Name: 수집 및 햄스터 Oocytes 및 마우스 태아의 Cryopreservation (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-03-27T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 36 s
Description: 학습하세요 햄스터 난자 수집 및 동결보존 방법을 통해 높은 해동 후 생존율을 확보하는 기술입니다. 이 방법은 마우스 배아에도 적용 가능하여 생식생물학 연구에 활용됩니다.

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이 작품은 스페인 정부의 드 Educación Y Ciencia (BIO 2006-11792)와 Generalitat 드 Catalunya (2005 - SGR00437)에 의해 지원되었다. 저자는 미디어를 준비하는 그들의 기술 지원을 마크 Puigcerver 및 Jonatan 루카스에게 감사를 표합니다. Servei D&#39; Estabulari의 모든 직원은 동물의 주택에 대한 인정, 그리고이 비디오의 일부를 녹화에서 자신의 추가적인 기여 특히 후안 호세 마틴과 하비에르 베니토입니다. NCB가 Ciência E Tecnologia과 SG는 스페인 정부의 드 Educación Y Ciencia의 동료입니다 포르투갈어 Fundação 파라의 동료입니다.

동물 보호 절차 동물과 바르셀로나, 스페인 Universitat Autònoma 인간 연구에 대한 윤리위원회의 승인 지침과 규정에 따라 실시되었다. I.의 Oocyte 컬렉션 <ol><li> 두꺼운 질 분비물 (postovulatory 방전)의 존재에 대한 골든 시리아 변형의, 여성 햄스터 (8-12주의 옛 Mesocricetus auratus)을 확인하고 선택합니다. </li><li> 60시간 나중에 PMSG 40 IU의 intraperitoneal 주사 (임산부 마레 세럼 생식 샘 자극 호르몬) hCG (인간 Chorionic 생식 샘 자극 호르몬)의 40 IU 다음으로 superovulate 선택한 여성을 유발. </li><li> 16 시간 이산화탄소 챔버의 hCG의 관리 후 여성의 햄스터를 안락사. </li><li> 로 비디오에 나타난 여성의 oviducts 격리하고 KSOM - H 매체의 드롭에게 전송할 수 있습니다. </li><li> 37 hyaluronidase (156 U / ML)의 드롭 입체 현미경 수란관 ampulla을 이간하여 oocyte - 큐뮬러스 단지를 수집 ° C. Oocytes은 약 5 분 큐뮬러스 세포에서 해방된 것입니다. </li><li> hyaluronidase의 oocytes을 들고 KSOM - H 매체에 두 번 그들을 씻으십시오. </li></ol> 마우스 배아의 수집을 위해, 여성 생쥐 (뮤스 musculus; 6-8주의 오래된)은 나중에 hCG 48 시간의 5 IU 다음과 남성 생쥐와 성관계를 PMSG 5 IU의 intraperitoneal 주사로 superovulate을 유도하고 있습니다. 암컷은 24-26에서 자궁 전위에 의해 희생되며, 44-46 또는 54-56시간 pronuclear, 2 셀 또는 4 셀 무대 배아, 각각의 obtention위한 hCG의 관리 후. 햄스터 oocytes에 대해 설명한 pronuclear 배아의 수집이 정확하게 수행됩니다. 2 셀 및 4 셀 단계에서 배아는 KSOM - H 매체 [6]로 oviducts 플러싱에 의해 저장됩니다. 참고 :이 프로토콜에 따라 약 20-30 oocytes / 배아 각 여성에서 수집한 수 있습니다. II. 솔루션을 동결 융해의 준비 <ol><li> KSOM - H (propilenglycol 1.5 M) 5 ML에 propilenglycol의 0.57 ML을 diluting로, 솔루션을 준비합니다. </li><li> 0.2052 g의 자당 (자당의 0.3 M)와 튜브에 KSOM - H 2 ML를 추가하여 해동 솔루션을 준비합니다. </li><li> 0.0684 g의 자당 (propilenglycol와 0.1 M의 자당 1.5 M)과 튜브에 솔루션 I 2 ML를 추가하여 냉동 솔루션을 준비합니다. </li></ol> 참고 : 솔루션 I 및 솔루션을 동결 융해가 그들의 사용하기 전에 준비를해야합니다. 