Name: Fura - 2 오전 사용하여 두피 뉴런의 칼슘 이미징 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-01-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 15 s
Description: 배우세요 두피 뉴런에서 Fura-2 AM을 이용한 칼슘 이미징 방법을 통해 실시간 세포 내 칼슘 역학을 측정하는 기술입니다. 이 프로토콜은 신경과학 연구에서 칼슘 신호 전달을 분석하는 데 활용됩니다.

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세포 배양 전지는 기존 기술을 사용하여 성장 수 있지만 이미징 실험을하는 동안 분리 또는 이동에서 세포를 방지하기 위해 세포 접착제 (polylysine, polyornithine 또는 laminin과 같은)과 코팅 # 1 유리 coverslips에 도금해야합니다. 솔루션 칼슘 이미징 실험은 세포 배양 매체를 포함하여 생리 솔루션의 다양한 사용하여 수행할 수 있습니다. 이것은 솔루션이 크게 형광 배경을 증가 페놀 레드, 무료되었는지 확인하기 위해, 그러나, 중요합니다. 우리가 쉽게 만들어 뇌척수를 모방하고, 우리가 알부민 0.1 % 소 혈청 그것을 보충합니다 Tyrodes 솔루션을 사용합니다. 우리는 가게 운영 CRAC 채널을 활성화하기 위해 전압 게이 티드 칼슘 채널과 1μM Thapsigargin (DMSO 1 MM 재고) 또는 2μM Ionomycin (DMSO 1 MM 주식)을 활성화 60-90 MM 염화칼륨과 탈분극을 사용합니다. 그것은 칼슘 고도는 칼슘 유입에 의한 것을 표시하는 세포외 용액에서 칼슘을 제거하는 것이 편리합니다. 칼슘을 제거하면 그것은 이가의 양이온의 총 농도 (MG 2 + 및 CA 2 +) 상수.을 유지하기 위해 필요합니다 나트륨에 대한 칼륨을 대체하면 그것은 삼투 균형을 유지하기 위해 필요합니다. Tyrodes 솔루션 : <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> 낮은 칼륨 2mM 칼슘 2 + Tyrodes (㎜) </td><td> 낮은 칼륨 0 칼슘 2 + Tyrodes (㎜) </td><td> 높은 칼륨 2mM 칼슘 2 + Tyrodes (㎜) </td><td> 높은 칼륨 0 칼슘 2 + Tyrodes (㎜) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 129 </td><td> 129 </td><td> 5 </td><td> 5 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 5 </td><td> 5 </td><td> 129 </td><td> 129 </td></tr><tr><td> CaCl2 </td><td> 2 </td><td> 0 </td><td> 2 </td><td> 0 </td></tr><tr><td> MgCl2 </td><td> 1 </td><td> 3 </td><td> 1 </td><td> 3 </td></tr><tr><td> 포도당 </td><td> 30 </td><td> 30 </td><td> 30 </td><td> 30 </td></tr><tr><td> Hepes </td><td> 25 </td><td> 25 </td><td> 25 </td><td> 25 </td></tr></tbody></table> NaOH와 7.4으로 산도를 조정 Fura - 2 칼슘 염료의 로딩 우리와 함께 세포를로드 acetoxy - 메틸 에스테르 Fura - 2 세포막에 걸쳐 diffuses 및 Fura - 2 무료 산성을 나타낼 세포 esterases로 드 esterified입니다 (Fura - 2 AM). Fura - 2 로딩에 대한 정확한 매개 변수는 세포 종류에 걸쳐 광범위하게 다릅니다. 4 μm의 15 2 시간 분 실온에서로드 테스트에서 시대의 다양한 로딩 솔루션 세포를 잠복기하고 - 우리는 1에서 성난 Fura - 2의 여러 농도를 포함하는 여러 로딩 솔루션을 준비하여 다양한 조건을 테스트하는 것이 좋습니다 37 데그에서. 