Name: 에 Electrophysiological 녹음 Drosophila 엠브료 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 31 s
Description: 학습하세요 Drosophila 배아의 근육과 운동신경원에서 전기생리학적 기록 방법을. 전체세포 패치클램프 기법을 활용하여 신경근육 접합부와 중추 시냅스의 기능적 특성을 분석하고 발달 과정을 연구할 수 있습니다.

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Drosophila의 배아에서 Electrophysiological 녹음 수동 조작과 절개를 필요로합니다. 준비의 건강과 레코딩의 결과의 품질, 신속하고 깔끔하게 레코딩을위한 연약한 배아 조직을 준비하는 수있는 하나 따라 다음 실험을 실행합니다. 경험은 한번에 모두를 해결하기 위해 시도하기 전에 배아 해부 및 패치 클램프 전기 생리학 모두 실력해야합니다. 녹음은 &quot;수정된 표준&quot;또는 &quot;haemolymph처럼&quot;(HL) 살린스 여러 변종 중 하나에 수행할 수 있습니다. 이 두 호수 클래스 사이의 주요 차이점 1 있음) 나 + 농도 (70 MM HL 대 120-135 MM 표준) 및 2) MG 2 + 농도 (4 MM 표준 대 20 MM HL). 표준 솔루션에 높은 나 + 농도의 주요한 이점은 액션 잠재적인 전파하고, 따라서 정상적인, 꽃무늬 시냅스 전달의 유지 보수를 용이하...

에 electrophysiological 녹음 drosophila 엠브료

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Drosophila는 배아 발달과 기능 모두의 신경 과학 연구를위한 최고의 유전자 모델입니다. 전통적으로,이 필드는 주로 독립적인 역사 및 과학 사회와 서로 꽤을 분리하고 있습니다. 그러나 이러한 일반적으로 서로 다른 분야 사이의 인터페이스는 기능 전기적 신호 특성과 신경 회로 형성의 마지막 단계에서 기능성 화학 시냅스의 분화 취득을 기본 발달 프로그램입니다. 이 인터페이스는 조사를위한 중요한 지역입니다. Drosophila에서 기능의 개발이 단계는 embryogenesis의 마지막 세번째 동안 &lt;8시간 기간 (25 ° C에서)하는 동안 발생합니다. 이렇게 늦게 발달 기간 동안 힘든, 스며들지 표피 표피의 증착에 수사 때문에하는 어려운 여겨졌다. 획기적인 사전은 로컬 말기 태아의 제어 절개를 사용하는 표피에 적용할 수있는 물 polymerizing 수술 접착제의 적용되었다. 지느러미 세로 절개로 배아가 실험 조사하기 위해 복부 신경 코드 및 신체 벽면 근육을 노출, 평면 마련하실 수 있습니다. 전체 세포 패치 - 클램프 기법은 다음 개별적으로 - 식별 뉴런과 체세포 근육에서 기록을 채용하실 수 있습니다. 이러한 녹음 구성 이온 전류와 뉴런과 근육 모두에서 행동 가능성이 전파의 모양과 성숙을 추적하는 데 사용되었습니다. 이러한 전기적 특성에 영향을 미치는 유전자 돌연변이 이온 채널과 관련된 신호 단지의 분자 조성을 공개하고, 기능 분화의 분자 메커니즘의 탐사를 시작 특징되었습니다. 특히 초점은 중추 신경계와 주변 모두에 시냅스 연결의 조립을했습니다. glutamatergic 신경근육학 교차점 (NMJ)는 광학 이미징 및 electrophysiological 녹음의 조합에 가장 액세스할 수 있습니다. 유리 흡입 전극은 전압 - 고정되어 근육에서 만들어진 흥분성의 접합 전류 (EJC) 기록과, 말초 신경을 자극하는 데 사용됩니다. 이 녹음 구성 버렸네의 기능 분화를 차트와 presynaptic 글루 탐 산염 방출 특성의 모양과 성숙을 추적하는 데 사용되었습니다. 또한, postsynaptic 속성은 글루 탐 산염 수용체 필드의 모양과 성숙을 측정하기 위해 근육의 표면에 직접 글루 탐 산염의 iontophoretic 또는 압력 응용 프로그램을 통해 독립적으로 assayed 수 있습니다. 따라서, 모두 사전과 postsynaptic 요소는 배아 synaptogenesis 동안 별도로 또는 함께 모니터링할 수 있습니다. 이 제도는 크게 배아 버렸네 형성에 악영향을하고, 따라서 버렸네 연결과 기능 시냅스 신호 속성의 사양과 차별을 규제하는 분자 메커니즘을 밝혀 유전자 돌연변이를 분리하고 특성화하는 데 사용되었습니다.

