Name: 내사 - 결합 : 심근 경색의 Murine 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-14T23:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: 배우세요 심근 경색 연구를 위한 쥐 모델 수술 기법. 기관 절개, 흉부 개흉, 좌전하행동맥(LAD) 결찰을 통해 심근 허혈을 유도하고 심장 질환의 병태생리학적 변화를 연구하는 방법을 확인하세요.

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저자는 그녀의 기술 지원 및 수행 조직학에 대한 크리스티안 Pahrmann 감사합니다.

<html> 8~12주의 나이에 20g의 최소 무게 Balb / C 마우스는 찰스 리버 (Sandhofer 웨그 7 D - 97633 Sulzfeld)에서 구입할 수 있습니다. 마우스는 일반 조건, 공급 표준 마우스 알약와 물 광고 libitum 아래에 위치해 있습니다. 유도 챔버를 사용하여 (2 %) isoflurane와 마우스를 마취. <ol><li> 목 지역 ribcage의 왼쪽을 면도하고 80 % 에탄올을 사용하는 소독. </li><li> 의 뒷면에있는 마우스를 놓고 마취를 유지하기 위해 코와 입을 통해 안면을 넣으십시오. </li><li> 마우스가 충분 anesthesized되었는지 확인하는 꼬리와 뒷다리를 곤란하게 반사를 확인합니다. </li><li> 미세한보기에서 호흡 관을 덮고있는 피부, 근육과 조직을 분리 정중선 자궁 절개를 수행합니다. </li><li> 기관은 endotracheal 튜브 (그림 1)을 삽입하는 성문 밑에 두 카트리지 고리 사이의 조직에 작은 구멍을 뚫고 노출하는 것입니다. 마이크로 외과 forecepts를 사용하여 기관의 두개골 부분을 잡고 endotracheal 튜브를 삽입합니다. 양쪽 폐에서 통풍이 잘되었는지 확인하는 흉부 움직임을 확인합니다. </li><li> 호흡 속도 (RR)은 17~18센티미터 H 2 O.의 inspiratory 압력으로 약 110 분당해야합니다 그 왼쪽에 직면하고, 그 오른쪽에 누워, 신중하게 마우스를 켭니다. 3 차 및 4 번째 갈비뼈 사이 leftsided thoracotomy를 수행하고, 출혈을 방지하기 위해 cauter을 사용하여 조심스럽게 조직 및 근육을 절개하다. </li><li> 조심스럽게 흉부를 열고 흉부가 열릴되면, 어떤 날카로운 물체로 폐을 건드리지 않고, 마음을 찾으십시오. 이제 마음을 덮고있는 pericardial 색의 일부를 제거합니다. </li><li> 그 소년은 폐동맥 및 좌측 외이 사이에 위치하고 있습니다. 하나의 봉합사 (그림 2)와 근위 젊은이 ligate에 8-0 Prolene 봉합사를 (Ethicon, Norderstedt, 독일)를 사용합니다. </li><li> 4 일 및 5 일 리브 사이의 가슴 튜브 (28G, 돈으로 좌우되는 카테터), 놓습니다. </li><li> 피부를 닫습니다 갈비뼈 4-0 Prolene 실행 봉합 (Ethicon, Norderstedt, 독일) 적응 6-0 Prolene 실행 봉합 (Ethicon, Norderstedt, 독일)를 사용하여, 레이어에서 흉부 절개를 닫습니다. </li><li> 신중하게 2ml 주사기 (그림 3)의 도움으로 흉부 드레인. 의 뒷면에있는 마우스를 놓습니다. 이제 endotracheal 튜브를 꺼내 7-0 Prolene의 봉합을 (Ethicon, Norderstedt, 독일)를 사용하여 하나의 스티치와 함께 tracheal 카트리지 반지를 적응. </li><li> 마우스의 얼굴 마스크를 놓고 봉합 (Ethicon, Norderstedt, 독일)을 실행하고 4-0 Prolene을 사용하여 피부를 닫습니다. </li></ol> 확인 내사 - 결합의 성공을 확인하는 다른 가능성이 있습니다. 트로포닌 검사는 동물을 안락사시키려는 필요없이 150 밖에 내 혈액을 사용하여 수술 후 6 때까지 18 시간 수행할 수 있습니다. 혈액은 맞춤 트로포닌 검사 키트 (파악 T 감성적, 로체, 만하임) (그림 4)에 적용됩니다. 트로포닌은 근육 세포의 굴지의 필라멘트에서 규정하는 단백질이며, 근육의 세 가지 유형의 다른 isotypes있다. isotypes cTnI와 cTnT는 심장에서 발견되고 조직 부상에 출시하고 있습니다. 트로포닌 T (cTnT)에 대한 표준 시험은 두 마음이 특정 단클론 항체 하나의 함정 혈액 샘플에서 트로포닌 기반으로, 두 번째는 마커입니다. infarcted 지역은 삼일 (그림 5) 이후 macroscopically 확인할 수 있습니다. TTC (2,3,5 - Triphenyltetrazolium 염화) 얼룩 대책 조직 생존이 경색 크기를 평가하는 데 사용됩니다. 에번스 청색 색소 (1.5 %, 1.0mL)에 인산 버퍼 호수 (PBS)가 심근 허혈성 영역을 측정하는 왼쪽 심실 캐비티에 주입합니다. 마우스는 euthanized되고 마음이 조각에 수확하고 sectioned입니다. 조직의 조각은 20 분에 대해 37 ° C에서 1퍼센트 TTC PBS 용액, pH를 7.4에서 incubated입니다. 조직은 2-8에서 하룻밤 PBS 버퍼 포르말린 10 % 해결된 ° C. TTC는 염색 에반스 블루 부정적인 영역 (그림 6) 전 (前) 생체내을 관리합니다. 조직학의 경우 마우스 euthanized 수 있으며 마음이 더 처리를위한 내장되어야한다. 파라핀 섹션을 수행 후, 슬라이드는 H &amp; E (hematoxylin 및 eosin) 물들일 또는 fibrotic 조직 (그림 7)를 시각화하는 trichrome 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1 : Tracheal 튜브. 1A : 노출 기관, 복부 자궁 절개 후. 1B : 기관은 후두에 꼬리 두 연골의 고리를 열립니다. 1C : Tracheal 튜브가 기관에 삽입됩니다. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2 : 심장은 왼쪽 단면 thoracotomy를 통해 노출, 그 소년이 출혈도 잡았입니다. t &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3 : 흉부가 폐쇄되면 늑막 드레인이 수행됩니다. 마우스가 마취하에 아직도있다. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig4.jpg" alt="그림 4" /> 그림 4 : 트로포닌 검사가 긍정적인 경우 두 라인이 몇 분 후에 나타납니다. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig5.jpg" alt="그림 5" /> 그림 5 : explanted 마음을 표시합니다. 5A : 어두운 약간 흰 색상과 허혈성 면적 마음의 매크로 볼 수 있습니다. 5B : infarcted 마음의 단면, 허혈성 지역은 오른쪽 상단 모서리에 표시됩니다.