대뇌 피질의 뉴런에 단순 프로토콜은 아래 주어집니다 : <ol><li> 첫째, Invitrogen에서 사용할 수 50μg 유리병에 DMSO의 50μl를 추가하여 Fura - 2 AM 재고가 1 ㎜를 준비합니다. 그것을 질소하에 포장 건조 DMSO를 사용하는 것이 중요하고 그것은 DMSO의 수화을 방지하기 위해 심장을 펑쳐링하여 바늘로 DMSO를 제거하는 것이 필요합니다. 준비 후 Fura - 2 오전 솔루션은 어두운 건조한 장소에 보관하십시오. Fura - 2는 24 시간 동안 RT에서 DMSO에 안정 오전에 안정 - 몇 개월 동안 건조한 용기에 20도. </li><li> 37 데그에 따뜻한 15 ML 원뿔 튜브로 문화 미디어 나누어지는 두 MLS. 및 Fura - 2의 2μl을 추가 Fura - 2 AM 솔루션 1μM를 생성 재고입니다. 1 분 적극적으로 소용돌이 솔루션입니다. </li><li> 35mm 조직 문화 요리에 로딩 솔루션을 전송하고 접시에 세포로 coverslip을 전송. </li><li> 어두운 인큐베이터에서 30 분 동안 37도에서 뉴런을 품어. 부화 정확하게 시간. </li><li> Fura - 2 AM없이 조직 문화 미디어 2 MLS를 포함하는 35mm 요리를 준비합니다. 새 접시에 로딩 솔루션과 장소에서 coverslip을 제거합니다. </li><li> 이미징 챔버에 coverslip를 탑재합니다. 35mm 요리에서 coverslip을 제거하고 빠르게 세포의 건조를 방지해야하는 챔버에 탑재합니다. 우리는 아래와 샌드위치를​​ 형성 상단에 장착하는 두 번째 coverslip에 장착할 수있는 세포를 포함하는 10mm coverslip을 허용 워너 계측기 제조 이미징 챔버를 사용합니다. 두 coverslips은 챔버를 통해 솔루션의 재관류를 허용 챔버의 양쪽 끝에 진공 챔버에 기름 두 튜브를 확보하고 있습니다. 입력 라인은 주사기에 연결하고 출력 라인은 진공 트랩에 연결된 흡입 라인에 의해납니다 잘 연결되어 있습니다. </li></ol> 현미경 우리는 크세논 아크 램프 (셔터 인 스트 루먼트), 자동 무대 (Ludl), 여기 필터 휠 (Ludl) 및 냉각 비용 - 부부 장치 (CCD) 카메라 (하마 마츠 Orka 갖춘 거꾸로 니콘 이클립스 TE2000 - U 현미경을 사용하여 II). 현미경은 매킨토시 COM에 의해 제어됩니다퓨터 열기 랩 소프트웨어 (순발력)를 실행. 여러 다른 소프트웨어 패키지 ratiometric 이미징 사용할 수 있습니다. 영상을 위해 40, 60 또는 NA가 1.2를 초과와 100x 니콘 플루어 오일 침지 목표를 사용합니다. 이미징 프로토콜 <ol><li> 현미경의 무대를 보정합니다. </li><li> 부하는 공기 거품의 형성을 방지하기 위해 돌보는 입력 라인에 솔루션을 Tyrodes. </li><li> 챔버에있는 거품의 형성을 방지하기 위해 간병, 다시 한 번 챔버를 통해 재관류 라인과 perfuse의 Tyrodes 솔루션에 챔버를 연결 </li><li> 목적에 기름 한 방울 장소 현미경 단계에 챔버를 배치하고 전달 빛을 사용하여 세포에 중점을두고 있습니다. </li><li> 340에서와 eyepieces를 사용하여 380 nm의에서 조명을 사용하여 세포의 형광을 검사합니다. 휴식 세포는 380에서 340에 희미 밝은해야합니다. 일반적으로 세포는 10 개 이상 또는 15 초 동안 자외선과 켜지지하지 않아야하며 여기 빛의 강도는 phototoxicity을 방지하기 위해 필터 중립적인 밀도 감소한다. </li><li> 카메라를 사용하여 세포를 검사하고 잘 340 nm의에서 조명 채도 아래 380 nm의에서 조명 및 채도 (하지만 포화되지 않음)에 가까운 이미지를 생성하는 카메라의 이득과 노출을 설정합니다. 가능하면 200ms 아래의 노출을 유지. 당신은 또한 배경을 변경하지 않는 한 번만 설정할 계획, 카메라 게인이나 노출을 변경하지 마십시오, RMin 및 RMax (아래 참조). </li><li> 각 파장에서 이미지를 수집하고 각 파장에 대한 이미지에 위치 다양한 배경의 강도를 측정하기 관심 (ROI) 도구의 영역을 사용합니다. </li><li> 평균 배경 값과 이미징 프로그램의 적절한 위치에 배경 값을 입력합니다. 