Electrophysiological 녹음에서<em&gt; Drosophila</em&gt; 배아 개발 근육과 신경 세포 전기적 특성뿐만 아니라 glutamatergic 신경근육학 접합 및 중앙 cholinergic 및 GABAergic 시냅스의 기능 synaptogenesis의 특성의 분석을 수 있습니다.

에 Electrophysiological 녹음 Drosophila 엠브료

초파리(Drosophila)는 배아 발달과 기능적 신경과학 연구 모두에서 최고의 유전학적 모델입니다. 전통적으로 이 두 분야는 상당히...

적절하게 준비된 oph 배아 체벽에서 근육 및 운동 뉴런의 전기생리학적 기록을 얻을 수 있습니다. 근육 6, 7, 12 또는 13은 전체 세포 기록(whole cell recording) 구성으로 쉽게 기록할 수 있으며, 신경근 접합부로부터 기록하기 위해 기가옴 씰(giga ohm seal)을 형성한 후 강력한 미세 진폭 전류를 측정할 수 있습니다. 흡입 전극을 사용하여 CNS 출구 지점 근처의 운동 신경을 끌어올려 시냅스 전 자극을 전달하는 동시에 시냅스 후 근육에서 전체 세포 전류를 측정할 수 있습니다.또는, 이온 도입법(iontophoresis)이나 압력 분사법을 통해 피펫을 사용하여 기록 전극 근처에 흥분성 신경전달물질을 전달할 수 있습니다. 안녕하세요, 저는 시카고 일리노이 대학교 생물과학과의 Dave 교수님 연구실에 있는 Ton입니다. 오늘은 살라테 단계(salate stage) 배아의 신경근 접합부와 중추 뉴런을 전기생리학적으로 기록하는 방법을 보여드리겠습니다.이 절차들은 조프(joof) 신경근계의 기능과 발달을 연구하는 데 사용됩니다. 이 기술들은 원래 Kendall Brody에 의해 개발되었으며, David Fit Stone을 거쳐 현재 저에게 전달되었고, 오늘 제가 여러분께 전달해 드리고자 합니다.이 절차를 수행하려면 배아를 사전에 적절히 채취하고 해부해야 합니다. 이 과정이 어떻게 이루어지는지 확인하려면 Brody, Featherstone 및 Chen의 동반 출판물인 Electrophysiological을 참조하십시오. Jossa 배아 근육 및 뉴런에서의 전기생리학적 기록에는 표준 전체 세포 패치 클램핑 기술이 사용됩니다. 먼저, 해부된 배아를 작은 플렉시글라스 기록 챔버에 넣습니다.생리학 기록 구역은 Faraday 케이지로 전기적으로 차폐되어 있으며, 진동 감쇄 테이블 위에 설치되어 있습니다. 챔버는 KY 광학계와 40 x 장작업거리 수침 렌즈가 장착된 정립 복합 현미경을 사용하여 투과광 하에서 관찰합니다. 온도가 상승함에 따라 oph 근육의 패치 클램프 수행이 점점 더 어려워지므로, 일반적으로 상온 이하에서 기록을 진행합니다.기록 전극의 최종 저항은 5~10 MΩ이어야 하며, 내경이 약 1 µm가 되도록 열 연마(heat polish)해야 합니다. 기록 전극의 팁은 염화칼륨과 수크로스가 포함된 생리 식염수로 채웁니다. 표준 식염수가 담긴 배스(bath)에는 염화은 접지선을 배치하며, 이

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오는 표준 전체 세포 기술을 사용하여 하나의 뉴런에서 레코딩을위한 준비 성인 Drosophila의 전체 머리를 분리하는 절차를 보여줍니다. 그것은 녹음하는 동안 많이 GFP 라벨 세포와 뉴런의 이미지가 포함되어 있습니다.