그러나, 동결 융해 솔루션의 준비에 사용되는 자당의 지정된 금액을 사전에 가중치를하고 몇 개월 동안 상온에서 3 ML - 튜브에 저장되어있을 수 있습니다. III. 냉동 프로토콜 <ol><li> 전송 oocytes / KSOM - H 매체에서 솔루션 I의 드롭하고 실온에서 7~15분에 대해 품어 배아. </li><li> 한편, 그것이 동영상 (각 솔루션 / 밀짚 1 방울)에 나와있는 솔루션을 동결 융해 90 μl 방울을 배치하여 빨대를 로드할 90mm 페트리 접시를 준비합니다. </li><li> 냉동 솔루션 방울에 oocytes / 태아의 원하는 번호를 전송합니다. 참고 : 우리는 보통 5-30 oocytes 또는 태아 / 드롭 사이에 전송할 수 있습니다. </li><li> 입 제어 흡인 시스템에 빨대를 첨부하며이 순서를 따라 그것을 로드할 수 : 솔루션 I, 공기, oocytes, 공기, 해동 드롭, 공기 동결 드롭합니다. </li><li> 짚으로이로드되면, 첫 번째 드롭은 빨대와 물개이를 상단 끝에있는 폴리머에 도달 (솔루션 I) 도입까지 aspirating 유지. 열 인감 플라스틱 플러그와 밀짚이나 인감의 다른 쪽 끝을. </li><li> 프로그램 냉동고에 스위치와 냉동 프로그램을 선택합니다. 이 프로토콜에 사용되는 냉동이 프로그램은 원래 Lassalle 호텔 외 발행 냉각 속도에 따라 달라집니다. [7] : <ul><li> -7로 실온에서 2 ° C / 분 ° C 0 ° C / 10 분 분 시딩의 온도 평균 및 유도 수 있도록 (아래 참조) </li><li> -7에서 0.3 ° C / ° -30 분 ° C로 C 0 ° C / 2 분 분 온도 평균 수 있도록 </li><li> 35 ° C / 분, -30 ° C에서 -130 ° C로 </li></ul></li><li> 해동 솔루션의 드롭으로 빨대 부분이 바깥쪽을 향하게되어 있는지 확인하고, 프로그래밍 냉동실의 소유자의 슬롯에 빨대를로드합니다. 냉동 프로그램을 시작합니다. </li><li> 샘플 온도 -7 ° C 및 냉각이 보류 중이라에 도달하면, 수동 시딩을 수행합니다 : 액체 질소에 빠지게 포셉는 즉시 해결책을 해동의 방울이 들어있는 빨대의 일부분을 노출 약간 밖으로 냉동실의 소유자를 당겨하고, 포셉와 짚으로이 부분을 터치. 홀더 각 소유자와 각 밀짚을 반복하고 끝날 때까지 실행 냉동 프로그램을 보자. </li><li> 프로그램이 완료되면, 액체 질소의 소유자를 뛰어들다. </li><li> 에서 빨대를 제거표시 gobelet에게 전송 보유자합니다. </li><li> 마지막으로, 액체 질소 탱크 내부 gobelet를 저장합니다. </li></ol> IV. 프로토콜을 해동 <ol><li> 액체 질소 탱크에서 빨대를 제거합니다. </li><li> 40 초전에 실내 온도에 빨대를 유지합니다. </li><li> 40초 동안 30 ° C에서 물 목욕에 빨대를 적시게. </li><li> 짚을에서 플러그를 제거하거나 열 봉인 팁 잘라. </li><li> 35 mm 배양 접시에 짚을 비우기 부드럽게 냉동가 포함된 솔루션을 융해 두 방울을 섞는다. </li><li> 실온에서 15 분 혼합물에서 oocytes / 배아를 남겨주세요. </li><li> 37 추가 15 분 동안 KSOM - H의 새로운 드롭 oocytes / 배아를 전송 ° C. </li><li> Oocytes / 배아는 이제 더 이상 조작을위한 준비가되어 있습니다. </li></ol> 참고 : 6 단계와 7 단계 동안은 해동 oocytes / 배아는 천천히 rehydration로 인해 팽창되는가 나타납니다. V. 대표 결과 cryopreservation 프로토콜의 사용은 여기 햄스터 oocytes 약 95 %와&gt; 90 %, 85% 각각 pronuclear, 2 셀, 4 셀 단계에서 마우스 B6CBAF1 배아 80 %의 생존율에 결과를 발표했다. 마우스 배아는 해동 후 KSOM에 체외에서 양식하는 경우, 적어도 70-80% 최적의 문화 환경에 blastocyst 단계에 도달해야합니다. 그것은 당신이 각 냉동 실험에서 그 oocytes / 배아의 제어 그룹 (빨대)를 포함하는 것이 좋습니다 oocytes / 태아의 나머지 부분이 추가 조작에 사용되기 전에이 그룹을 녹여. 컨트롤 그룹에 대한 생존 속도가 예상보다 낮은 경우, 같은 많은 다른 빨대를 녹여. 이 두 번째 그룹의 생존 속도도 낮은 경우이 동결 많은에서 남은 빨대를 폐기하십시오.