배경 값이 분야에서 각 픽셀에서 빼는 것입니다. </li><li> 연습 비율 이미지를 수집하고 오직 세포 아니라 배경과 그 세포의 가장자리에 가까운 지역에 소음되지 않습니다을 포함하는 비율 이미지를 생성하여 각 파장에 대한 경계 값을 조정합니다. </li><li> 10 % 현장의 모든 세포의 가장 낮은 비율 아래로 최소 비율 값 (RMin)을 설정합니다. </li><li> 12 회 RMin에 대해되도록 RMax을 설정합니다. 당신이 비교가 어렵게되므로 비교하는 실험 계획 간의 RMin 또는 RMax을 변경하지 마십시오. 우리는 거의 우리의 이미징 장비에 RMin 및 Rmax 값을 변경하지 않습니다. </li><li> 이 이미지를하려는 필드를 찾기 위해 자동으로 단계를 사용하여 소프트웨어를 사용하여 각 필드의 위치를​​ 기록합니다. 우리는 일반적으로 실험 도중 볼 다섯 분야를 수집합니다. 필드에 자동으로 무대의 움직임은 비율 이미지를 수집하고 다음 필드로 이동합니다. </li><li> 떨어져 보는 기대되는 신호의 종류에 따라 0.1 10 초 사이에 이미지를 수집하기 위해 시간 경과 간격을 설정합니다. </li><li> 실험을 시작합니다. </li><li> 칼슘 이미징 시스템을 테스트를 할 때 그것은 세포내 칼슘 증가와 칼슘을 무료로 세포 솔루션을 일으킬 것입니다 높은 칼륨의 tyrodes (65 MM KCl) 또는 ionomycin (2μM)과 같은 자극을 사용하는 것이 유용입니다 (EGTA 및 BAPTA 같은 칼슘 버퍼를 포함하는 것입니다 ) 그것은 칼슘 농도를 줄일 수 있습니다. </li></ol> 분석 일단 실험은 세포 내의 개별 셀 또는 관심있는 지역에 대한 시간 저속 칼슘 측정에 비율 이미지의 집합을 변환하는 것이 좋습니다 완료됩니다. 이 작업을 수행하려면 : <ol><li> 당신은 칼슘을 측정하고자하는 이미지의 영역을 정의에 관심이 도구 (ROI)의 영역을 사용합니다. 그것은 세포의 세포 시체를 포함 적어도 한 투자 수익 (ROI)을 가지고 일반적으로 유용합니다. 로아을 정의할 때, 그것은 세포 실험의 과정 중에 이동하지 않도록 확인하는 이미지의 동영상을 재생하는 데 유용합니다. </li><li> 각 이미지의 각 투자 수익 (ROI) 시간 - 저속 비율 측정을 수집하는 소프트웨어를 사용합니다. </li><li> 분석 프로그램에 비율 측정을 가져옵니다. 당신은 특정 세포 또는 로아, 평균 다중 셀 또는 로아에 대한 칼슘 성분을 확인하고 칼슘 가치를 세포에 대한 비율 측정을 변환해야합니다. 이하 편리도 사용할 수 있지만 우리는, 우리 모두가 이러한 일반적인 분석 작업을하지만, Excel과 같은 다른 프로그램을 수행할 수 있습니다 이고르 프로로 작성된 매크로의 집합을 사용합니다. </li><li> 방정식 [칼슘] = (RR 분) / (R 최대 - R) SF * KD는 칼슘 농도를 세포에 Fura - 2 비율로 값을 변환하는 데 사용할 수 있습니다. [칼슘] 칼슘 농도는, R은 Fura - 2 380분의 340의 비율이며, RMin 및 RMax는 각각 칼슘의 부재 또는 칼슘의 포화 농도의 존재에 380분의 340 비율되며 그리고 SF * KD입니다 Fura - 2의 KD (RT에서 약 12​​0 nm의)과 스케일링 값의 제품입니다. R 분, R 맥스와 SF * KD을 측정하려면 체외 교정의 생체내 또는에서 중 수행하는 것이 필요합니다. 생체내 교정에 필요한복잡하지만 수있는 패치 클램핑 및 칼슘 이미징의 결합도 매우 정확합니다. 관내 교정에서 교정을 수행하기 위해있는 솔루션의 얇은 레이어를 생성하는 얇은 coverslip 스페이서로 구분이 coverslips 구성된 집에서 만든 교정 챔버를 사용하여 수행할 수 있습니다. 칼슘 농도의 함수로 Fura - 2 비율 값을 측정하는 가장 편리한 방법은 여러 개의 버퍼 칼슘 솔루션 및 Fura - 2 무료 산성을 포함 교정 키트를 사용하는 것입니다. 이들은 Invitrogen (분자 프로브)에서 얻은 및 사용에 대한 정확한 지침을 포함할 수 있습니다. </li></ol>

