Name: 해수 샘플링 및 수집 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-06-17T19:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: 배우세요 해수 샘플링 및 수집 방법을 통해 해양 생물학 및 환경 과학 연구를 수행하세요. 이 절차는 생물량 농축, 핵산 정제, 세포 수, 영양소 및 추적 가스 분석을 위한 다양한 하류 응용 분야에 활용됩니다.

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우리는 해안과 열린 바다 바닷물의 낮은 산소 지역에 지속적인 연구를 지원하기위한 혁신, 브리티시 컬럼비아 기술 개발 기금과 국립 과학 및 캐나다의 공학 연구 협의회 (NSERC)에 대한 캐나다 재단 감사드립니다. 또한, 도스는 NSERC, 킬람와 툴라 기초 미생물 다양성과 진화에 대한 재정 지원 센터에서 장학금으로 지원했다.

1 부 : 워터 콜렉션 <ol><li> 깊이는 각 주조에 할당됩니다. </li><li> 깊이는 샘플 수와 현재 캐스팅을 위해 수집하는 전체 볼륨이 결정됩니다. </li><li> 이것은 이동 - 플로와 Niskin 병이 열려 있으며, 그들의 밸브 및 spigots이 폐쇄되는 것을 보장합니다. </li><li> CTD는 라인의 맨 아래에 읽어와 물로 낮습니다. </li><li> 캐스팅에서 채취한 깊은 깊이에 대한 병 먼저 CTD 후 라인에로드되며 이것은 라인이 제대로 브라켓에 장착되어 보장되고 나사가 강화됩니다. </li><li> 메신저가 저하되기 전에 (가장 깊은 제외한) 각 병에 첨부되어 있습니다. </li><li> 라인은 첫 번째 깊이와 다음 사이의 거리를 저하되며 한병 그런 다음로드됩니다. 그것은 20L가 여과에 대한 수집 아르 깊이에 대해, 2 12L 병 총이 떨어져 0.75 m에 대해 연속적으로로드되는 것을인지해야합니다. </li><li> 모든 병이 달린되면, 라인은 원하는 깊이에 넣어 져서 2 분 통과 허용됩니다. </li><li> 메신저가 아래로 전송되고 몇 분 모든 병 가까이를 보장하기 위해 전달 사용할 수 있습니다. </li><li> 라인에 reeled하고 그들이 랙에에 와서 같이 병이 언로 드됩니다. </li><li> DNA와 RNA에 대한 20L 샘플을 필요로 깊이 들어, 두 Niskin 병을 수집합니다. 다른이 상자 속에 든 대형 유리병에 탈진하는 동안 한 병은, 화학 매개 변수 (아래 참조) 샘플하는 데 사용됩니다. RNA는 두 번째 Niskin에서 즉시 수집됩니다. 최초의 나머지 부분도 ~ 20L 최종 볼륨을 줄 수있는 상자 속에 든 대형 유리병에 새겨 졌던 것입니다. 저해상도 샘플 물만이 1L는 무균 Nalgene 병의 여과를 위해 별도로 설정됩니다. </li></ol> 2 부 : 가스 샘플 모음 <ol><li> 산소 샘플이 필요한 경우, 먼저 수집하고 있습니다. </li><li> 얇은 튜브의 조각은 Niskin에 첨부된 / 이동 - 플로 삽입 및 튜브의 다른 쪽 끝을은 유리 혈청 병으로 자리를 배치됩니다. </li><li> 혈청 병은 샘플 물로 3 번 씻어서하고, 기포가 존재하지 않는 등으로 가득차있다. </li><li> 50μl 수은 염화물 (HgCl 2) 샘플로 공기 방울을 소개하지 않는 방식으로 혈청 병에 추가됩니다. </li><li> 병은 고무 마개와 알루미늄 마개와 곱슬머리로 밀폐되어 있고, 다음 냉장고에서 얼음에 저장됩니다. </li></ol> 파트 3 : 영양소 샘플 모음 <ol><li> 60 CC 주사기가 샘플 물로 씻어서입니다 (0.2 μm의)가 온라인에 연결되어 일부 물이 acrodisc을 통해 밀려있다. </li><li> 폴리에틸렌 병은 (rinsing 때 병을 흔들) ~ 10 ML 여과 물을 3 번 씻어서입니다. </li><li> 필터링 샘플 물은 약 ​​병에 추가됩니다 벗어 가득. </li><li> 예제는 냉장고에 얼음에 저장됩니다. </li></ol> 4 부 : 암모니아 샘플 모음 <ol><li> 샘플 튜브가 샘플 물로 씻어서 있습니다. </li><li> 샘플 튜브가 샘플 물로 완전히 채워지게된다. </li><li> 샘플 물 5ml는 10ml의 pipet을 사용하여 밖으로 이동되며, 튜브에 물을 나머지는 폐기되고 pipet 팁에서 5ml가 샘플 튜브로 대체됩니다. </li><li> 모든 깊이에서 샘플을 수집되고 나면 작업 암모늄 시약의 7.5ml은 각 튜브에 추가됩니다. </li></ol> 제 5 부 : 휴대 열거를위한 샘플 수집 <ol><li> 5.4 ML 37 % 포름 알데히드를 포함하는 미리 표시 50 ML 팰컨 튜브 4 %의 최종 농도에 대한 위로 가득 차 있습니다. 주의 누설하지 않도록합니다. </li></ol> 파트 6 : 수소 황화물 측정 샘플 수집 <ol><li> 20 % 아연 아세테이트 (Zn (O 2 CCH 3) 2)가 포함된 사전 라벨 50 ML 팰컨 튜브가 제일 첫번째로 가득 차 있습니다. 주의 누설하지 않도록합니다. </li></ol> 7 부 : 바이오 매스 농도에 대한 소량의 수집 <ol><li> 1 리터 병은 위로 채워진다. </li></ol> 8 부 : 바이오 매스 농도에 대한 대량 수집 <ol><li> 20 리터 carboys이 채워집니다. </li></ol> 파트 9 : 대표 결과 약 12 용존산소 샘플, 32-48 가스 샘플, 16 영양 샘플, 32 암모늄 샘플, 16 황화수소 샘플, 셀 카운트 16 샘플, 6 20 리터 carboys, 16 1 리터 병에 결과를 샘플링 해수의 최종 결과 및 미생물 바이오 매스를 포함하는 4 Sterivex 0.22μm 필터는 나중에 RNA와 보존.