<ol><li>Whittingham, D. G., Leibo, S. P., Mazur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+mouse+embryos+frozen+to+-196+and+-269+%C2%B0C%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Survival of mouse embryos frozen to -196 and -269 °C.</a> Science. 178, 411-414 (1972).</li>
<li>Wilmut, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+cooling+rate%2C+warming+rate%2C+cryoprotective+agent+and+stage+of+development+on+survival+of+mouse+embryos+during+freezing+and+thawing%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">The effect of cooling rate, warming rate, cryoprotective agent and stage of development on survival of mouse embryos during freezing and thawing.</a> Life Sci. 11, 1071-1079 (1972).</li>
<li>Parkening, T. A., Tsunoda, Y., Chang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+various+low+temperatures%2C+cryoprotective+agents+and+cooling+rates+on+the+survival%2C+fertilizability+and+development+of+frozen-thawed+mouse+eggs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Zool%22%5BJournal%5D)">Effects of various low temperatures, cryoprotective agents and cooling rates on the survival, fertilizability and development of frozen-thawed mouse eggs.</a> J. Exp. Zool. 197, 369-374 (1976).</li>
<li>Schneider, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryobiological+principles+of+embryo+freezing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+In+Vitro+Fert.+Embryo+Transf%22%5BJournal%5D)">Cryobiological principles of embryo freezing.</a> J. In Vitro Fert. Embryo Transf. 3, 3-9 (1986).</li>
<li>Vajta, G., Kuwayama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+cryopreservation+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Improving cryopreservation systems.</a> Theriogenology. 65, 236-244 (2006).</li>
<li>Duselis, A. R., Vrana, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrieval+of+mouse+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE%22%5BJournal%5D)">Retrieval of mouse oocytes.</a> JoVE. 3, (2007).</li>
<li>Lassalle, B., Testart, J., Renard, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryo+features+that+influence+the+success+of+cryopreservation+with+the+use+of+1%2C2+propanediol%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Human embryo features that influence the success of cryopreservation with the use of 1,2 propanediol.</a> Fertil. Steril. 44, 645-651 (1985).</li>
<li>Ibáñez, E., Grossmann, M., Vidal, F., Egozcue, J., Santaló, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopreservation+of+caprine+beta-lactoglobulin+transgenic+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Cryopreservation of caprine beta-lactoglobulin transgenic mouse embryos.</a> Cryobiology. 35, 290-298 (1997).</li>
<li>Dinnyes, A., Wallace, G. A., Rall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+genotype+on+the+efficiency+of+mouse+embryo+cryopreservation+by+vitrification+or+slow+freezing%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Reprod.+Dev%22%5BJournal%5D)">Effect of genotype on the efficiency of mouse embryo cryopreservation by vitrification or slow freezing.</a> Mol. Reprod. Dev. 40, 429-435 (1995).</li>
<li>Tateno, H., Kamiguchi, Y., Mikamo, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+freezing+and+thawing+method+of+hamster+oocytes+designed+for+both+the+penetration+test+and+chromosome+assay+of+human+spermatozoa%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Reprod.+Dev%22%5BJournal%5D)">A freezing and thawing method of hamster oocytes designed for both the penetration test and chromosome assay of human spermatozoa.</a> Mol. Reprod. Dev. 33, 202-209 (1992).</li>
<li>Biggers, J., McGuinnis, L. K., Raffin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+acids+and+preimplantation+development+of+the+mouse+in+the+protein-free+KSOM%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Amino acids and preimplantation development of the mouse in the protein-free KSOM.</a> Biol. Reprod. 63, 281-293 (2000).</li>
</ol>