<ol><li>Grynkiewicz, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+generation+of+Ca2%2B+indicators+with+greatly+improved+fluorescence+properties%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties.</a> J. Biol. Chem. 260, 3440-3450 (1985).</li>
<li>Lewis, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitogen-induced+oscillations+of+cytosolic+Ca2%2B+and+transmembrane+Ca2%2B+current+in+human+leukemic+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Regul%22%5BJournal%5D)">Mitogen-induced oscillations of cytosolic Ca2+ and transmembrane Ca2+ current in human leukemic T cells.</a> Cell Regul. 1, 99-112 (1989).</li>
<li>Dolmetsch, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+between+intracellular+Ca2%2B+stores+and+depletion-activated+Ca2%2B+channels+generates+%5BCa2%2B%5Di+oscillations+in+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Physiol%22%5BJournal%5D)">Signaling between intracellular Ca2+ stores and depletion-activated Ca2+ channels generates [Ca2+]i oscillations in T lymphocytes.</a> J Gen Physiol. 103, 365-388 (1994).</li>
</ol>

이 프레 젠 테이션에서 우리는 AM Fura - 2를 사용하여 칼슘 이미징을 수행하는 모든 단계를 통과했습니다. 우리는 모델로 대뇌 피질의 뉴런을 사용하지만, 칼슘 이미징은 세포의 다양한 실시간으로 세포 내 칼슘을 측정하는 데 사용할 수 있습니다. 이 절차를 수행할 때 그것은 플라스틱 종종 영상이 어려운하게 자외선 파장에서 형광 있기 때문에, 대신에 플라스틱 유리 coverslips를 사용하는 것이 중요합니다. 또한, polyornithine 및 laminin과 coverslips 분리로부터 세포를 방지하기 위해 사전에 코팅하는 것이 중요합니다. 마지막으로, 이미징 챔버를 통해 솔루션을 perfusing 때 공기 방울을 만드는 피하기 위해 기억하는 것이 중요합니다.

<table><tbody><tr><td>새 항목</td><td>Fura-2 AM</td><td>Invitrogen</td><td>F1221</td><td>차광 보관</td></tr><tr><td>새 항목</td><td>DMSO</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>MX1457-6</td><td>수분 흡수 방지를 위해 건조한 곳에 보관</td></tr><tr><td>새 항목</td><td>소 혈청 알부민</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8022-100G</td><td>4&amp;deg;에서 보관</td></tr><tr><td>새 항목</td><td>이미징 챔버</td><td>Warner Instruments</td><td>Model RC-20H</td><td></td></tr><tr><td>새 항목</td><td>현미경</td><td>Nikon Instruments</td><td>Eclipse TE2000-U</td><td></td></tr><tr><td>새 항목</td><td>염화칼륨</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333-500G</td><td></td></tr><tr><td>새 항목</td><td>교정 키트</td><td>Molecular Probes, Life Technologies</td><td>F6774</td><td>차광 보관</td></tr></tbody></table>

fura - 2 오전 사용하여 두피 뉴런의 칼슘 이미징

Calcium Imaging of Cortical Neurons using Fura-2 AM

칼슘 이미징은 교양 세포의 칼슘 신호를 측정하는 데 유용합니다 일반적인 기법입니다. 칼슘 이미징 기술은 Ca2 + 이온의 바인딩에 대한 응답으로 자신의 분광 특성을 변경 BAPTA 기반 유기 분자 칼슘 지표 염료의 활용. 칼슘 표시기 염료는 두 가지 범주, Fura - 2 및 인도 1 Fluo - 4와 같은 단일 파장 염료와 같은 비율 - 통계 염료에 빠지다. 비율 - 통계 염료는 세포 내 칼슘의 농도가 서로 다른 파장의 형광 방출이나 여기의 비율에서 결정 수 있도록, 칼슘에 대한 응답으로 자신의 여기 또는 발광 스펙트럼 중 하나를 변경합니다. 단일 파장 프로브를 통해 비율 - 통계 염료를 사용하여의 주요 장점은 비율 신호가 염료 농도, 조도, 그리고 세포 내 칼슘의 농도가 독립적으로 이러한 유물을 결정 수 있도록 광학 경로 길이의 독립적이다. 가장 일반적인 칼슘 지표 중 하나는 바인딩 칼슘에 대한 응답으로 방출 505 NM에서 피크와 380 nm의 변경 사항 340 nm의 여기에서 그 피크가 Fura - 2입니다. 여기 우리는 뉴런과 다른 고르기 세포의 세포내 칼슘 고도를 측정하는 Fura - 2의 사용을 설명합니다.

