Name: Homarus Americanus Stomatogastric 신경계의 해부 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 22 s
Description: 학습하세요 미국바닷가재(Homarus americanus) 위장에서 미세해부법으로 고립한 위장신경계의 분리 기법을 통해 신경회로 기능 연구에 활용하는 방법을 배우세요.

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우리는 고문, 박사 이브 Marder을 인정하고 싶습니다. 이 연구는 AE T.에 이브 Marder와 NS059255에 건강 보조금 NS17813 국립 연구소에 의해 지원되었다

전에이 프로토콜을 처음으로 바다 가재의 뱃속은 동물에서 제거하고 동반자 조브 문서 (비어만 &amp; 토빈, 2009)에서 설명한대로 준비합니다. 아래에 설명된 단계의 대부분은 해부 현미경 하에서 수행되어야하는 것입니다. 부품 Commissural 신경을 난 - 분리 <ol><li> 동양 요리 너무 앞쪽에 끝이 (입술로) 당신과 뒷부분 끝 (pylorus에서) 떨어져있다는 사실을 향해있다. </li><li> 그것은 접시에 가능한 평면 거짓말 있도록 위가 고정된되었는지 확인하십시오. <ol><li> 입술의 양쪽에있는 식도를 핀. </li><li> 필요한 경우, 총 해부 동안 배치 다른 핀을 정렬. </li></ol></li><li> hypodermis를 제거합니다. <ol><li> gm2/gm3 근육 근처 hypodermis을 잡으면,이 근육에서 분리하고 부드럽게 앞쪽에 방향으로 당기십시오. </li><li> 모든 연결을 snipping하여 기본 지방에서 hypodermis를 구분한다. 사용 stomatogastric 신경계의 핵심 부분을 encloses 중심 동맥 주위에 관심 증가. gm1b 근육 사이에 위치 stomatogastric 신경절의 0.5 cm 반경에 대한 내에 그대로 hypodermis를 남겨주세요. </li><li> 구분 hypodermis 잘라. </li></ol></li><li> 기본 조직의 두뇌를 분리합니다. <ol><li> 복부의 앞쪽에 부분에 commissural 신경에 두뇌의 앞쪽에 부분에서 양자 프로젝트 두 개의 커다란 commissural 신경을 식별합니다. </li><li> 이 신경은 그대로두면, 부드럽게 집게로 머리를 채취해서 조직의 나머지 부분에서 뇌를 분리 절단. stomatogastric 신경이 두뇌 아래이며 그대로 보관해야합니다으로 이렇게 같은주의하십시오. </li></ol></li><li> 조직을 둘러싼에서 commissural 신경을 분리합니다. <ol><li> commissural 신경 중 하나에 하나 commissural 신경을 따르십시오. </li><li> 이온과 아들을 식별 -이 신경은 그대로 유지합니다. commissural 신경절 밖으로 발산 많은 신경을 것입니다. (이온과 아들 제외) 대부분을 잘라 있지만 절개를 완성하는 동안 자리에 commissural 신경절를 잡아 연결된 한 개는 신경을 두십시오. </li><li> 다른 commissural 신경절과 반복합니다. </li></ol></li><li> 중간에 측면에서 이온과 아들을 청소하십시오. 복부에 신경 시스템을 앵커로 순음 신경 그대로 둡니다. 식도 신경절은 이온의이 교차했다 앉아있다. 당신은 열등 심실 신경을 잡아와 아래 절단까지 당겨 그 아래 지울 수 있습니다. </li></ol> 2 부 - 분리 Stomatogastric 신경절 (STG)와 남은 신경 있습니다. <ol start="7"><li> 조직을 둘러싼에서 STG를 구분한다. <ol><li> STG는 gm1b 근육 아래 gm2a, B 근육을 사이에 실행 동맥 안에 앉아있다. gm2a, B 근육 부근 동맥의 절단 끝을 찾습니다. </li><li> DVN을 폭로, 위 anteriorly 동맥의 절단 끝을 당겨. 당신이 나머지 hypodermis의 수준에 도달할 때까지 계속 뽑고. 일단 분리, 동맥이 남아있는 hypodermis을 만지는 수준으로 줄어들 수 있습니다. </li><li> 바닷가재의 연단에 위치해 있던 근육 플랩을 잘라. </li><li> 동맥이 STG 위 지방 내에 터널을 만드는 것을 관찰, 동맥 위의 hypodermis을 올려요. 