이 프로토콜의 햄스터 oocytes와 마우스 배아가 성공적으로 cryopreserved 수로. 일단 냉동, oocytes / 배아가 무한정 액체 질소 탱크에 저장하고 원하는 어떤 시간이나 장소에서 복구할 수 있습니다. 이것은 필요한 때마다 사용하는 샘플을 거의 준비가 갖는 장점을 제공합니다. 한편,이 프로토콜은 또한 라이브 동물 식민지의 유지 관리를 위해 경제적이고 안전한 대안으로 가치 마우스 종자 (예 : 유전자 변형 라인 등)에서 배아 cryobanks를 생성하는 데 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 햄스터 oocytes 및 하이브리드 B6CBAF1 마우스 배아를 cryopreserve하도록 최적화됩니다하는 것이 중요합니다. 다른 유전 배경과 마우스 배아 중 후 해동의 생존 요금의 차이는 치료가 각 종 또는 oocytes / 배아의 변형에 cryopreservation 조건을 평가하고 oocyte의 발생 전에 적절한 프로토콜을 확립하기 위해 이동해야하므로, 8,9을 설명했습니다 또는 배아 cryobanks. 햄스터 oocyt...

<table><tbody><tr><td>재료명</td><td>유형</td><td>회사</td><td>카탈로그 번호</td><td>비고</td></tr><tr><td>French type mini-straw 0.25 ml</td><td></td><td>Mini-tub</td><td>13407/0010</td><td></td></tr><tr><td>hCG</td><td></td><td>Farma-Lepori, Spain</td><td>749036.4</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td></td><td>Sigma</td><td>H-3884</td><td></td></tr><tr><td>KSOM-H 배지</td><td></td><td></td><td></td><td>참조 [11]</td></tr><tr><td>액체 질소</td><td></td><td>Air Liquide</td><td></td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 플러그</td><td></td><td>Mini-tub</td><td>19046</td><td></td></tr><tr><td>PMSG</td><td></td><td>Intervet, Spain</td><td>1.614/8447</td><td></td></tr><tr><td>Propilenglycol</td><td></td><td>Fluka</td><td>82280</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td></td><td>Merck</td><td>107687</td><td></td></tr><tr><td>수술용 가위</td><td></td><td>Aesculap</td><td>BC-060R; BG-061R</td><td></td></tr><tr><td>열 밀봉기</td><td></td><td>SIZ</td><td>220</td><td></td></tr><tr><td>35 및 90 mm 배양 접시</td><td></td><td>Nunc</td><td>153066; 150350</td><td></td></tr><tr><td>10 ml 튜브</td><td></td><td>Greiner Bio-one</td><td>163160</td><td></td></tr><tr><td>질소 탱크</td><td></td><td>MVE, Cryogenics</td><td>XC 43/28</td><td></td></tr><tr><td>프로그래밍 가능 냉동고</td><td></td><td>Planner Products Ltd.</td><td>Kryo-10 Series III</td><td></td></tr><tr><td>포셉</td><td></td><td>Aesculap</td><td>BD-331R; BD-053R; OC-020R</td><td></td></tr></tbody></table>