칼슘 신호는 유전자 발현, 생존과 분화 등 많은 세포 과정에 중요한 역할을한다. 여기 Fura - 2 오전 사용하여 칼슘 이미징을 수행하는 방법을 보여줍니다. 칼슘 이미징은 실시​​간 신호 폭포 자사의 규제에 세포 내 칼슘의 규정을 연구하기위한 귀중한 도구입니다.

Fura - 2 오전 사용하여 두피 뉴런의 칼슘 이미징

칼슘 이미징은 배양 세포 내의 칼슘 신호를 측정하는 데 유용한 일반적인 기술입니다. 칼슘 이미징 기술은 칼슘...

칼슘 이미징을 통해 다양한 생리적 자극에 반응하여 세포질 내부와 외부로 이동하는 칼슘 이온의 움직임을 연구할 수 있습니다. 피질 뉴런의 칼슘 이미징 실험을 시작하려면, 먼저 세포에 칼슘 지시 염료인 RA 2:00 AM을 로딩한 후, RA two free 배지가 채워진 관류 챔버에 장착하여 형광 현미경 위에 놓습니다. 이후 염료에 흡수되는 파장인 340 nm와 380 nm의 빛을 조사합니다. 이 두 파장에서 염료로부터 방출되는 505 nm의 방출광을 수집하며, 이 값들의 비율로부터 세포 내 칼슘 농도를 계산할 수 있습니다.안녕하세요, 저는 스탠퍼드 대학교 신경생물학과의 Ricardo Domish 연구실 소속 Im Mar Barreto입니다. 오늘은 뉴런 내의 세포 내 칼슘 상승을 측정하는 절차를 보여드리겠습니다. 그럼 시작하겠습니다.본 칼슘 이미징 절차에 사용되는 피질 뉴런은 기성 기술을 사용하여 배양할 수 있으나, 15 millimeter No. 1 유리 커버슬립 위에 플레이팅해야 합니다. 이는 살아있는 세포의 저형광 이미징이 오일 침수형 고개구수 대물렌즈를 사용할 때 가장 효과적으로 이루어지기 때문입니다.또한, 이미징 실험 중에 세포가 떨어지거나 이동하는 것을 방지하기 위해 poly ornithine과 laminin으로 유리 커버슬립을 사전 코팅합니다. 세포 배양 배지를 포함한 다양한 생리적 용액을 칼슘 이미징 실험에 사용할 수 있습니다. 다만, 피질 뉴런의 형광 배경을 크게 증가시키는 phenol red가 용액에 포함되지 않도록 주의하십시오.우리는 뇌척수액과 유사한 Tyro 용액을 사용하며, 여기에 0.1% bovine serum albumin을 첨가합니다. 세포 로딩 단계를 시작하기 위해, c oxy methyl ester, FERRA two 또는 RA 2:00 AM의 1 mM 스톡 용액을 준비합니다. 이를 위해 URA 2:00 AM 50 µg 바이알에 DMSO 50 µL를 첨가합니다. 질소 충전된 건조 DMSO를 사용하는 것이 중요하며, DMSO의 수화 현상을 방지하기 위해 바늘로 격막을 찔러 DMSO를 제거해야 합니다. 사용하지 않을 때는 Fira 2:00 AM 용액을 어둡고 건조한 곳에 보관하십시오.DMSO 내의 FIRA 2:00 AM은 상온에서 24시간 동안 안정적입니다. 또한 -20 °C에서 수개월 동안 안정적으로 유지됩니다. 다음으로, 37 °C로 가온한 15 mL 원추형 튜브에 배양액 2 mL

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연구

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Biology

생물학

네크로 텍스의 microcircuits의 네트워크 역학을 이해하기 위해서는 동시에 뉴런의 다수의 활동을 기록하는 것이 필수적입니다. - 생체내에서 두 광자 칼슘 이미징 하나는 단일 셀 해상도 고밀도의 연결 인구의 활동을 기록하는 수있는 유일한 방법입니다.