<ol><li>Cline, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectrophotometric+determination+of+hydrogen+sulfide+in+natural+waters%5BTitle%5D)+AND+%22Limnology+%26+Oceanography%22%5BJournal%5D)">Spectrophotometric determination of hydrogen sulfide in natural waters.</a> Limnology & Oceanography. 14, 454-458 (1969).</li>
<li>Holmes, R. M., Aminot, A., Kerouel, R., Hooker, B. A., Peterson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+precise+method+for+measuring+ammonium+in+marine+and+freshwater+ecosystems%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+fisheries+and+Aquatic+Science%22%5BJournal%5D)">A simple and precise method for measuring ammonium in marine and freshwater ecosystems.</a> Canadian Journal of fisheries and Aquatic Science. 56, 1801-1808 (1999).</li>
</ol>

저자들은 공개할 사항이 없습니다.

전반적으로,이 샘플링 이러한 유형의에 필요한 준비와 계획의 큰 거래이므로 여행 모든 걸 정리 해 줘서 나중에 주문하고 하루 만에 물건을 얻기 위해서는 예산 이일 전에. 일반적으로, 소금물은 연동 펌프와 접촉하거나 필드 장비를 수송하는 데 사용되는 알루미늄 Zarges 상자에 오게하지 않습니다. 존중과 장비를 취급하고 오실 오랫동안 잘 수행합니다.

<table><tbody><tr><td>20L 카보이</td><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>02-960-15</td><td></td></tr><tr><td>3/8&quot; Tygon 튜빙</td><td></td><td>Cole-Parmer</td><td>06429-36</td><td></td></tr><tr><td>Sterivex 필터</td><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>SVG010RS</td><td></td></tr><tr><td>프리필터 하우징 유닛</td><td></td><td>AMD</td><td>501200</td><td></td></tr><tr><td>루어 피팅</td><td></td><td>Cole-Parmer</td><td>31507-27</td><td></td></tr><tr><td>1/4&quot; Tygon 튜빙</td><td></td><td>Cole-Parmer</td><td>06429-24</td><td></td></tr><tr><td>1/4&quot; Tygon 튜빙</td><td></td><td>Cole-Parmer</td><td>06429-24</td><td></td></tr><tr><td>1/4&quot; Tygon 튜빙</td><td></td><td>Cole-Parmer</td><td>06429-24</td><td></td></tr><tr><td>50ml 플라스틱 튜브</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>유리 세럼 병</td><td></td><td></td><td></td><td>유리 시료 수집용</td></tr><tr><td>유리 세럼 병용 셉타 및 알루미늄 캡</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>핸드 크림퍼</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>20-200ul 피펫 및 팁</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>유리 튜브</td><td></td><td></td><td></td><td>암모늄 시료 수집용</td></tr><tr><td>30ml 플라스틱 병</td><td></td><td></td><td></td><td>영양염 수집용</td></tr><tr><td>Acrodisc 필터</td><td></td><td>EMD Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5 ml 튜브</td><td></td><td></td><td></td><td>아질산염 시료 수집용</td></tr><tr><td>37% 포름알데히드</td><td>시약</td><td></td><td></td><td>세포 수 측정 시료용</td></tr><tr><td>20% 아세트산 아연</td><td>시약</td><td></td><td></td><td>황화물 시료용</td></tr><tr><td>염화 수은</td><td>시약</td><td></td><td></td><td>가스 시료용</td></tr><tr><td>milliQ water</td><td>시약</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>암모늄 작업 시약</td><td>시약</td><td></td><td></td><td>붕산염 완충액, 아황산나트륨, orthophaladialdehyde</td></tr><tr><td>설파닐아미드</td><td>시약</td><td></td><td></td><td>물 450ml와 HCl 50ml에 5g 혼합</td></tr><tr><td>N-(1-naphthy)-ethylenediamine dihydrochloride 용액</td><td>시약</td><td></td><td></td><td>물 500ml에 0.5g 혼합</td></tr></tbody></table>

