Name: 연안 해수 샘플을 소량 (1 - 3L)은 여과 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-06-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 21 s
Description: 배우세요 연안 해수 샘플을 소량 여과하여 미생물 바이오매스를 수집하는 방법을. 펌프와 스테릭스 필터를 사용하여 해양 미생물 다양성 연구에 필수적인 실험 기술을 익히세요.

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우리는 해안과 열린 바다 바닷물의 낮은 산소 지역에 지속적인 연구를 지원하기위한 혁신, 브리티시 컬럼비아 기술 개발 기금과 국립 과학 및 캐나다의 공학 연구 협의회 (NSERC)에 대한 캐나다 재단 감사드립니다. 도스는 NSERC, 킬람와 툴라 기초 미생물 다양성과 진화에 대한 투자 센터에서 장학금으로 지원했다.

<ol><li> 여과 장치의 설정 <ol><li> 필터링하기 전에 먼저 전체 병으로부터 응축을 닦아 그것을 달다 </li><li> 다른에있는 펌프의 한쪽 압력솥 빈, 그리고 폐기물 플라스크를 놓습니다. </li><li> 다음 압력솥 빈의 전체 샘플 병을 배치하지만, 아직 병 뚜껑을 제거하지 마십시오. </li><li> 튜빙의 luer 끝이 술병에 수 있도록 연동 펌프를 통해 튜빙을 전달합니다. </li><li> 핀셋을 사용하여 살균 25 ML의 피펫에서 목화를 제거하고, 튜브의 다른 끝에 피펫을 첨부합니다. </li></ol></li><li> 해수 여과 <ol><li> 해수를 필터링 시작하려면 용기를 열고 피펫을 삽입합니다. 펌프의 전원을 켜고 1 흐름 속도를 설정할 수 있습니다. 물이가 올바른 방향으로 나오지되도록보세요. </li><li> 물 ~ 100 ML은 전체 튜브 통과하도록 허용합니다. </li><li> 펌프를 끄고 튜브의 자유로운 끝에 남자 luer 피팅에 Sterivex 필터를 첨부합니다. </li><li> 어떤 물이 병에 남아되지 않습니다 때까지 계속 필터링. </li></ol></li><li> 필터 저장 <ol><li> 필터를 저장하려면 먼저 30-60 ML의 주사기와 함께 남아있는 물을 추방. </li><li> Parafilm와 Sterivex 필터의 바닥을 봉쇄해. 피펫을 사용하여 시약의 저장뿐만 아니라를 위해 필터의 공간 ~ 200 UL을 유지, 필터 1.8ml 용해 버퍼를 추가합니다. </li><li> 그런 다음, Parafilm의 작은 조각으로 Sterivex 필터의 상단을 밀봉하고, 날짜와 샘플 식별과 필터를 라벨. </li><li> -80에 사전 라벨 50 ML 팔콘 튜브에 필터를 저장 ° C </li></ol></li><li> 정리 <ol><li> 0.1 % HCL을 포함하는 플라스크에 25 ML의 피펫을 삽입하고, 펌프를 전환합니다. </li><li> HCL 세척 후, autoclaved 물을 튜빙을 씻어. 마지막으로, 측정 및 필터를 통과 물의 볼륨을 계산하기 위해 지금 빈 1L 병의 질량을 기록합니다. </li></ol></li></ol> 대표 결과 : 각 1 L의 물 샘플은 0.22 μm의보다 큰 바이오 매스를 포함 한 Sterivix 필터를 산출. 이것은 이후 DNA 추출 및 분석을위한 용해 버퍼에 저장됩니다. 최종 결과 한 Sterivix의 용해 버퍼에 저장된 1 리터 병 당 필터 및 DNA 추출을위한 준비로 구성되어 있습니다. 필터는 0.22 μm의보다 큰 바이오 매스가 포함되어 있습니다. 필터는 -80 ° C 이전 에드나 추출 속도로 저장할 수 있습니다.

저자들은 공개할 이해관계가 없습니다.