동맥 안에 가위 중 하나 블레이드를 넣고 그 위에 근육을 잘라. 당신이 안전하게 STG 위에 있는지 확인하는 상처로 당신이 DVN을 볼 수 있는지 확인합니다. 동맥 다음, anteriorly 절단 계속합니다. 당신이 STG 위의 컷으로, 당신은 역이 근육에 STG 다이빙 아래에서 anteriorly 냄새가 나는데 볼 수 있습니다. 완전히 STG 위의 근육을 분리 anteriorly 절단 계속합니다. </li><li> 거리 역에서 어떤 조직을 취소합니다. </li></ol></li><li> 주변 조직에서 agn S를 구분한다. (당신이 agn에서 레코드 계획하지 않더라도, 당신이 세포 레코딩에 대해 신경을 아래로 핀에 손상 신경의 일부가 필요합니다.) <ol><li> 더 agn S를 보려면, 나머지 hypodermis과 기본 근육의 얇은 레이어를 제거합니다. </li><li> STG에 단지 사후, DVN의 양쪽에있는 지방과 근육의 어두운 터널을 식별합니다. </li><li> 터널 안으로 한 가위 블레이드를 심어 신경 위의 조직을 잘라. 그것을 분리, 신경 다음, 옆으로 절단 계속합니다. (몇 mm가 신경절을 달아 충분하지만, 당신이 그것에서 기록하려는 경우 agn 최소한 5mm 노출.) </li><li> 연결을 절단하여이 innervates 근육에서 agn를 분리합니다. </li><li> 다른 agn을 분리하기 위해 반대편에 반복합니다. </li><li> 두 agn S가 해부되고 나면 배가 STG를 연결하는 모든 근육과 조직을 잘라. </li></ol></li><li> mvn S.를 분리 그들은 lvn를 분기하고 지방 아래에 옆으로 선법 작은 신경의 양자 쌍의 수 있습니다. <ol><li> 어느 근처, DVN 한쪽에있는 지방이 잘리는 가위 또는 두 개의 집게를 사용하여 어디에 두 lvn S.으로이 지점 여기까지 mvn의 s에서하고 그들을 절단 위험하지 않습니다. </li><li> 지방 레이어를 올려, 그리고 작은 mvn의 아래를 확인합니다. 이 신경은 gm1b 근육의 수준으로 옆으로 그저 사후에 중간 실행합니다. </li><li> 지금은 그래서 그것이 얽힌 될 것이다 신경은 그대로두고, mvn 위 지방의 레이어를 제거합니다. 당신은 절개 끝에 배를 내려로부터 측면 끝부분을 절단합니다. </li><li> 다른 mvn을 분리하기 위해 반대편에있는 과정을 반복합니다. </li></ol></li><li> lvn S 및 사후 신경을 분리. <ol><li> lvn S 브랜치가 옆으로 DVN에서, 그 위에 기름기를 절단하여 lvn를 수행 어디서 시작. 준비에 따라 때로는 신경 위의 전체 지방 계층은 뽑아하실 수 있습니다. </li><li> PSN의 지점에서 지점까지 lvn을 드러내는 계속합니다. </li></ol></li><li> pyn을 분리. <ol><li> pyn을 찾아, 그것은 pylorus 이상 뒤로 여행 신경이다. </li><li> 이 지역을 덮고있는 얇은 막을 제거합니다. </li><li> pyn에 첨부된 pylorus의 작은 섹션을 절단하여 pyn을 분리. </li><li> 부드럽게 pyloric 섹션을 리프트하고 pdn에 부착 지점에 도달할 때까지 pyn의 양쪽에있는 조직을 버려야. </li></ol></li><li> pdn을 분리. <ol><li> pdn을 찾아, 그것은 pyloric 확장시키는 근육을 뒤로 여행 신경이다. </li><li> pdn에 연결된 pyloric 확장시키는 근육의 작은 섹션을 잘라 버릴거야. </li><li> 부드럽게, pyloric 확장시키는 근육 섹션을 리프트가 pyn에 부착 지점에 도달할 때까지 pdn의 양쪽에있는 조직을 버려야. </li></ol></li><li> lvn에 pyn과 pdn를 연결하는 복부 lvn을 분리. <ol><li> pyn과 pdn은 복부 lvn에 연결하는 삼각 지점 시점에서, 신경의 작은 섹션을 분리 이러한 vpln로 복부 lvn에서 지점. 