수집 및 햄스터 oocytes 및 마우스 태아의 cryopreservation

Collection and Cryopreservation of Hamster Oocytes and Mouse Embryos

언제 위팅엄 배아와 oocytes 처음으로 성공적으로 30여 년 전에 cryopreserved되었습니다<i&gt; 외.</i&gt;<sup&gt; 1</sup&gt; 그리고 Wilmut<sup&gt; 2</sup&gt; 별도 Parkening, 마우스 배아는 ° C, 그리고 몇 년 후 -196에서 냉동 및 보관 수 있다고 설명<i&gt; 외</i&gt;.<sup&gt; 3</sup&gt;는 cryopreserved oocytes의 체외의 수정 (IVF)에 인한 사는 자식의 탄생을 보도했다. 이후, cryopreservation 기술의 사용이 급속도로 인간과 동물의 지원 복제의 관행과 동물 유전 자원 보존에 필수적인 요소가 될 확산되었습니다. 느린 동결 vitrification : 현재 oocytes과 배아를 cryopreserve하는 데 사용되는 두 가지 방법이 있습니다. 접근 방식의 다양한는 동물과 수천명의 아이들이 모두 기술과 수백만을 향상시키기 위해 노력하는 데 사용되었습니다 것은 cryopreserved 배아에서 태어난되었습니다. 그러나, cryopreservation 관련된 중요한 단점은 아직 얼음 결정 형성이 솔루션 효과​​ 및 삼투 충격 게시 - 해동 oocytes과 배아 여러 cryoinjuries을 일으킬 것 때문에, 극복해야합니다. 프로그램 냉동고와 느린 냉동은 일반적으로 화학적 독성과 삼투 충격와 관련된 cryoprotectants의 낮은 농도를 사용하는 장점을 가지고 있지만, 낮은 농도에서 얼음 결정 형성을 피하기 위해 자신의 능력이 제한됩니다. 느린 냉동은 또한 수동 또는 자동 시딩를 사용하여 피할 수 있어야합니다 supercooling 효과를 유도<sup&gt; 4</sup&gt;. vitrification 과정에서, cryoprotectants 높은 농도는 아이스 결정의 형성을 억제하고 물을 확정되는 glasslike vitrified 국가의 형성으로 이어질하지만, 확장되지 않습니다. 그러나, 때문에 사용 농도에 cyroprotectants의 독성에, oocytes / 배아는 액체 질소에 직접 샘플을 잠수함이 잠수하기 전에, 시간의 아주 짧은 기간과 최소 볼륨 솔루션 cryoprotectant 솔루션에 노출 수 있습니다<sup&gt; 5</sup&gt;. 그것도 고가의 장비 (프로그램 냉동고)가 필요하지 않습니다있는 매우 빠른 방법입니다 때문에 지난 10 년, vitrification 더 인기를 끌고있다. 그러나, 느린 냉동은 oocyte / 배아 cryopreservation에 가장 널리 사용되는 방법으로하고 있습니다. 이 동영상 기사에서 우리는 하이 포스트 - 해동 서바이벌 속도로 햄스터 oocytes를 수집하고 천천히 동결하는 방법을 단계별로, 보여줍니다. 동일한 절차도 성공적으로 동결과 preimplantation 개발의 다른 단계에 마우스 배아를 해동 적용할 수 있습니다.

이 동영상 기사에서 우리는 하이 포스트 - 해동 서바이벌 속도로 햄스터 oocytes를 수집하고 cryopreserve하는 방법에 대한 단계별 데모를 제시한다. 동일한 절차도 성공적으로 동결과 preimplantation 개발의 다른 단계에 마우스 배아를 해동 적용할 수 있습니다.

수집 및 햄스터 Oocytes 및 마우스 태아의 Cryopreservation

배아와 난모세포의 냉동 보존은 30여 년 전, Whittingham 등이 1 그리고 Wilmut가 2 각각 생쥐의 ...를 기술하며 처음으로 성공하였습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 프로토콜은 생쥐의 수란관에서 추출 oocytes 또는 초기 단계 수정된 배아에 대한 기법을 보여줍니다. infindibulum를 식별하고 그것에 뭉툭한 끝을 바늘을 삽입하는 기능은 제대로 절차를 수행하는 것이 필수적입니다.