그것은 달리 장비를 부식 것이다 소금물의 느린 흔적을 제거하는 데 사용 후 젖은 수건으로 벤치와 펌프를 닦아 필수적입니다. 절차는 간단하지만, 시간 요구 사항이 필터링되는 예제에서 바이오 매스이나 먼지의 농도에 따라 광범위한 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>연동 펌프</td><td>Masterflex (Cole Palmer)</td><td>77913-20, 77200-62, 77200-04</td><td></td></tr><tr><td>Tygon LFL 튜빙</td><td>Masterflex (Cole Palmer)</td><td>06429-24</td><td>여과 장치용</td></tr><tr><td>호스 클램프</td><td>Cole-Parmer</td><td>0683204</td><td>여과 장치용</td></tr><tr><td>1/4&amp;#8221; x 3/16&amp;#8221; 파이프 어댑터</td><td>Cole-Parmer</td><td>31702-20</td><td>여과 장치용</td></tr><tr><td>폴리프로필렌 프리필터 하우징</td><td>ADVANTEC</td><td>501200</td><td>여과 장치용</td></tr><tr><td>금속 루어 피팅 (호스 끝단-수루어 락)</td><td>Cole-Parmer</td><td>31507-27</td><td>여과 장치용</td></tr><tr><td>2&amp;#8220; 자석</td><td></td><td></td><td>여과 장치용</td></tr><tr><td>3포트 카보이 캡</td><td></td><td></td><td>여과 장치용</td></tr><tr><td>GV 0.22 &amp;mu;m STERIVIX 필터</td><td>EMD Millipore</td><td>SVGV01R5</td><td></td></tr><tr><td>47 mm 직경 2.7 &amp;mu;m GF/D 필터</td><td>Whatman, GE Healthcare</td><td>1823047</td><td></td></tr><tr><td>용해 버퍼</td><td></td><td></td><td>0.75 M sucrose, 40 mM EDTA, 50 mM Tris (pH 8.3)</td></tr><tr><td>0.1 % HCl</td><td></td><td></td><td>여과 후 세척용</td></tr><tr><td>고압증기멸균수</td><td></td><td></td><td>여과 후 세척용</td></tr></tbody></table>

연안 해수 샘플을 소량 (1 - 3l)은 여과

Small Volume (1-3L) Filtration of Coastal Seawater Samples

흐름은 하류 미생물 커뮤니티 해안 해양 물, 영양 및 추적 가스 분석의 수집과 함께 시작됩니다. 오늘의 데모 샘플 사니치 후미에 HMS 존 스트 리클 랜드 운영의 갑판에서 수집되었다. 이 동영상은 문서 소량 (~ 1 L) 물 기둥에서 미생물 바이오 매스의 여과. 바이오 매스의 크기 수업 컷 - 오프 필터 0.22 μm의 아래로 수집하므로, 여기에는 사전에 여과 단계가 없습니다 : 프로토콜은 큰 볼륨 샘플링 프로토콜 하나의 큰 차이와, 앞에서 설명한의 확장 기능입니다. 샘플 핵산 분석에 이상적입니다 이런 방식을 수집했습니다. 설정, 여과 및 정리 단계는 각 20~30분 정도 걸릴. 8 최대 샘플은 동시에 필터링 수, 동시에 두 연동 펌프를 사용하는 경우. 샘플링 여행 사이의 biofilm 형성을 방지하기 위해, 모든 여과 장비는 희석 HCL 및 탈이온수로 씻어서 바로 사용 후 autoclaved해야합니다.

이 동영상은 문서 소량 (~ 1 L) 물 기둥에서 미생물 바이오 매스의 여과.

연안 해수 샘플을 소량 (1 - 3L)은 여과

작업 흐름은 이후 진행될 미생물 군집, 영양염 및 미량 가스 분석을 위한 연안 해수 수집으로 시작됩니다. 오늘 진행할...