이것은 복부 lvn에 당기에 대한 핸들로 사용됩니다. </li><li> 손잡이에 허용하고 지점을 어디 PSN 지점이 꺼져 도달할 때까지 앞의 방향으로 노력하고, 배면의 lvn의 양쪽에있는 조직을 버려야. </li></ol></li><li> 반대편에있는 lvn 및 사후 신경을 분리하기 위해 13 - 단계 10를 반복합니다. </li><li> 위장에서 stomatogastric 신경계를 분리합니다. <ol><li> 완전히 위장에서 lvn를 분리하려면 PSN에 뽑아 pdn 및 pyn를 제외하고, lvn 및 복부 lvn에 연결된 모든 조직과 신경을 절단. 반대편에서이 과정을 반복합니다. </li><li> 각 mvn의 측면 끝부분을 잘라 버릴거야. 측면 끝부분을 허용하고 신경 및 기본 위 조직 간의 관계없는 첨부 파일을 했네요. </li><li> 앞쪽에 끝에서 commissural 신경 어떠한 관계없는 첨부 파일을 잘라, 각 측면에 입술​​ 신경을 절단. </li><li> 시각 위장 조직에 추가 첨부 파일을 절단 후 식별하고 stomatogastric 신경계 시스템을 검사합니다. </li><li> commissural 신경 이상, 그리고 위장에서 stomatogastric 신경계 껍질 두 commissural 신경의 앞쪽에 끝에 잡아요과 접시의 측면으로 이동합니다. 이렇게 있듯이, 신경 시스템을 무료로 남아있는 첨부 파일을 했네요. </li></ol></li><li> 작은 Sylgard 요리를 준비합니다. <ol><li> 작은 접시에 Sylgard의 표면에 철저하게 몇 위 조직을 문지 르세요. 이것은 생리가 접시에 걸쳐 균등하게 배포할 수 있도록 Sylgard의 소수성을 감소합니다. </li><li> 씻어 냉장 식염수에 Sylgard 요리를 입력합니다. </li></ol></li><li> 두 commissural 신경의 앞쪽에 끝을 잡아 큰 접시의 신경계를 운반하고, 작은 접시에 누워하여 준비 Sylgard 요리에 신경 시스템을 전송합니다. </li><li> 텅스텐 와이어의 절단 minuten 핀과 얇은 핀을의 조합을 사용하여 작은 접시에 STNS을 핀. <ol><li> 준비가 하부 심실 신경 멀리 Sylgard에서 가리키는 것을 선택하여 지느러미 측면까지 있는지 확인하십시오. </li><li> 두뇌를 제거하고 commissural 신경을 핀. </li><li> 부드럽게 뒤로하고 옆으로 PSN의 각각 당기, 그들을 달아하여 신경계가 꽉 및 평면 당기십시오. </li><li> pdn S에서 pyloric 확장시키는 근육을 제거하고, pdn s을 (를) 핀 </li><li> 를 제거pyn s에서 pyloric 세그먼트와 pyn s을 (를) 핀 </li><li> 같은 순음 신경으로 남아있는 격리 신경을 핀, mvn S 및 agn S. </li></ol></li><li> Desheath STG합니다. <ol><li> STG는 Sylgard에 대한 평면이며 측면 agn S, 앞쪽에 역 및 사후 DVN에 의해 긴장 개최 있는지 확인합니다. </li><li> DVN 이내 axons의 시각화를 활성화하기 위해 조명을 정렬. </li><li> 작은 핀 또는 미세 텅스텐 바늘을 사용하여 STG 단 후부 DVN을 둘러싼 껍질에 작은 얕은 구멍을합니다. </li><li> 신경 칼집에서 수평 눈물을 만들려면 axons에 지느러미, DVN 건너 바늘을 당겨. </li><li> STG에 후부 신경 칼집의 플랩을 잡고 STG의 등의 측면에서 껍질을 제거 anteriorly 당기십시오. </li></ol></li></ol><table border="1"><tbody><tr><td colspan="2"> 약어 : </td></tr><tr><td> STNS </td><td> Stomatogastric 신경계 </td></tr><tr><td> STG </td><td> Stomatogastric 신경절 </td></tr><tr><td> 코그 </td><td> Commissural 신경절 </td></tr><tr><td> 역 </td><td> stomatogastric 신경 </td></tr><tr><td> mvn </td><td> 중간 심실 신경 </td></tr><tr><td> 이온 </td><td> 열등 oesophageal 신경 </td></tr><tr><td> 아들 </td><td> 