Drosophila 애벌레 NMJ의 해부

이 절차는 해부 플레이트에 세 번째 instar 유충을 배치하는 것으로 시작됩니다. 핀은 유충의 뒤쪽과 앞쪽 끝에 배치됩니다. 가위는 유충을 자르는 데 사용되며 집게는 내부 장기를 제거하는 데 사용됩니다.

마지막으로, 유충 몸벽의 각 모서리에 4개의 핀을 더 배치하여 고정하는 동안 팽팽하게 유지합니다. 안녕하세요, 저는 Columbia University College of Physicians and Surgeons의 생리학 및 단독 생물물리학과의 Brian McCabe 연구실의 Jonathan Brent입니다. 오늘은 초파리 유충과 MJ 박리의 시술을 소개해 드리겠습니다.

우리는 실험실에서 신경근 접합 시냅스 발달을 연구하기 위해 이 절차를 사용합니다. 시작하겠습니다. 초파리 유충에는 hemi segment 당 30 개의 근육이 있으며 주변 체벽 내의 배열이 알려져 있습니다.

총 35개의 운동 뉴런이 매우 정형화된 패턴으로 이 근육에 신경을 분포시킵니다. 신경근 접합부 또는 NMJ에 접근하려면 적절한 해부를 통해 각 유충을 조심스럽게 해부해야 합니다. NMJ는 면역조직화학 또는 전기생리학의 이미징에 사용될 수 있습니다.

HL 3.1 버퍼를 해부 플레이트에 한 방울 떨어뜨려 절차를 시작합니다. 완충액은 미리 만들어져 얼음 위에서 냉각됩니다. 큰 SS 집게를 사용하여 바이알 측면에서 떠돌이 세 번째 끝 별 유충을 조심스럽게 선택합니다.

움직임은 유충이 번데기에 들어가지 않았음을 나타냅니다: 유충의 등쪽을 위로 향하게 하여 해부판의 완충 드롭에 놓습니다. 콜드 버퍼는 유충을 마취시키고 집게를 사용하여 유충을 가만히 유지합니다. 뒤쪽 구형 사이에 므누신 핀을 놓은 다음 두 번째 핀을 어두운 입 고리 가까이에 놓아 유충이 펴지고 활짝 열릴 준비를 하도록 합니다.

봄 가위를 사용하여 유충의 뒤쪽 끝을 향해 작은 수평 절개를 만듭니다. 가위의 날 하나를 sci에 삽입하고 유충의 앞쪽 끝을 향해 세로로 자릅니다. 그런 다음 핀의 왼쪽과 오른쪽으로 유충의 앞쪽 끝을 수평으로 절개합니다.

장과 같은 장기를 제거하기 위해 HL 3.1 완충액을 동물에 몇 방울 떨어뜨리면 장 및 기타 장기가 용액으로 떠오르고 집게를 사용하여 신체에서 떼어낼 수 있습니다. 또한 다른 장기와 함께 기관계를 제거한다. 이제 절개 부위에 의해 만들어진 플랩을 뒤로 고정하여 내부 신체 근육을 노출시킵니다.

신체 벽을 수평 및 수직으로 늘리십시오. 플랩을 고정할 때. 남아 있는 장기 조각을 제거하고 한 번 씻으십시오.

새로운 HL 3.1 완충액을 추가함으로써 유충은 이제 3.5%로 희석된 갓 만든 포름알데히드로 고정할 준비가 되었습니다. 정착 기간이 끝나면 HL 3.1 버퍼로 3분 동안 유충을 두 번 씻습니다. 핀을 조심스럽게 제거하고 필요한 경우 하나의 XPBS가 포함된 1.5mil 튜브로 유충을 옮깁니다.

유충은 섭씨 4도에서 최대 2일 동안 보관할 수 있습니다. 최적의 결과를 얻으려면 절개된 유충을 즉시 사용하십시오. 적절하게 해부된 초파리 유충에는 몇 가지 핵심 구성 요소가 있습니다.

첫째, 근육, 특히 6, 7, 4가 손상되지 않도록 주의해야 한다. 둘째, 동물을 적절하게 뻗어야 합니다. 그렇지 않으면 신경근 접합부에 접근하지 못하거나 구별할 수 없을 수 있습니다.

여기에서 제대로 해부된 유충을 볼 수 있습니다. NMJ를 명확하게 볼 수 있으며 이제 시스템을 실험할 준비가 되었습니다. 신경근 접합부를 연구하기 위해 식도 유충을 해부하는 방법을 보여드렸다.

이 절차를 수행할 때 근육을 그대로 이끄는 것이 중요하다. 근육이 손상되면 연구할 신경근 접합부가 없습니다. 그게 다야.

시청해 주셔서 감사드리며 실험에 행운을 빕니다.