해수 샘플링 및 수집

Seawater Sampling and Collection

이 동영상은 문서 해안 해양 물 샘플을 수집 및 바이오 매스 농도, 핵산 정화, 세포 풍부, 영양 및 추적 가스 분석 등 다양한 어플 리케이션을위한 스트림을 처리하는 방법을. 오늘의 데모 샘플 사니치 후미에 HMS 존 스트 리클 랜드 운영의 갑판에서 수집되었다. 다목적 윈치 및 케이블 시스템 데릭 A - 프레임, Niskin와 함께 사용하거나 이동 - 플로 물 샘플링 병입니다. 전도도, 온도 및 깊이 (CTD) 센서도 기본 물의 질량을 샘플하는 데 사용됩니다. outgassing 최소화하려면, 추적 가스 샘플 먼저 수집하고 있습니다. 그런 다음, 영양분, 물 화학, 세포 카운트가 결정됩니다. 마지막으로, 바닷물은 바이오 매스 여과를 위해 수집됩니다. 단일 캐스트에 대한 설정 및 수집 시간은 215m 최대 깊이에 ~ 1.5 시간입니다. 따라서 6 시간 총 일반적으로 여기에서 설명한 컬렉션 시리즈를 완료하는 데 필요합니다.

이 동영상은 문서 해안 해양 물 샘플을 수집 및 바이오 매스 농도, 핵산 정화, 세포 풍부, 영양 및 추적 가스 분석 등 다양한 어플 리케이션을위한 스트림을 처리하는 방법을.

본 영상은 연안 해수 시료를 채취하고, 바이오매스를 포함한 다양한 후속 응용 분석을 위해 이를 처리하는 방법을 기록하고 있습니다...