뛰어난 oesophageal 신경 </td></tr><tr><td> agn </td><td> 앞쪽에 위의 신경 </td></tr><tr><td> DVN </td><td> 지느러미 심실 신경 </td></tr><tr><td> lvn </td><td> 측면 심실 신경 </td></tr><tr><td> PSN </td><td> 후부 위 신경 </td></tr><tr><td> vpln </td><td> 복부 측면 후부 신경 </td></tr><tr><td> pyn </td><td> pyloric 신경 </td></tr><tr><td> pdn </td><td> pyloric 확장시키는 신경 </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Marder, E., Bucher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+pattern+generators+and+the+control+of+rhythmic+movements%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Central pattern generators and the control of rhythmic movements.</a> Curr. Biol. 11, R986-R996 (2001).</li>
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</ol>

랍스터 위장과 STNS의 해부학은 물론 이전에 5,6 설명하고 있으며,이 해부 절차의 변화는 수많은 연구에서 널리 사용되었습니다. 우리는 이전부터 해부하는 5-7과 STNS 5,8 위의 해부에 익숙한되고 좋습니다. 이러한 친숙는 신경 조직에 손상 사고의 위험을 감소합니다. 준비의 건강을 유지하기 위해서는 시원한 온도에서 준비를 유지하기 위해 중요합니다. 이것은 쉽게 호수에게 ˚ C 생리가 냉장고에 보관 4 매 30 분를 교환하여 이루어진다. 차가운 호수에 열중하면, 절연 STNS 준비는 많은 시간 동안 가능한 것입니다. 관련 Homarus의 gammarus의 레코딩은 체외 9 오일 내내 STG에서 안정적인 리듬 활동을 보여준, 유사한 견고은 H.에서 볼되었습니다 americanus (obs pers..). commissural 신경에서 STG에 Modulatory 입력은 지속 모터 패턴을 유지하기 위해 필요합니다. 따라서, 정상적인 리듬 활동이 신경 및 이온, 아들을 유지하고, 역의 신경은 그대로 보관해야합니다. (위의 밀 (GM) axons를 포함), mvn S (래터럴 위장 (LG)와 인퍼리어 심장 (IC) axons를 포함), pyn S agn S : 우리가 설명 해부 여러 모터 신경을 (모터 신경 세포 axons를 포함)의 보존 (Pyloric 신경 세포 (PY) axons를 포함), pdn S 및 lvn S (래터럴 Pyloric (LP), 중간 위장 (MG), LPG의 axons뿐만 아니라 GM의 사람들을 포함하는 (Pyloric 확장시키는 (PD) axons를 포함) PD와 PY). 추가 (또는 다른) 신경을 해부함으로써, 다른 모터 신경의 axons가 기록될 수 있습니다. 모터 신경 축삭의 각 유형은 해부 및 신경에서 녹화하는하는 근육 innervating에 의해 개별적으로 기록될 수 있습니다 뉴런 프로젝트의 유형입니다. 이 준비는 신경계의 기능에 초점을 맞춘 연구의 다양한 사용할 수 있습니다. 뉴런의 활동은 somata 또는 axons에서 세포, 날카로운 전극 기록을 사용하여, 또는 신경의 전기 자극 extracellularly 녹음을 통해 기록됩니다. STG 뉴런에 많은 이온 채널은 부분적으로 복제된하고 mRNA는 수동으로 뽑아 somata 10,11에서 측정할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>미세 텅스텐 와이어 (직경 0.001 in.)</td><td>도구</td><td>California Fine Wire Company</td><td></td><td>미세 핀으로 사용하기 위해 1-2mm 길이로 자릅니다.