레이어의 VIVO에서 2 광자 칼슘 이미징 마우스의 2 / 3

의 연결을 네트워크를 개발 자발적인 활동은 칼슘에 민감한 지표 염료의 AM - 에스테르 양식을 사용하여 측정할 수 있습니다. 의 연결을 활성화를 나타내는 세포 내 칼슘의 변화는 하나 또는 두 개의 광자 이미징과 형광 표시기에 일시적 변화로 감지됩니다. 이 프로토콜은 발달 종속의 연결 네트워크의 범위에 대해 적용할 수...

두피 네트워크 개발에 기능성 칼슘 이미징

이 프로토콜에서는, 우리는 영상 칼슘의 최근 진행 상황을...

Hypothalamic 마우스 뇌 슬라이스의 GFP 태그 뉴런의 영상 칼슘 응답

절차는 막 전위 또는 현재 및 세포 내 칼슘 농도의 변화를 동시에 기록하는 것으로 설명됩니다. 시교차상핵 뉴런은 전체 세포 패치 클램프 구성에서 패치 클램프 전극을 사용하여 칼슘 지시자 bis-fura-2로 채워집니다.

시교차상핵 뉴런(Suprachiasmatic Nucleus Neuron)의 동시 전기생리학적 기록과 칼슘 이미징(Simultaneous Electrophysiological Recording and Calcium Imaging of Suprachiasmatic Nucleus Neurons)

우리는 전체 세포 패치 - 클램프 및 마우스 뇌의 급성 조직 슬라이스에서 수상 돌기 및 해마 신경 세포의 쪽의 세포 내 나트륨 과도 다중 광자 이미징 신경 활성 화합물의 초점 UV 유도 된 사진 활성화의 조합을 설명합니다.

다중 광자 세포 내 나트륨 이미징 CA1 피라미드 뉴런의 글루타메이트의 UV 매개 초점 Uncaging과 결합

8 시간 - 몸에서 제거되면, 신경 조직은 크게 6 후 조직의 궁극적 인 저하로 이어지는, 환경 조건에 의해 영향을 받는다. 밀접하게 모니터링하고, 조직의 세포 외 환경을 조절하는 독특한 배양 방법을 사용하여 조직 생존을 현저&gt; 24 시간 동안 연장 될 수있다.

전기 생리학 및 칼슘 이미징에 대한 급성 신경 조직의 장기간 배양

우리는 전체 셀 패치 클램프 기록 및 2 광자 이미징 급성 뇌 조각에 신경 모 수석에 캘리포니아2 + 과도 기록 하는 방법 제시.

두뇌 조각에서 신경 모 수석에서 2 광자 칼슘 이미지

세포 칼슘 이미징은 독특한 기능적 시그니처를 제공하는 칼슘 투과성 채널 / 수용체의 발현을 기반으로 개별 세포, 배양 또는 각성 동물의 혼합 집단에서 동적 신호 전달을 연구하는 다목적 방법론입니다.

칼슘 이미징 기술로 뉴런-글리아 회로의 변화 시각화

현재 방법은 쉽게 사용할 수 있는 유전적으로 암호화된 칼슘 지표를 사용하여 예쁜꼬마선충에서 생체 내 고해상도 하위 구획 칼슘 이미징을 위한 비비율계량 접근 방식을 설명합니다.

생체 내에서 처리되는 신경 칼슘의 세포 내 이미징

이 논문에서는 Fura-2/AM 염료를 사용한 단일 세포 Ca2+ 이미징을 사용하여 세포 내 칼슘 이온(Ca2+) 농도를 실시간으로 정량적으로 모니터링하는 방법을 제시합니다. 이 기술은 효율적인 염료 로딩과 형광 강도 비율을 통한 Ca2+ 수준의 정확한 계산을 가능하게 하여 연구 응용 분야를 위한 간단하고 빠른 접근 방식을 제공합니다.

칼슘 이온 채널의 활성화를 연구하기 위한 Single-cell Calcium Imaging

배우세요 두피 뉴런에서 Fura-2 AM을 이용한 칼슘 이미징 방법을 통해 실시간 세포 내 칼슘 역학을 측정하는 기술입니다. 이 프로토콜은 신경과학 연구에서 칼슘 신호 전달을 분석하는 데 활용됩니다.

Fura - 2 오전 사용하여 두피 뉴런의 칼슘 이미징

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