Name: 셋째 Instar Drosophila의 유충에서 Imaginal 디스크의 해부 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-17T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 36 s
Description: 배우세요 Drosophila 3령 유충에서 imaginal disc를 분리하는 정밀 해부 기법을. 날카로운 해부 집게와 수술용 칼을 사용하여 날개, 다리, 눈 disc를 분리하고 현미경 슬라이드에서 조직을 고정하는 방법을 익히세요.

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셋째 instar drosophila의 유충에서 imaginal 디스크의 해부

Dissection of Imaginal Discs from 3rd Instar Drosophila Larvae

이 프로토콜은 3 instar 단계에서 drosophila의 유충에서 imaginal 디스크를 분리에 사용되는 절개 기법을 보여줍니다. 말하는 후 조직을 고정하고 날개, 다리와 눈 디스크를 제거하는 방법은 직접 이후 시각화를위한 현미경 슬라이드에 시연하고 있습니다.

셋째 Instar Drosophila의 유충에서 Imaginal 디스크의 해부

오늘은 3령 초파리 유충에서 성충판(imaginal discs)을 해부하는 방법을 보여드리겠습니다. 3령 유충의 성충판은 다양한 발달 과정 연구에 활용될 수 있습니다. 저희 실험실에서는 이를 통해 세포 자멸사(apoptosis) 과정을 관찰하지만, 다양한 단백질을 발현시켜 연구함으로써 성충판 내에서 순차적으로 일어나는 온갖 종류의 발달 과정을 살펴볼 수 있습니다.이를 위해 몇 가지 매우 중요한 도구들을 사용할 것입니다. 먼저, 접시에서 유충을 꺼낼 때 사용할 피킹 스틱(picking stick)입니다. 다음으로 매우 중요한 도구는 해부용 핀셋으로, 해부를 원활하게 진행하기 위해서는 매우 날카로워야 합니다.그 다음 11번 수술용 칼날을 사용하여 머리에서 디스크를 제거하겠습니다. 그리고 마운팅 매질로 벡터 쉴드(vector shield)를 사용한 슬라이드 위에 디스크를 배치하겠습니다. 우선 3령의 *Drosophila melanogaster* 유충을 수집하겠습니다.여기서는 피킹 스틱을 사용하여 바이알 벽면에서 유충들을 떼어내겠습니다. 스틱 끝에 물기가 약간 있으면 도움이 될 때가 있으며, 그 다음 PBS 한 방울에 옮겨줍니다. 자, 이제 세 번째 단계의 유충들이 준비되었습니다.저는 오른손잡이이므로 피검체의 머리를 제 오른쪽으로 돌리고, 잡아야 할 위치를 안내해 줄 몇 가지 지표를 사용할 것입니다. 첫 번째는 여기와 여기의 기관 주부분입니다. 그리고 머리 쪽으로 올라가면 작은 횡단면이 있습니다.먼저 유충의 머리로부터 몸통의 약 3분의 2 지점을 부드럽게 잡습니다. 그런 다음 오른손으로 가로 지지대 뒤쪽 몇 밀리미터 지점을 잡는데, 이때 유충 너비의 약 절반 정도까지 잡도록 합니다. 이렇게 하면 적절하게 잡은 것이 됩니다.약 절반 정도 진행된 것을 보실 수 있습니다. 이제 오른손으로 조심스럽게 앞으로 잡아당기면 모든 장기가 밖으로 나오는 것이 보입니다. 이제 몸통의 주요 부분은 폐기해도 됩니다.여기에 입틀에 부착된 성충원판을 포함하는 머리 부분이 있습니다. 원판이 눌리지 않도록 입틀 부분을 잡아 PBS 방울 위로 옮기겠습니다. 이제 고정된 유충 머리가 준비되었습니다.모든 과잉 조직을 제거한 후, 이전과 같이 구강 부위를 잡아 고정하거나 핀셋을 사용하여 해부판에 눌러 고정합니다. 이제 구강 부위가 왼쪽에 위치합니다. 여기 우리가 필요로 하지 않는 장(gut)과 타액선이 보입니다.지방체 또는 지방 조직이 일부 보입니다. 특히 지방은 일부 분석 및 염색을 방해할 수 있으므로, 원하지 않는 부분은 계속해서 제거해 줍니다. 이제 깨끗하게 정리된 유충의 머리 부분이 준비되었습니다.이제 몸체에서 분리하여 고정 및 세척하고, 불필요한 조직을 제거한 유충 머리 부분이 준비되었습니다. 또한 C2 tunnel의 항체 염색이나 다른 기능성 염색 등 필요한 처리를 모두 마친 상태입니다. 이제 이를 슬라이드 위에 올려놓았으며, 머리에서 실제 디스크, 즉 구강 부위를 분리해낼 준비가 되었습니다.이제 구강 부위가 여기 왼쪽에 위치해 있습니다. 포셉을 사용하여 슬라이드 위로 가볍게 눌러 고정하겠습니다. 오른손에는 해부 시 더 정밀하게 사용할 수 있는 11번 메스 날을 잡고 있습니다.먼저 중추신경계(CNS)와 시엽을 제거하겠습니다. 여기에 중추신경계가 있고, 두 개의 시엽이 있으며, 그곳에 안테나-눈 원판(eye antenna discs)이 부착되어 있는 것을 볼 수 있습니다. 시엽과 눈 원판 사이에 칼날을 넣고 천천히 당겨서 중추신경계를 제거하면, 눈 원판이 다음과 같이 늘어나게 됩니다.이제 CNS와 시엽이 보입니다. CNS에서 분리된 두 개의 안구 원반(eye discs)이 준비되었습니다. 이제 기저부를 조심스럽게 자르고 당겨서 구강 부위로부터 이를 제거하겠습니다.좋습니다, 한쪽 눈-더듬이 원반과 다른 쪽 눈-더듬이 원반이 있습니다. 그리고 이제 여기서 돌출된 날개 원반을 볼 수 있습니다. 다시 한번 조심스럽게 기부 절단 부위를 찾아 잡아당기겠습니다.여기 날개 discs와 여기에 부착된 다리 disc, 그리고 약간의 기관(trachea)이 보입니다. 네, 다리 disc가 부착된 날개 disc가 있고, 분명 여러 개의 다리 discs가 더 있을 것입니다. 따라서 블레이드로 조심스럽게 탐색하며 더 많은 disc들을 찾아낼 수 있습니다.이 표본에서 찾을 수 있는 디스크는 여기까지입니다. 다리 디스크가 몇 개 더 있습니다.