</td></tr><tr><td>포셉 #5</td><td>도구</td><td>Fine Science Tools</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>미뉴텐 핀 (Minuten Pins)</td><td>도구</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>Moria 스프링 가위 (7mm 날)</td><td>도구</td><td>Fine Science Tools</td><td>15370-52</td><td>최고급 사양 제품입니다. 동일 회사에서 더 경제적인 스프링 가위 제품도 구매 가능합니다.</td></tr><tr><td>페트리 접시 (100x15mm)</td><td>도구</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td>Sylgard 182를 2-4mm 높이로 채웁니다.</td></tr><tr><td>Sylgard 182</td><td>기타</td><td>Dow Corning</td><td>182</td><td></td></tr><tr><td>핀 홀더</td><td>도구</td><td>Fine Science Tools</td><td>26018-17</td><td>선택 사항. 초 제거 작업은 가위와 미세 포셉만으로도 가능합니다.</td></tr><tr><td>초미세 포셉 #5SF</td><td>도구</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>텅스텐 바늘</td><td>도구</td><td>Fine Science Tools</td><td>10130-05</td><td>선택 사항. 초 제거 작업은 가위나 미세 텅스텐 와이어를 잘라 만든 핀으로 가능합니다.</td></tr><tr><td>해부 현미경</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

homarus americanus stomatogastric 신경계의 해부

Homarus Americanus Stomatogastric Nervous System Dissection

시스템 활동을 생산 환경에 대응 얼마나 긴장 이해의 목적으로, neuroscientists 관심의 활동을 전시하고 접근 및 실험 방법 의무 아르 모델 시스템 설정. 미국의 바닷가재의 stomatogastric 신경계 (STNS) (<i&gt; Homarus americanus</i&gt;;) 대서양 또는 메인 가재되었습니다도 알고는 네트워크와 네트워크의 neuromodulation을 생성 리듬을 공부를위한 모델 시스템으로 설립되었습니다. STNS은 stomatogastric 신경절 (STG)를 중심 프로젝트 것을 modulatory의 뉴런을 포함하는 3 앞쪽에 신경 (2 commissural 신경 및 신경절 oesophageal)로 구성되어 있습니다. STG는 두 중앙 패턴 생성 네트워크를 구성하는 약 30 뉴런, 갑각류의 먹이 동작을 기초 pyloric과 위장 네트워크를 포함<sup&gt; 1,2</sup&gt;. 그것은이 시스템을 연구 할 수있는 동안<i&gt; 생체내에</i<sup&gt; 3</sup&gt; STNS가 고립되면 그 리듬 활동을 생산하기 위해 계속<i&gt; 체외에서</i&gt;. 접시에 STNS의 물리적 격리는 세포내 electrophysiological 레코딩에 대한 신경의 somata와 세포외 레코딩을위한 STNS의 신경에 쉽게 액세스할 수 있습니다. STNS를 분리하면 두 부분으로 이루어집니다. 동물의 배를 해부 첫 번째 부분은, 수반되는 비디오 문서에 설명되어있는<sup&gt; 4</sup&gt;. 이 동영상이 문서에서는 미세 절개 기법은 위장에서 STNS을 분리하는 데 사용됩니다. 이 절차는 electrophysiological 레코딩에 사용할 수있는 신경계 준비 결과.

우리는 미국의 바닷가재의 뱃속에서 stomatogastric 신경계의 미세 절개를 설명 (<i&gt; Homarus americanus</i&gt;).

Homarus Americanus Stomatogastric 신경계의 해부

신경계가 어떻게 활동을 생성하고 환경에 반응하는지 이해하기 위해, 신경과학자들은 ...을(를) 나타내는 모델 시스템에 주목합니다.