<ol><li>Atkins, B. Z., Hueman, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+cardiomyoplasty+improves+diastolic+properties+of+injured+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Cellular cardiomyoplasty improves diastolic properties of injured Heart.</a> J Surg Res. 85 (2), 234-242 (1999).</li>
<li>Jaquet, K., KT, K. rause <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+myocardial+scar+size+after+implantation+of+mesenchymal+stem+cells+in+rats%3A+what+is+the+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Reduction of myocardial scar size after implantation of mesenchymal stem cells in rats: what is the mechanism.</a> Stem Cells Dev. 14 (3), 299-309 (2005).</li>
<li>Joung, B., Kim, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+mononuclear+stem+cells+transplanted+in+rat+infarct+myocardium+improved+the+electrical+conduction+without+evidence+of+proarrhythmic+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Yonsei+Med+J%22%5BJournal%5D)">Bone marrow mononuclear stem cells transplanted in rat infarct myocardium improved the electrical conduction without evidence of proarrhythmic effects.</a> Yonsei Med J. 48 (5), 754-764 (2007).</li>
</ol>

기금 현재의 연구는 대학 병원 함부르크 (MK, 여자 Habilitation 그랜트), DFG (SS, SCHR992/3-1), ISHLT (TD, 연구 대상 2009 년)에 의해 지원되었다. 성명서 모든 동물은 실험실 동물 관리의 원칙을 준수 인간의 치료를받은, 동물 실험에 의해 출판 연구소 동물의 관리 및 사용을위한 의료 연구 및 설명서에 대한 국립 협회가 정한 지침과 규정에 따라 수행되었습니다 보건 국립 연구소 (보건 간행물 85-23 국립 연구소, 1985 개정). 모든 동물은 찰스 리버 연구소 (Sulzfeld, 독일)에서 얻은되었고 대학 병원 함부르크 Eppendorf의 동물 보호 시설에서 유지되었다. 동물 표준 차우와 물 광고 libitum을 받았습니다.

요약이 비디오는 소년 - 결합 모델을 단계별로 단계를 시각화하고 쉽게 가능 수술 절차로 생쥐에서 내사 - ligations를 식별합니다.