dissection-of-imaginal-discs-from-3rd-instar-drosophila-larvae

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

여기 GFP 태그 glial 세포와 결합하여 라이브 미세 분석을 사용하여 개발 Drosophila의 눈을 glial 세포의 마이 그 레이션을 검사하기 위해 프로토콜을 설명합니다.

Drosophila 아이 Imaginal 디스크에 Glial 세포 이미징 마이 그 레이션 라이브

우리의 특별 표현하는 소설 빨간색 형광 단백질 (RFP) 기자를...

에있는 아이 Imaginal 디스크의 시각화에 도움을 소설 RFP 리포터 Drosophila</em

Drosophila melanogaster의 애벌레가 애벌레 segmental 신경 이내 axonal 수송의 메커니즘을 조사하기 위해 이상적인 모델 시스템을 제공합니다. 이 절차를 사용하여 다양한 변이를 갖고 제 3 instar의 애벌레는 야생 타입 애벌레 비교할 수 있습니다.

3 애벌레 Segmental 신경의 시각화 차 Instar Drosophila 애벌레 준비

애벌레의, Pupal 및 성인의 해부 및 Immunohistochemistry<em&gt; Drosophila</em&gt; 망막

초파리 상상 디스크를 염색할 때, 디스크가 노출되어 있지만 몸에 붙어 있는 부분을 거칠게 해부하는 경우가 많습니다. 염색이 완료되면 관심 디스크가 분리되어 장착됩니다. 예제 프로토콜은 날개 상상 디스크 해부 및 장착 절차를 보여줍니다.

초파리 유충 상상 디스크 해부: 상피 발달을 관찰하는 방법

이 프로토콜은 그대로 애벌레 뇌의 맥락에서 라이브 세포 이미징을 수행하는 데 사용하는 효율적인 방법을 자세히 설명합니다. 라이브 세포 이미징 방식은 지속적으로 이전에 간과 된 메커니즘을 밝혀, 비대칭 신경 줄기 세포 분열의 연구뿐만 아니라 다른 신경 인성과 발달 과정에 대한 귀중한 있습니다.

의 라이브 영상<em&gt; 초파리</em&gt; 애벌레 Neuroblasts

초파리의 성체 구조는 상상 원반이라고 하는 주머니와 같은 구조에서 파생됩니다. 이러한 디스크의 분석은 조직 결정, 구획 경계 설정, 세포 증식, 세포 운명 사양 및 평면 세포 극성을 포함한 많은 발달 과정에 대한 통찰력을 제공합니다. 이 프로토콜은 광/형광 현미경 검사를 위해 가상 디스크를 준비하는 데 사용됩니다.

해부하고, 상상 디스크의 면역 염색에서 초파리

이 기술의 목표는 연구자들이 모든 연령의 Drosophila melanogaster에서 번데기 안구 디스크의 해부, 면역 염색 및 장착을 수행할 수 있도록 하는 것입니다.

해부와의 설치<em&gt; 초파리</em&gt; 번데기 아이 디스크

이 프로토콜은 초파리의 눈 / 더듬이 가상적인 디스크 (EAD에게)에서 형광 표시, 유 전적으로 정의 클론 종양을 생성하는 방법을 보여줍니다. 그것은 세 번째 령 유충과 방법을 시각화하고 유전자 발현 변화와 종양 침입을 정량화를 처리하는 방법에서 EAD 뇌를 해부하는 방법에 대해 설명합니다.

그만큼<em&gt; 초파리</em&gt; 가상적인 디스크 종양 모델 : 유전 모자이크를 사용하여 유전자 발현 및 종양 침윤의 시각화 및 정량화

우리는 GFP 재구성 기반 접근법을 사용하여 살아있는 초파리 날개 상상 디스크의 인접한 상피층에 있는 세포 간의 접촉을 측정하기 위한 프로토콜을 설명합니다.

살아있는 초파리 날개 상상 디스크에서 사이톤군에 의해 매개되는 세포-세포 접촉을 평가하기 위한 GFP 상보 기반 이중 발현 시스템

이 글에서는 시약을 경제적으로 사용하고 소수의 상상 디스크를 쉽게 다룰 수 있는 효율적인 상상 디스크 해부 및 항체 염색 프로토콜을 설명합니다.

Drosophila melanogaster의 눈-더듬이 및 날개 상상 디스크의 소규모 해부 및 항체 염색

배우세요 Drosophila 3령 유충에서 imaginal disc를 분리하는 정밀 해부 기법을. 날카로운 해부 집게와 수술용 칼을 사용하여 날개, 다리, 눈 disc를 분리하고 현미경 슬라이드에서 조직을 고정하는 방법을 익히세요.

셋째 Instar Drosophila의 유충에서 Imaginal 디스크의 해부

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