안녕하세요, 저는 브리티시컬럼비아 대학교 미생물학 및 면역학과의 Stephen Hallam 연구실 소속 Elena Kova입니다. 오늘은 물리적, 화학적 및 생물학적 분석을 위한 해수 채집 절차를 보여드리겠습니다. 저희 연구실에서는 해양수의 해양학적 파라미터를 연구하기 위해 이 절차를 사용합니다.이제 시작해 보겠습니다. 먼저, 각 투하 횟수와 투하당 깊이를 지정한 후, 시료를 채취할 깊이와 해당 투하에서 수집할 총 부피를 결정합니다. go-flow 및 kin 수질 시료 채취 장치가 개방 위치에 있는지, 그리고 모든 밸브와 스피곳이 닫혀 있는지 확인하십시오.CTD를 라인 바닥에 부착하고 프로파일의 가장 깊은 수심까지 물속으로 내립니다. CTD 바로 다음에 샘플링 장치를 라인에 장착하십시오. 라인이 장치 브래킷에 제대로 끼워졌는지 확인하고 나사를 조입니다.가장 깊은 샘플링 깊이를 제외한 각 장치에 가중 메신저를 부착한 후 물속으로 내립니다. 라인을 내리고 첫 번째 지정된 깊이와 다음 깊이 사이의 거리를 맞춘 다음, 또 다른 샘플링 장치를 설치합니다. 대용량 수질 시료를 채취하는 깊이 구간의 경우, 총 2개의 12 liter 병을 약 0.75 meters 간격으로 연속적으로 장착한다는 점에 유의하십시오.모든 장치가 라인에 설치되면, 라인을 가장 깊은 수심까지 내리고 2분 동안 기다립니다. 메신저를 내려보내 각 장치를 닫힘 위치로 작동시킵니다. 라인을 회수하기 전 몇 분 동안 기다립니다.모든 장치가 닫혔는지 확인하기 위해 라인을 감아 올리고, 각 장치가 수면 위로 올라오는 대로 갑판에 내려놓으십시오. 단백질, DNA 또는 RNA 정제를 위해 대량의 샘플 부피가 필요한 수심의 경우, 두 개의 샘플링 장치를 연속적으로 사용하십시오. 한 병에서 RNA를 즉시 수집하고 선상에서 여과하십시오.다른 병에서 화학 물질과 영양분을 채취한 후, 나머지 물을 차량(car)으로 배수하여 최종 부피를 20 liter로 맞춥니다. 저용량 시료의 경우, 멸균 Nalgene 병에 여과용 물 1 liter를 따로 보관합니다. 일반적으로 16개 수심 구간에서 채취한 저용량 시료는 1 liter 시료 16개로 수집하며, 고용량 시료는 20 liter 시료 6개로 수집합니다.가스 샘플을 수집할 때는 항상 산소 및 미량 가스 샘플을 함께 채취하십시오. 먼저, 수중 샘플링 장치의 스피곳(spigot)에 얇은 튜브 조각을 부착합니다. 튜브의 반대쪽 끝을 glos 혈청 병에 넣으십시오.혈청 병을 세 번 헹구되, 시료수를 사용하여 기포가 생기지 않도록 넘치게 채웁니다. 혈청 병에 50 µL의 염화수은을 첨가합니다. 시료에 기포가 유입되지 않도록 주의하십시오.고무 스토퍼 C crimp와 알루미늄 캡으로 혈청 병을 밀봉한 후, 질산염, 인산염 및 규산염을 포함한 영양소 측정을 위한 시료를 수집하기 위해 얼음 위에 보관하십시오. 먼저 60 cc 주사기를 시료수로 헹굽니다. 그다음 0.2 micrometer acro disc 필터를 인라인으로 연결하십시오.필터를 세척하기 위해 주사기로 약 2 ml의 물을 통과시킵니다. 폴리에틸렌 병을 약 10 ml의 여과수로 3회 헹굽니다.헹굴 때 병을 흔들어 준 다음, 필터링된 시료수를 병의 약 4분의 3 정도까지 채웁니다. 시료는 얼음에 보관하십시오. 암모니아 측정용 시료를 수집하기 위해 원거리수 수집 튜브를 비웁니다.먼저 수집 튜브를 헹군 후, 시료수를 완전히 채웁니다. 10 ml 메스실린더에 시료수를 채운 뒤, 5 ml의 시료수만 남기고 나머지 시료수는 실린더에서 비워냅니다. 그다음, 남겨둔 5 ml의 시료수를 빈 실린더에 다시 넣습니다.모든 깊이에서 샘플 수집이 완료되면, 각 튜브에 암모늄 작업 시약 7.5 ml를 넣습니다. 세포 수 측정용 샘플을 수집하려면, 5.4 ml의 37% 포르말린이 들어 있는 미리 라벨을 붙인 50 ML Falcon 튜브에 최종 농도가 4%가 되도록 50 ml 표시선까지 채웁니다. 튜브가 넘치지 않도록 주의하십시오. 샘플 수집 후 샘플을 얼음 위에 보관하십시오.황화수소 측정용입니다. 3 mL의 20% zinc acetate가 들어 있고 미리 라벨이 부착된 50 ML Falcon tube를 가득 채웁니다. 이때 튜브가 넘치지 않도록 주의하십시오.소량의 샘플을 수집할 때는 얼음 위에 보관하십시오. 바이오매스 농축을 위해, 대량의 샘플을 수집할 때는 1리터 Nalgene 병에 가득 채우십시오.20리터 카보이를 가득 채웁니다. 해수 샘플링의 최종 결과물은 약 32~48개, 가스 샘플 32개, 암모늄 샘플 32개입니다.황화수소 샘플 16개. 세포 수 측정용 샘플 16개. 20L 카 6개, 1리터 병 16개, 그리고 sterex 4개.미생물 바이오매스가 포함된 2.2 µm 필터는 나중에 사용하기 위해 보관합니다. RNA 분리. 지금까지 생화학적 분석을 위해 다양한 종류의 수질 시료를 수집하는 방법을 시연하였습니다.이 작업에는 많은 준비와 계획이 필요합니다. 따라서 출발 전 이틀을 준비 기간으로 잡고, 종료 후 하루를 정리 기간으로 설정하십시오. 소금물이 페랄트 펌프(peralt pump)나 현장 장비 운송용 알루미늄 자고 박스(zago box)에 닿지 않도록 주의하십시오. 장비를 소중히 다루면 앞으로 오랫동안 유용하게 사용할 수 있을 것입니다.이상으로 마치겠습니다. 시청해 주셔서 감사드리며, 귀하의 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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연구

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