안녕하세요, 저는 브리티시 컬럼비아 대학교 미생물학 및 면역학과의 Steven Hallam 실험실 소속 David Walsh입니다. 오늘은 미생물 바이오매스 분석을 위해 소량의 해수를 여과하는 절차를 보여드리겠습니다. 저희 실험실에서는 해양 환경의 미생물 다양성을 연구하기 위해 이 절차를 사용하고 있습니다.그럼 시작하겠습니다. 여과를 시작하기 전, 먼저 가득 찬 병에 맺힌 응결수를 닦아내고 무게를 잽니다. 펌프의 한쪽에는 오토클레이브 빈을 배치하고, 반대쪽에는 오토클레이브 빈에 담긴 폐액 플라스크를 배치합니다.그 다음, 샘플 병을 가득 채워 오토클레이브 빈에 넣습니다. 이때 병의 캡은 아직 제거하지 마십시오. 튜빙의 루어 끝부분이 비커 안에 위치하도록 튜빙을 연동 펌프에 통과시킵니다.핀셋을 사용하여 멸균된 25 milliliter 피펫에서 솜을 제거한 후 피펫을 튜브의 반대쪽 끝에 연결합니다. 해수 여과를 시작하려면 병을 열고 피펫을 삽입합니다. 펌프를 켜고 유속을 1로 설정한 다음, 물이 올바른 방향으로 펌핑되고 있는지 확인하십시오.약 100 milliliters의 물이 전체 튜빙을 통해 흐르도록 합니다. 펌프를 끄고 튜빙의 자유단에 있는 수컷 루어 피팅에 stev X 필터를 부착한 후, 필터를 폐액 플라스크에 넣습니다. 펌프를 켜고 유속을 1로 설정합니다.병에 물이 더 이상 남지 않을 때까지 여과를 계속합니다. 필터를 보관하려면, 먼저 30 내지 60 milliliter 시린지를 사용하여 남아 있는 물을 모두 배출하십시오.피펫을 사용하여 필터에 1.8 milliliters의 용해 버퍼를 추가하되, 필터 내에 약 200 microliters의 공간을 남겨둡니다. 향후 시약 추가를 위해, x 필터의 상단과 하단을 작은 파라필름 조각으로 밀봉하고 필터에 날짜와 시료 식별 번호를 기입합니다. 라벨이 부착된 50 milliliter Falcon 튜브에 필터를 넣어 minus 80 degrees Celsius에서 보관하십시오.0.1% 염산을 포함하는 플라스크에 25 milliliter 피펫을 넣고 펌프를 켭니다. 염산 세척 후, 튜브를 멸균수로 헹굽니다. 마지막으로, 필터를 통과한 물의 부피를 계산하기 위해 비어 있는 1 liter 병의 질량을 측정하고 기록합니다.1L의 각 수분 시료는 0.2µm 이상의 바이오매스가 포함된 X 필터 1개로 회수됩니다. 이는 이후의 DNA 추출을 위해 용해 버퍼(lysis buffer)

small-volume-1-3l-filtration-of-coastal-seawater-samples

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 동영상은 문서 해안 해양 물 샘플을 수집 및 바이오 매스 농도, 핵산 정화, 세포 풍부, 영양 및 추적 가스 분석 등 다양한 어플 리케이션을위한 스트림을 처리하는 방법을.

해수 샘플링 및 수집

물 칼럼에서 0.22μm와 직경 2.7μm 사이의 범위 미생물 바이오 매스의이 동영상은 문서 대형 볼륨 (≥ 20 L) 여과,.

대량 연안 해수 샘플 (20L +) 여과

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이 프로토콜은 해수 및 생물학적 표본에서 지질의 결정을 위한 것입니다. 여과류의 지질은 고체의 경우 클로로폼 또는 클로로폼및 메탄올혼합물로 추출됩니다. 지질 클래스는 화염 이온화 감지와 막대 얇은 층 크로마토그래피에 의해 측정되고 그들의 합계는 총 지질 함량을 제공합니다.

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배우세요 연안 해수 샘플을 소량 여과하여 미생물 바이오매스를 수집하는 방법을. 펌프와 스테릭스 필터를 사용하여 해양 미생물 다양성 연구에 필수적인 실험 기술을 익히세요.

연안 해수 샘플을 소량 (1 - 3L)은 여과

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