성인 Drosophila의 머리에서 전체 셀 레코딩

여기 Drosophila의 유충의 신경근육학 교차점에서 시냅스 전송을 측정 electrophysiological 방법을 설명합니다. Evoked 릴리스는 모터 신경의 axons을 자극하여 인공적으로 시작되며, NMJ을 통해 전송은 근육에 evoked postsynaptic 반응에 의해 측정할 수 있습니다.

Drosophila의 애벌레의 NMJ에서 시냅틱 후보를 녹음 Electrophysiological 방법

이 기술은 immunohistochemistry 또는 electrophysiological 레코딩을위한 Drosophila 배아의 neuromusculature를 제공​​합니다. 그것은 신경근육학 개발 초기에 이벤트를 공부하거나 부화 수없는 돌연변이의 전기 생리학을 수행하는 데 유용합니다.

수확 및 준비 Drosophila</emElectrophysiological 녹화 및 기타 수속을위한> 태아

우리의 유충에서 심장 기능을 모니터링하는 여러 가지 방법을...

애벌레의 모니터링 심장​​ 기능 Drosophila melanogaster 생리 연구

거대한 섬유 시스템은 성인의 간단한 회로의...

의 거대한 섬유 패스에서 Electrophysiological 레코딩 D. melanogaster</em

이 비디오는 움직이지 못하는 초파리의 눈에서 광수용체 활동의 전기생리학적 기록을 위한 프로토콜을 간략하게 설명하여 광 자극에 대한 반응으로 전압 변화를 정밀하게 측정할 수 있도록 합니다.

빛 자극에 대한 초파리 망막 광수용체의 전압 반응에 대한 전기생리학적 기록

이 비디오는 초파리 유충의 중추신경계(CNS)에서 신경 세포 활동을 세포 외로 기록하는 것을 보여줍니다. transection된 CNS는 기록 챔버에 배치되고 하행 신경의 전기 활동을 기록하여 기준선 발사 빈도를 설정합니다. 그런 다음 테스트 에이전트를 도입하고 발사 빈도의 변화를 기록하여 에이전트의 흥분 또는 억제 효과를 결정합니다.

초파리 중추신경계의 전기적 활동에 대한 세포외 기록

이 프로토콜은 초파리에서 labellar 맛 뉴런에 의해 트리거되는 액션 잠재적 인 반응의 세포 녹음을 설명합니다.

에서 전기 생리학 기록<em&gt; 초파리</em&gt; Labellar는 Sensilla 맛

Sharp microelectrodes는 살아있는 초파리에서 광수용체 및 시각 중간뉴런 출력의 정확한 전기생리학적 특성을 가능하게 합니다. 여기에서는 이 방법을 사용하여 제어된 광 자극에 대한 개별 셀의 고품질 전압 응답을 기록하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 곤충 겹눈의 신경 정보 처리를 연구하는 데 이상적입니다.

의 기록 세포 내 전압 응답에 대한 전기 생리 방법<em&gt; 초파리</em&gt; 빛 자극에 광수와의 interneurons<em&gt; 생체</em

Drosophila melanogaster photoreceptor의 전체 세포 기록은 다양한 조건 에서 자연스런 어두운 범프, 양자 범프, 빛에 대한 거시적 반응 및 전류 - 전압 관계를 측정 할 수있게합니다. D. melanogaster 유전자 조작 도구와 결합하여이 방법은 유비쿼터스 이노시톨 - 지질 신호 전달 경로와 그 표적 인 TRP 채널에 대한 연구를 가능하게합니다.

전 세포 전압 클램프 기록을위한 전기 생리 학적 방법<em&gt; Drosophila</em&gt; 광 수용체

이 프로토콜 비용 효율적이 고 편리한 약리학 대리인, 신경 단백질의 유전자 돌연변이의 테스트를 가능 하 게 초파리 melanogaster 중앙 신경 시스템의 하강 전기 활동을 기록 하는 방법을 설명 합니다. 또는 미개척된 생리 적인 통로의 역할입니다.

제 3-탈피 초파리 Melanogaster 의 중앙 신 경계 활동의 electrophysiological 녹음

학습하세요 Drosophila 배아의 근육과 운동신경원에서 전기생리학적 기록 방법을. 전체세포 패치클램프 기법을 활용하여 신경근육 접합부와 중추 시냅스의 기능적 특성을 분석하고 발달 과정을 연구할 수 있습니다.

에 Electrophysiological 녹음 Drosophila 엠브료

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