내사 - 결합 : 심근 경색의 murine 모델

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

경색 및 심근 국소 빈혈의 연구 모델은 심근 국소 빈혈의 급성 및 만성 pathobiological 및 pathophysiological 프로세스를 조사하고 향후 치료를 개발하고 최적화하는 데 필수적입니다. 심근 국소 빈혈을 만드는 두 가지 방법은 실험실 설치류에서 수행됩니다. 첫 번째 방법은 cryo - 펜은 심장 (1-3)의 표면에 적용 cryo 경색, 빠른 있지만 부정 확한 기술을 만드는 것입니다. 이 방법을 사용 과학자는 cryo - 흉터 또한 광대한 심근 손상은 심근 경색과 관련되지 않은 pathophysiological 부작용을 보여줍 만들어집니다, 국소 빈혈로 연결되는 보장할 수 없습니다. 두 번째 방법은 왼쪽 앞쪽에 내림차순 동맥 (내사)의 영구적인 결합입니다. 여기 내사 거의 즉시 볼 수 있습니다 국소 빈혈을 형성 하나의 스티치와 함께 출혈도 잡았입니다. 주변의 심근 조직이 거의 영향을받지 않는 상태에서 젊은이 폐쇄하여 더 이상 혈액의 흐름이 그 지역에서 허용되지 않습니다. 이 수술은 경색 심근 국소 빈혈 관련에서 발생 pathobiological 및 pathophysiological 측면을 imitates. 이 동영상에서 소개하는 방법은 젊은이 ligating하여 마우스 경색 모델의 수술을 보여줍니다. 이 모델은 심장 경색에 pathobiological 및 pathophysiological뿐만 아니라 immunobiological 연구 편리합니다. 표시 기술은 높은 정확도를 제공하며, histological 부분과 잘 연결합니다.

이 동영상은 심근 국소 빈혈의 pathobiological 및 pathophysiological 프로세스를 연구하기위한 빠르고 안정적​​인 모델을 사용하는 방법을 보여줍니다.

내사 - 결합 : 심근 경색의 Murine 모델

경색 및 심근 허혈 연구 모델은 급성 및 만성 병리생물학적 및 병태생리학적 과정을 조사하는 데 필수적입니다...

기관을 노출시키기 위해 정중 경부 절개를 수행하고, 기관 내 튜브를 삽입하기 위해 기관에 작은 구멍을 뚫습니다. 마우스를 오른쪽으로 눕히고 세 번째와 네 번째 갈비뼈 사이에서 왼쪽 흉부 절개술을 수행합니다. 심장을 노출시킨 후 단일 봉합으로 LAD를 결찰합니다.흉관을 삽입하고 절개 부위를 봉합한 후, 주사기로 조심스럽게 흡인하여 흉강을 배액합니다. 마지막으로, 마우스를 다시 등 방향으로 돌려 눕힙니다.기관 튜브를 제거하고 기관과 경부 절개 부위를 봉합합니다. 안녕하세요, 저는 함부르크 대학교 심장 센터 심혈관 외과에서 면역학 및 심장 외과 교수로 재직 중인 Sonya Refa입니다.저희 연구실은 줄기세포 면역생물학 및 이식 면역학에 집중하고 있습니다. 오늘은 LID ligation 모델을 소개해 드리겠습니다. 저희 연구실에서는 이 모델을 사용하여 심근경색 후 심장 재생을 위한 줄기세포 치료의 효과를 연구하고 있습니다.저는 스탠퍼드 대학교의 학생이자 Dreher TSI 연구소의 여름 펠로우인 KA Wan입니다. 그리고 저는 함부르크 대학 심장 센터 TSI 연구소의 Mandy Cooch입니다. 저희가 여러분께 어떻게 결찰술을 수행하는지 보여드리고, 이후에 다양한 방법을 사용하여 심근경색의 성공 여부를 확인하는 방법을 보여드리겠습니다.이제 시작하겠습니다. 마취된 마우스의 목 부위와 흉곽의 왼쪽 부분을 제모합니다. 마우스를 등으로 눕히고, 코와 입 위에 페이스 마스크를 씌워 2% isof fluorine으로 마취 상태를 유지합니다.수술을 시작하기 전 beta isod를 사용하여 마우스의 꼬리와 뒷발을 집어 마취 상태가 충분한지 확인합니다. 현미경 시야 하에서 피부, 근육 및 기관지를 덮고 있는 조직을 분리하여 경부 정중선 절개를 수행합니다. 기관지가 노출되면, 성문 아래의 두 연골 고리 사이 조직에 작은 구멍을 내어 기관 내 튜브를 삽입합니다.기관의 두측 부분을 잡은 상태에서 기관내관을 삽입합니다. 미세수술용 포셉을 사용하여 흉부의 움직임을 확인하고 양쪽 폐가 모두 잘 환기되는지 확인하십시오. 호흡수는 분당 약 110회, 흡기압은 17 ~ 18 cmH2O로 설정해야 합니다.마우스를 조심스럽게 돌려 왼쪽 면을 마주본 상태에서 오른쪽으로 눕힙니다. 세 번째 갈비뼈와 네 번째 갈비뼈 사이에서 왼쪽 흉강 절개술을 시행하고 조직과 근육을 박리합니다. 출혈을 방지하기 위해 코어(coer)를 주의해서 사용하십시오.흉강을 조심스럽게

