June 4th, 2009
이 비디오에서 우리는 microfluidic 프로브를 제시 1 (MFP). 우리는 MFP를 조립하는 방법을 자세히 설명, 거꾸로 현미경 위에 그것을 마운트하고, 기판 표면에 상대를 정렬하고, 마지막으로 버퍼 용액에 잠겨 기판 표면을 처리하는 데 그것을 사용하는 방법을 보여줍니다.
이 절차는 미세유체 프로브 또는 MFP를 조립하고 사용하는 방법을 보여줍니다. MFP의 미세유체 구성 요소는 가스 밀폐 주사기, 유리 모세관 튜브, Upchurch의 마이크로 밀폐 커넥터 및 MFP 헤드입니다. 이 비디오는 조립 및 정렬의 중요한 단계를 보여줍니다.
일단 조립되면 MFP는 표면 패터닝 및 가공을 위해 다양한 기판 및 시약과 함께 사용할 수 있습니다. 안녕하세요, 저는 세실 페로입니다. 저는 캐나다 몬트리올에 있는 McGill University의 의생명공학과 David Yaker 연구실에서 박사 후 연구원으로 근무하고 있습니다.
안녕하세요, 저는 모하마드 카심입니다. 저는 McGill University의 생물 의학 공학과에있는 David Y의 실험실에서 박사 과정을 밟고 있습니다. 안녕하세요, 저는 데이비드 요커입니다.
저는 의생명공학과 조교수이며, 오늘 미세유체 프로브에 대한 시연에 오신 것을 환영합니다. 오늘 우리는 미세유체 프로브의 작동 및 사용 절차를 보여 드리겠습니다. 우리는 표면 처리 및 패터닝을 위해 실험실에서 이 절차를 사용합니다.
시작하겠습니다 이 프로토콜을 시작합니다. 플라스틱 주사기와 바늘은 가스 유형 유리 주사기에 시약을 채우는 데 사용되어 기포가 존재하지 않도록 합니다. 일반적으로 우리는 주입을 위해 1-10마이크로리터 주사기를 사용하고 흡인을 위해 5-10배 더 큰 주사기를 사용합니다.
다음으로, 데드 볼륨이 낮은 나노 타이트 피팅을 사용하여 주사기를 모세관 튜브에 연결합니다. 그런 다음 모세혈관을 채우고 현미경으로 기포가 있는지 확인합니다. MFP 칩에는 모세관을 연결할 때 기포가 갇히는 것을 방지하기 위해 완충 용액이 미리 채워져 있습니다.
마지막으로, 모세관은 마이크로 제작된 소품 헤드의 PDMS 연결 부분에 연결됩니다. 이제 MFP가 조립되었으므로 설정을 시작할 준비가 되었습니다. 기판은 수제 홀더에 삽입됩니다.
현미경 스테이지에 부착되어 있습니다. MFP와 기판 사이의 간격은 표면 패터닝 공정에 매우 중요합니다. 마이크로미터 나사로 형성된 3점 지지대를 사용하여 수평 정렬을 마이크로미터 정밀도로 조정합니다.
이는 기판이 MFP 아래에서 스캔되어 처리되기 때문에 필요합니다. MFP 설정을 시작하기 위해 프로브 헤드를 프로브 홀더에 고정하고 도립 현미경 상단의 프로브 스테이션에 장착합니다. 그런 다음 주사기를 고정밀 주사기 펌프에 넣습니다.
다음으로, 한 쌍의 측각계를 사용하여 간섭 무늬라고도 하는 뉴턴의 고리를 관찰하여 MFP의 메자와 기판의 정렬을 조정합니다. 이는 MFP가 기판과 접촉할 때 나타나며, 접촉 지점 및 링의 주파수는 기울기를 나타내는 역할을 합니다. MFP가 표면과 정렬되면 단일 간섭 링이 전체 표면으로 확장됩니다.
이 측정은 또한 MFP와 기판 사이의 분리를 보정하는 역할을합니다. MFP가 설정되었으므로 이제 MFP의 작동으로 이동할 준비가 되었습니다. MFP 작동 중 디스펜싱은 실험실 보기 소프트웨어에 의해 제어됩니다.
장치 작동은 눈과 CCD 카메라로 시각화됩니다. 적절한 흡인을 시작하기 전에 약간의 액체를 주입하여 흡인 주사기의 방향이 적절하고 기포가 없는지 확인하십시오. 그런 다음 MFP를 버퍼에 담그십시오.
이제 구슬의 비행 감금을 모니터링하면서 액체 주입을 시작할 수 있습니다. 주입 흡인 비율은 주변 완충액이 있는 시약의 확산성과 원하는 기하학적 흐름 패턴에 따라 1에서 3에서 1에서 10까지 다양합니다. 마지막으로, 프로브는 이제 다양한 응용 분야에 사용할 수 있습니다.
여기에 표시된 표면 패턴은 연쇄상구균 분열, ENC 코팅된 하이드로겔 유리 슬라이드에 플루오레세인 표지된 비오틴이 있는 MFP에 의해 달성되었습니다. 주입 유량은 초당 1나노리터였으며, 흡인 유량은 각각 10마이크로리터 주사기와 50마이크로리터 주사기를 사용하여 초당 10나노리터였습니다. 표면과 프로브 사이의 간격은 5마이크로미터였습니다.
MFP는 또한 세포와 조직의 국소 염색 및 가공에 사용할 수 있습니다. 유동 구속은 시약의 확산을 방지하고 세포의 정밀한 화학적 염색을 가능하게 합니다. 여기에서 볼 수 있듯이, 섬유아세포 세포의 단층은 다이 밀리리터당 100마이크로그램으로 염색되었습니다.
그래서 우리는 미세유체 프로브를 작동하는 방법을 보여주었습니다. 이 절차를 수행할 때 시스템의 기포를 피하고 미세유체 소품 표면이 기판과 평행한지 확인해야 합니다. 그게 다야.
시청해 주셔서 감사드리며 실험에 행운을 빕니다.
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이 비디오는 미세유체 프로브(MFP)의 조립 및 사용을 시연합니다. 거꾸로 놓인 현미경과 MFP를 정렬하고, 완충 용액에 담근 기판 표면을 처리하는 데 필요한 중요한 단계를 다룹니다.
The microfluidic probe enables precise, localized reagent delivery for surface processing without requiring closed microfluidic channels, supporting scalable and reproducible assay development. This capability enhances target validation and phenotypic screening by allowing controlled microenvironments for cellular and molecular interactions. It provides a reusable platform for high-resolution surface patterning, reducing reagent consumption and improving experimental throughput in early discovery workflows.
The microfluidic probe integrates into the discovery continuum from early target validation through assay development to preclinical screening, supporting iterative design and testing cycles.