바닷가재로부터 ST 위 신경계를 분리하는 절차는 크게 육안적 해부와 정밀 해부의 두 단계로 나눌 수 있습니다. 본 영상에서는 STG로 지칭되는 지방 위 신경절과 cogs로 지칭되는 교차 신경절을 포함하여, 위에서 체성 위 신경계를 정밀 해부하는 과정을 다룹니다. 기본적으로 주변 조직으로부터 신경과 신경절을 분리해야 하며, 먼저 cgs를 분리한 다음 ST G를 분리합니다. 이 절차를 통해 신경계 기능에 초점을 맞춘 다양한 연구에 사용할 수 있도록 접시 위에 고정된 체계적인 위 신경계를 얻을 수 있습니다.안녕하세요, 저는 Brandeis University 생물학과 Eve Martyr 박사님 연구실의 Annalise Tobin입니다. 안녕하세요, 저 또한 Martyr 연구실 소속인 Hillary Burman입니다. 오늘은 위장 제거 방법을 확인하기 위해 랍스터 *Homarus americana*의 위에서 체성 위 신경계를 분리하는 프로토콜을 보여드리겠습니다.JoVE에 함께 게시된 비디오 프로토콜을 참고하시기 바랍니다. 저희 실험실에서는 리듬감 있는 행동을 생성하는 소형 신경 회로 내 뉴런의 기능을 연구하기 위해 이 절차를 사용합니다. 그럼 시작하겠습니다.시작하기 위해, 이 과정이 어떻게 수행되는지 확인하기 위한 바닷가재 위 준비 과정이 필요합니다. Beerman과 Tobin의 동반 영상을 참조하십시오. 먼저 입 부분에 해당하는 안쪽 끝이 몸에서 멀어지고, 뒤쪽 끝이 몸 쪽을 향하도록 표본을 배치하십시오. 이 절차 단계는 표본을 더욱 정밀하게 핀으로 고정하는 것으로 시작합니다.입술의 양측에서 식도를 핀으로 고정하고, 필요한 경우 위가 평평하게 놓이도록 육안 해부 중에 배치한 다른 핀들을 재조정하십시오. 다음으로, 먼저 gm, two GM three 근육 근처에서 피하 조직을 잡고 이 근육들로부터 분리한 후 전방향으로 조심스럽게 잡아당겨 피하 조직을 제거하십시오. 체성 위 신경계의 일부를 둘러싸고 있는 중심 동맥 주변의 연결 부위를 가위로 조심스럽게 잘라내어 피하 조직을 하부 지방층에서 분리하되, 피하 조직 자체는 손상되지 않게 유지하십시오.GM one B 근육 사이에 위치한 체성 위 신경절(somatic gastric ganglion)의 반경 약 0.5 centimeter 이내에서, 분리된 하피(hypodermis)를 잘라냅니다. 다음 단계는 뇌를 하부 조직에서 분리하는 것입니다. 먼저 뇌의 앞부분에서 위(stomach)의 앞부분에 있는 콤미스 신경절(Commis ganglia)로 양측으로 뻗어 나가는 두 개의 큰 콤미스 신경(commis nerves)을 확인하십시오.이 신경들을 손상시키지 않은 상태에서, 핀셋으로 뇌를 조심스럽게 들어 올린 후 절개하여 뇌를 나머지 조직으로부터 분리합니다. 이때 체성 위신경(somatic gastric nerve)이 뇌 아래에 위치하며 손상되지 않아야 하므로 주의하십시오. 교차신경절(commissural ganglia)을 주변 조직에서 분리하려면, 먼저 교차신경 중 하나를 따라가 신경절의 위치를 찾으십시오.이제 ION과 SON을 식별하십시오. 이 신경들은 온전하게 유지되어야 합니다. 각 교차 신경절(commis ganglion)에서는 많은 신경이 방사형으로 뻗어 나옵니다.ION과 SON을 제외한 대부분의 신경을 절단하십시오. 박리를 마무리하는 동안 교차 신경절(commis ganglion)을 제자리에 고정할 수 있도록 여분의 신경 하나를 남겨둡니다. 이제 동일한 방식으로 다른 교차 신경절에서 신경들을 찾아 절단하십시오.다음으로, ION과 SON을 외측에서 내측 방향으로 세척합니다. 전처리를 위장(stomach)에 고정하기 위해 입술신경(labial nerve)은 그대로 둡니다. 식도 신경절(esophageal ganglion)은 iOS 교차점에 위치합니다.하측 심실 신경을 잡아 위쪽을 향하게 하여 그 아래를 절단함으로써 하단을 정리할 수 있습니다. 다음 단계는 STG를 주변 조직에서 분리하는 것입니다. STG는 GM 1 B 근육과 GM 2 a B 근육 사이로 흐르는 동맥 내에 위치합니다.gm 근처에서 동맥의 절단단을 찾으십시오. 