lad-ligation-a-murine-model-of-myocardial-infarction

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

수많은 유전자 조작 및 / 또는 유전자, 단백질, 세포 및 / 또는 biomaterials의 intramyocardial 주사는 급성 국소 빈혈 / reperfusion 부상과 생쥐의 만성 리모델링의 연구에 시간의 차원에 따라 겹쳐있다. 이 동영상은 국소 빈혈 / reperfusion에 대한 microsurgical 절차, 영구적인 관상 동맥 내고, 그리고 intramyocardial 사출 공부를 보여줍니다.

경색의 Murine 모델에서 관상 동맥 내고과 Intramyocardial 사출

쥐 실험 심근 경색을 유발하는 데 사용되는 외과 수술은 심장과 왼쪽 폐의 앞쪽 표면을 시각화하기 위해 세 번째와 네 번째 갈비뼈 사이의 왼쪽 thoracotomy로 시작합니다. 왼쪽 관상 동맥이 출혈도 잡았되어 가슴이 폐쇄되고 마우스가 저절로 복구 할 수 있습니다.

마우스의 관상 동맥 결합에 대한 수정 기술

이 비디오에서는 좌측 전방 하행 관상 동맥을 영구적으로 결찰하여 심근 경색의 마우스 모델을 생성하는 수술 절차에 대해 설명합니다.

심근경색의 쥐 모델 생성: 마우스 모델에서 좌측 전방 하행 관상동맥의 영구 결찰을 위한 수술 절차

우리는 재현성을 높이기 위해 좌전 하행 동맥 (LAD)에 결찰의 위치에서 더 명확 수 있습니다 마우스 모델에서 심근 경색 (MI)을 시뮬레이션하기 위해 실험 허혈 / 재관류 (I / R) 손상을 유발하는 수술 방법을 소개합니다 마우스에있는 MI 실험.

왼쪽 앞쪽에 내림차순 동맥의 결찰을 통해 심근 허혈 - 재관류 손상의 생쥐 모델

심부전은 입원의 주요 원인이자 사망의 주요 원인입니다. 마우스에서 좌측 전방 하행 관상동맥의 영구 결찰 모델을 적용하여 심근경색 후 심실 리모델링 및 심장 기능 장애를 조사합니다. 마우스의 침습적 혈류역학적 측정 기술이 제시됩니다.

마우스의 왼쪽 전방 내림차순 관상 동맥의 영구 결찰 : 심근 경색 리모델링과 심장 마비의 모델

우리는 마우스 모델에서 좌측 전방 하행 동맥(LAD) 결찰에 대한 신뢰할 수 있는 방법을 제공합니다. 이 방법은 기관 내 삽관, 좌측 개흉술 접근법 및 흉강천자를 포함하는 다른 방법보다 상대적으로 덜 침습적입니다. 이 방법은 급성 및 만성 심근 경색(MI)에 대한 모델로 사용할 수 있습니다.

쥐 왼쪽 앞쪽에 내림차순 (LAD) 관상 동맥 결찰 : 심근 경색에 대한 개선 및 단순화 된 모델

여기서 우리는 마우스에서 좌측 전방 의 관상 동맥의 영구적 인 결찰을 달성하는 방법을 보여주는 외과 적 절차를 설명합니다. 이 모형은 심근 경색의 병리생리학 및 수반되는 생물학 프로세스를 조사하기 위하여 높은 관련성입니다.

왼쪽 전방 내림차순 관상 동맥의 영구 결찰을 사용하는 뮤린 심근 경색 모델

여기서는 미세 조작을 통해 좌측 전방 하행 관상동맥의 정밀 결찰에 의해 마우스에서 심근경색 또는 심근 허혈 재관류 손상을 유도할 수 있는 간단하고 재현 가능한 방법을 설명합니다.

마우스의 심근경색 및 심근 허혈-재관류 손상 유도

여기에 제시된 것은 생쥐에서 왼쪽 관상 동맥의 영구 결찰을위한 수술 절차입니다. 이 모델은 심근 경색 후 병태생리학 및 관련 염증 반응을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

좌측 관상동맥 결찰술: 심근경색의 외과적 쥐 모델

Murine 췌장 아일릿 격리

배우세요 심근 경색 연구를 위한 쥐 모델 수술 기법. 기관 절개, 흉부 개흉, 좌전하행동맥(LAD) 결찰을 통해 심근 허혈을 유도하고 심장 질환의 병태생리학적 변화를 연구하는 방법을 확인하세요.

내사 - 결합 : 심근 경색의 Murine 모델

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