마우스 Oocytes의 검색

Oocytes는 meiotic 성숙하는 동안 염색체 분리의 오류로 인해 aneuploidy하는 경향이 있습니다. Aneuploid 계란은 다운 증후군과 같은 불임, 유산 또는 발달 장애를 일으킬 수 있습니다. 여기서 우리는 oocytes과 meiotic 성숙을 연구하고 ploidy 평가 방법에 선택의 자료를 소개하는 방법을 설명합니다.

마우스 Oocyte의 Microinjection, 성숙과 Ploidy 평가

마우스 배아의 에틸렌 글리콜 기반 vitrification 방법이 설명되어 있습니다. 그것은 단순하고 낮은 배아 독성의 다른 방법에 유리하고, 따라서 근친과 유전자 - 수정된 생쥐를 포함하여 마우스의 여러 변종에 광범위하게 적용하실 수 있습니다.

에틸렌 글리콜 기반 Vitrification에 의한 마우스 태아의 Cryopreservation

비교 수종 접근 행동 neuroscientists가 특정 동물 모델의 특성으로 볼 구체적인 행동과 관련된 다양한 신경 생물학 요소를 탐험하실 수 있습니다. 자연 밀접하게 관련 종 사이의 행동의 차이를 발생의 활용이 기술은 침입 기법은 행동의 표현을 조작할 필요가 없습니다.

아버지의 응답의 신경 생물학을 맡은 이후로 비교 종의 접근법을 사용

여기 마우스 정자 cryopreservation을 위해 새로 개발된 I • Cryo 키트를 보여줍니다. 냉동 - 해동 정자와 두 개의 세포 단계의 배아 개발이 키트의 사용 5 마우스 종자에 지속적으로 개선되었다. 1.5 년 동안, 49 유전자 변형 마우스 라인 전 • Cryo 키트와 정자 cryopreservation에 의해 보관했다 나중에 성공적으로 IVF로 회복되었습니다.

전 · Cryo 키트를 사용하여 마우스 정자 Cryopreservation 및 복구

여기서는 마우스 난자 감수 스핀들 어셈블리 및 조직을 평가하기 위해 면역 분석 하였다 특정 된 siRNA 매개 mRNA의 파괴를위한 프로토콜을 제시한다. 이 프로토콜은 성적 증명서의 체외 고갈과 다른 스핀들 및 / 또는 난자에 MTOC 관련 요인의 기능 평가에 적합합니다.

siRNA를 매개 음소거로 마우스 난 모세포의 감수 스핀들 평가

이 문서는 효율적으로 파생 하 고 만능 마우스 배아 줄기 세포 라인 blastocyst 단계에서 문화 프로토콜을 설명 합니다.

마우스 Preimplantation 배아에서 줄기 세포 라인의

여기에서, 우리는 1 세포 배아의 동결 보존을 위한 수정된 방법 뿐만 아니라 유전자 변형 마우스의 효율적인 생성을 위한 동결 해동 된 배아 및 전기 천공의 사용을 결합하는 프로토콜을 제시한다.

유전자 변형 마우스의 고효율 생산을 위한 동결 해동 배아 사용

이 원고는 상업적 지원에 실험실에서 만든 미디어와 미숙한 고양이 난모세포의 최소 볼륨 바이트화에 대한 프로토콜을 설명합니다. 전 생체 부 조나에서 바이피화및 온난화에 이르는 난소 분리에서 부터 모든 단계를 다룹니다.

미성숙한 고양이 오키트의 최소 볼륨 바이트화

이 프로토콜은 마우스 난자의 시험관 내 성숙, 시험관 수정, 그리고 배아를 배반포 단계까지 배아 배양하는 절차를 설명합니다.

생쥐 난자 내 시험관 성숙, 수정 및 착상 전 배아의 배양

학습하세요 햄스터 난자 수집 및 동결보존 방법을 통해 높은 해동 후 생존율을 확보하는 기술입니다. 이 방법은 마우스 배아에도 적용 가능하여 생식생물학 연구에 활용됩니다.

수집 및 햄스터 Oocytes 및 마우스 태아의 Cryopreservation

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