두 개의 AB 근육을 사용하여 동맥을 위쪽과 내측으로 당겨 DVN을 노출시킵니다. 남은 피하조직까지 계속해서 위로 당기십시오.분리가 완료되면, 동맥을 남은 피하 조직에 닿는 높이까지 다듬을 수 있습니다. 이제 바닷가재의 주둥이 부분에 위치했던 근육 플랩을 절단하십시오. 다음으로, 동맥 위의 피하 조직을 들어 올립니다.동맥이 지방 내부로 터널을 형성합니다. STG 위쪽입니다. 가위 날 하나를 동맥 안으로 넣고 그 위의 근육을 절개하십시오.안전하게 절개하고 있는지 확인하기 위해 절개하면서 DVN이 보이는지 확인하십시오. STG 상단에서 동맥을 따라 계속해서 전방으로 절개합니다. STG 상단을 절개함에 따라, STG에서 전방으로 뻗어 나와 근육 속으로 들어가는 STN을 확인할 수 있을 것입니다.STG 상단의 근육을 완전히 분리하기 위해 전방으로 계속 절개합니다. STN 주변의 모든 조직을 제거합니다. 이제 다른 몇 가지 신경들을 분리하는 단계로 진행할 수 있습니다.주변 조직에서 다음으로 분리해야 할 신경은 AGNs입니다. AGN에서 기록할 계획이 없더라도, 신경절을 고정하기 위해 이 신경의 일부가 필요합니다. AGNs를 더 잘 관찰하려면, STG 바로 뒤쪽에 남아 있는 피하 조직과 그 아래의 얇은 근육층을 제거하십시오.DVN 스틱 양측의 지방과 근육에서 어두운 터널을 찾은 뒤, 가위 날 하나를 터널 안에 넣고 신경 위의 조직을 절개하십시오. 신경을 따라 외측으로 계속 절개하여 신경을 분리합니다. 신경절을 고정하는 데는 몇 밀리미터면 충분하지만, A GN에서 기록할 계획이라면 최소 5mm 이상을 노출시켜야 합니다.연결 부위를 절단하여 AG N을 지배하는 근육에서 분리합니다. 이제 반대편에서도 이 과정을 반복하여 다른 A GN을 분리합니다. 두 AG N이 모두 박리되면, STG와 위를 연결하는 모든 근육과 조직을 절단합니다. 다음으로, M vns를 분리합니다.이들은 LVN에서 분지되어 지방 아래를 가로질러 외측으로 뻗어 있는 한 쌍의 작은 양측 신경입니다. 가위나 포셉 두 개를 사용하여 두 개의 LVN으로 분지되는 지점 근처의 DVN 한쪽 면의 지방을 절개하십시오. 이 위치는 M VNS에서 멀리 떨어져 있으므로 이를 절단할 위험이 없습니다.지방층을 들어 올리고 그 아래에서 작은 신경을 찾습니다. M VNS는 GM one B 근육의 높이 바로 뒤쪽에서 외측으로 주행합니다. 신경이 엉키지 않도록 일단 신경은 그대로 둔 채 MVN 위의 지방층을 제거합니다.신경계 해부가 끝나면 측단부와 M VNS에 연결된 모든 부착물을 절단하십시오. 반대편에서도 동일한 과정을 반복하여 다른 MVN을 분리합니다. 다음 분리 대상은 후방 신경의 LVN입니다.먼저 DVN에서 외측으로 분지되는 LVN을 확인합니다. LVN 상단의 지방을 제거하며 신경을 따라갑니다. 표본 상태에 따라 때로는 신경 상단의 지방층 전체를 벗겨낼 수 있습니다.PSN이 분지되는 지점까지 LVN을 계속 노출시키십시오. 이제 PYN을 찾으십시오. 이는 pori 위를 지나 후방으로 주행하는 신경입니다.이 영역을 덮고 있는 얇은 막을 제거합니다. PYN 캔에 부착된 pori의 작은 섹션을 절단하여 PYN을 분리합니다. 다음으로 pric 섹션을 조심스럽게 들어 올리고, PDN에 연결되는 분지에 도달할 때까지 PYN 양옆의 조직을 잘라냅니다.동공 산대근으로 후방 주행하는 PDNA 신경을 분리합니다. 먼저 PDN에 부착된 동공 산대근의 작은 부분을 절개합니다. 그런 다음 절개한 동공 산대근 부분을 조심스럽게 들어 올립니다.PYN과 연결되는 분지에 도달할 때까지 PDN 양측의 조직을 잘라냅니다. 이제 PYN과 PDN이 복측 LVN으로 연결되는 삼각형 분기점에서 PYN과 PDN을 복측 LVN에 연결하는 복측 LVN을 찾으십시오. VPLN과 같이 복측 LVN에서 분기되는 작은 신경 절편을 분리합니다. 이것은 복측 LVN을 들어 올릴 때 잡아당길 수 있는 손잡이 역할을 하게 됩니다.PSN이 분지되는 지점에 도달할 때까지 전방 방향으로 진행하며 복측 LVN 양측의 조직을 절개하십시오. 이제 위 한쪽의 후신경 박리가 성공적으로 완료되었습니다. 이제 반대쪽의 LVN과 후신경을 분리하십시오.stomach에서 LVN을 완전히 분리하십시오. PSN을 잡아당겨 PDN과 PYN을 제외하고 LVN 및 ventral LVN에 연결된 모든 조직과 신경을 절단하십시오. 