해수 샘플링 및 수집

안녕하세요, 저는 브리티시컬럼비아 대학교 미생물학 및 면역학과의 Stephen Hallam 연구실 소속 Elena Kova입니다. 오늘은 물리적, 화학적 및 생물학적 분석을 위한 해수 채집 절차를 보여드리겠습니다. 저희 연구실에서는 해양수의 해양학적 파라미터를 연구하기 위해 이 절차를 사용합니다.

이제 시작해 보겠습니다. 먼저, 각 투하 횟수와 투하당 깊이를 지정한 후, 시료를 채취할 깊이와 해당 투하에서 수집할 총 부피를 결정합니다. go-flow 및 kin 수질 시료 채취 장치가 개방 위치에 있는지, 그리고 모든 밸브와 스피곳이 닫혀 있는지 확인하십시오.

CTD를 라인 바닥에 부착하고 프로파일의 가장 깊은 수심까지 물속으로 내립니다. CTD 바로 다음에 샘플링 장치를 라인에 장착하십시오. 라인이 장치 브래킷에 제대로 끼워졌는지 확인하고 나사를 조입니다.

가장 깊은 샘플링 깊이를 제외한 각 장치에 가중 메신저를 부착한 후 물속으로 내립니다. 라인을 내리고 첫 번째 지정된 깊이와 다음 깊이 사이의 거리를 맞춘 다음, 또 다른 샘플링 장치를 설치합니다. 대용량 수질 시료를 채취하는 깊이 구간의 경우, 총 2개의 12 liter 병을 약 0.75 meters 간격으로 연속적으로 장착한다는 점에 유의하십시오.

모든 장치가 라인에 설치되면, 라인을 가장 깊은 수심까지 내리고 2분 동안 기다립니다. 메신저를 내려보내 각 장치를 닫힘 위치로 작동시킵니다. 라인을 회수하기 전 몇 분 동안 기다립니다.

모든 장치가 닫혔는지 확인하기 위해 라인을 감아 올리고, 각 장치가 수면 위로 올라오는 대로 갑판에 내려놓으십시오. 단백질, DNA 또는 RNA 정제를 위해 대량의 샘플 부피가 필요한 수심의 경우, 두 개의 샘플링 장치를 연속적으로 사용하십시오. 한 병에서 RNA를 즉시 수집하고 선상에서 여과하십시오.

다른 병에서 화학 물질과 영양분을 채취한 후, 나머지 물을 차량(car)으로 배수하여 최종 부피를 20 liter로 맞춥니다. 저용량 시료의 경우, 멸균 Nalgene 병에 여과용 물 1 liter를 따로 보관합니다. 일반적으로 16개 수심 구간에서 채취한 저용량 시료는 1 liter 시료 16개로 수집하며, 고용량 시료는 20 liter 시료 6개로 수집합니다.

가스 샘플을 수집할 때는 항상 산소 및 미량 가스 샘플을 함께 채취하십시오. 먼저, 수중 샘플링 장치의 스피곳(spigot)에 얇은 튜브 조각을 부착합니다. 튜브의 반대쪽 끝을 glos 혈청 병에 넣으십시오.

혈청 병을 세 번 헹구되, 시료수를 사용하여 기포가 생기지 않도록 넘치게 채웁니다. 혈청 병에 50 µL의 염화수은을 첨가합니다. 시료에 기포가 유입되지 않도록 주의하십시오.

고무 스토퍼 C crimp와 알루미늄 캡으로 혈청 병을 밀봉한 후, 질산염, 인산염 및 규산염을 포함한 영양소 측정을 위한 시료를 수집하기 위해 얼음 위에 보관하십시오. 먼저 60 cc 주사기를 시료수로 헹굽니다. 그다음 0.2 micrometer acro disc 필터를 인라인으로 연결하십시오.

필터를 세척하기 위해 주사기로 약 2 ml의 물을 통과시킵니다. 폴리에틸렌 병을 약 10 ml의 여과수로 3회 헹굽니다.

헹굴 때 병을 흔들어 준 다음, 필터링된 시료수를 병의 약 4분의 3 정도까지 채웁니다. 시료는 얼음에 보관하십시오. 암모니아 측정용 시료를 수집하기 위해 원거리수 수집 튜브를 비웁니다.

먼저 수집 튜브를 헹군 후, 시료수를 완전히 채웁니다. 10 ml 메스실린더에 시료수를 채운 뒤, 5 ml의 시료수만 남기고 나머지 시료수는 실린더에서 비워냅니다. 그다음, 남겨둔 5 ml의 시료수를 빈 실린더에 다시 넣습니다.

모든 깊이에서 샘플 수집이 완료되면, 각 튜브에 암모늄 작업 시약 7.5 ml를 넣습니다. 세포 수 측정용 샘플을 수집하려면, 5.4 ml의 37% 포르말린이 들어 있는 미리 라벨을 붙인 50 ML Falcon 튜브에 최종 농도가 4%가 되도록 50 ml 표시선까지 채웁니다. 튜브가 넘치지 않도록 주의하십시오. 샘플 수집 후 샘플을 얼음 위에 보관하십시오.

황화수소 측정용입니다. 3 mL의 20% zinc acetate가 들어 있고 미리 라벨이 부착된 50 ML Falcon tube를 가득 채웁니다. 이때 튜브가 넘치지 않도록 주의하십시오.

소량의 샘플을 수집할 때는 얼음 위에 보관하십시오. 바이오매스 농축을 위해, 대량의 샘플을 수집할 때는 1리터 Nalgene 병에 가득 채우십시오.

20리터 카보이를 가득 채웁니다. 해수 샘플링의 최종 결과물은 약 32~48개, 가스 샘플 32개, 암모늄 샘플 32개입니다.

황화수소 샘플 16개. 세포 수 측정용 샘플 16개. 20L 카 6개, 1리터 병 16개, 그리고 sterex 4개.

미생물 바이오매스가 포함된 2.2 µm 필터는 나중에 사용하기 위해 보관합니다. RNA 분리. 지금까지 생화학적 분석을 위해 다양한 종류의 수질 시료를 수집하는 방법을 시연하였습니다.

이 작업에는 많은 준비와 계획이 필요합니다. 따라서 출발 전 이틀을 준비 기간으로 잡고, 종료 후 하루를 정리 기간으로 설정하십시오. 소금물이 페랄트 펌프(peralt pump)나 현장 장비 운송용 알루미늄 자고 박스(zago box)에 닿지 않도록 주의하십시오. 장비를 소중히 다루면 앞으로 오랫동안 유용하게 사용할 수 있을 것입니다.

이상으로 마치겠습니다. 시청해 주셔서 감사드리며, 귀하의 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.