 루프를사용하여(그림 1, III - IV)를반복한다.
   6. 멸균 루프를 사용하여, 플레이트의 중간쪽으로 네 번째 사분면에서 지그재그 패턴으로 하나의 최종 스트로크를한다(도 1, V). 세균성 보급은 이 지역에서 더 낮을 것이고, 이상적으로 개별 식민지가 단 하나, 실행 가능한 어머니 세포에서 설치될 수 있게 합니다.
   7. 뚜껑을 닫고 (세균 종에 필요한 경우) 공기 흐름을 방지하기 위해 파라필름으로 밀봉하십시오.
   8. 세균종/균주에 따라, 배양판을 적절한 환경에서 상측으로 놓고 세균성 식민지가 보일 때까지 배양판을 위쪽으로 내려놓고 배양한다(분리된 식민지는 초기 농도가 다를 수 있으므로 플레이트의 어느 부위에 나타날 수 있음).
   9. 클로날 세균성 인구를 생성하기 위해, 다른 플레이트를 줄이면 원래 판의 단일 콜로니에서 분리된 세포를 위해 원래 플레이트에 도금된 접종을 교환한다.