반대쪽에서도 이 과정을 반복하십시오.다음으로, 각 MVN의 외측 끝단을 절단합니다. 외측 끝단을 들어 올리고 전단에서 MVN으로 연결된 모든 부착물을 절단합니다. comm ganglia로 연결된 모든 부착물을 절단하고 양측의 labial nerve를 절단합니다.체성 위 신경계를 시각적으로 훑어 위 조직에 연결된 추가 부착 부위를 확인한 후 절단하십시오. 모든 연결 부위를 절단하면 Commis 신경절 상단의 양측 Commis 신경 전단부를 잡고 체성 위 신경계를 위에서 벗겨내어 접시 옆으로 옮길 수 있습니다. 이 과정에서 신경계를 완전히 분리하기 위해 추가적인 부착 부위들을 절단하십시오.해부가 완료되었습니다. 먼저 신경계를 고정할 소가르(sogar) 접시를 준비하십시오. 작은 접시에 담긴 소가르 표면에 위 조직을 충분히 문지릅니다.이렇게 하면 agar의 소수성이 감소하여 식염수가 dish 전체에 균일하게 퍼지게 됩니다. agar dish를 차가운 식염수로 헹구고 채웁니다. 양쪽 commissure nerve의 전단부를 잡아 신경계를 준비된 agar dish로 옮깁니다.대형 접시에서 신경계를 들어 올려 소형 접시에 놓습니다. 신경계를 고정하기 위해 미세 핀과 더 가는 핀을 조합하여 사용합니다. 먼저 텅스텐 와이어를 절단하고, 하측 뇌실 신경이 실 가드(syl guard) 반대 방향을 향하고 있는지 확인하여 표본의 등쪽이 위로 오도록 배치합니다.이제 뇌를 제거하고 교차 신경(commis nerves)을 핀으로 고정합니다. 각 PSN을 후측 및 외측으로 당겨 고정함으로써 신경계가 팽팽하고 평평하게 펴지도록 조심스럽게 당깁니다. 다음으로, PNS에서 P 확장근(P dilator muscle)을 제거하고 해당 신경들을 핀으로 고정합니다.그런 다음 GYN에서 유문 분절을 제거하고 GYN을 고정합니다. 마지막으로 labial nerve, m vn, AGN과 같이 남아 있는 다른 고립 신경들을 고정합니다. 다음 단계는 S st의 시트를 제거하는 것입니다.먼저, S st G가 S 가드에 평평하게 밀착되어 측면 AGNs에 의해 단단히 고정되었는지 확인하십시오. 전방 STN과 후방 DVN을 통해 DVN 내의 축삭을 시각화할 수 있도록 조명을 조절합니다. 그런 다음 작은 핀이나 미세한 텅스텐 바늘을 사용하여 작업을 수행합니다.STG 바로 뒤쪽, DVN을 둘러싸고 있는 신경초에 작고 얕은 구멍을 냅니다. 바늘을 축삭의 등쪽으로 염색된 DVN 가로질러 당겨 신경초에 수평 방향의 찢어짐을 만듭니다. 이제 STG 뒤쪽의 신경초 플랩을 잡아 앞쪽으로 당긴 후 절개하여 STG의 등쪽에서 신경초를 제거합니다.초(sheath)를 제거한 후, 시료를 약 4~15 °C의 냉장 상태로 유지한다면 실험 준비가 완료된 것입니다. 이 시료는 최대 5일 동안 실험적으로 안정적인 상태를 유지하는 것으로 알려져 있습니다. 온전한 Sato 위 신경계를 Sylgard 접시 위에서 핀으로 고정해야 합니다.보여드린 바와 같이, 신경은 손상이 없어야 하며 세포 외 기록(extracellular recording)이 가능하도록 노출되어야 합니다. 온전한 STG의 세포체는 관찰 가능해야 하며 세포 내 기록(intracellular recording)이 가능하도록 접근할 수 있어야 합니다. 지금까지 바닷가재 Homa Americana의 체성 위 신경계를 분리하는 방법을 살펴보았습니다.이 해부를 수행할 때는 조직과 신경의 손상을 방지하기 위해 해부학적 구조에 매우 익숙해지는 것이 중요합니다. 또한, 표본을 4~15 °C 사이의 서늘한 온도로 유지하는 것이 매우 중요합니다. 표본을 차갑게 유지하기 위해 해부 중에 30분마다 한 번씩 냉장고에 4 °C로 보관된 차가운 생리식염수로 교체함으로써 이를 쉽게 달성할 수 있습니다.수 시간에서 수 일까지 생존 가능합니다. 이것으로 모든 설명을 마칩니다. 시청해 주셔서 감사합니다. 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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