Name: 손상 3 - D 뇌 회로의 타겟팅 바이러스성을위한 확장 가능한 유체 인젝터 배열 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 36 s
Description: 배우세요 병렬 유체 인젝터 배열을 사용하여 뇌 회로에 바이러스를 동시 전달하는 방법을. 이 기술은 광유전학적 조작을 통해 신경 회로 분석 연구의 효율성을 크게 향상시킵니다.

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ESB는 NIH 원장의 새로운 이노 수상 (OD002002 - 01 DP2), NIH 도전 그랜트 1RC1MH088182 - 01, NIH 그랜드 기회 부여 1RC2DE020919 - 01, NIH 1R01NS067199 - 01, NSF (0835878 및 0848804), 맥거번 연구소 Neurotechnology 보너스 프로그램에 의해 자금 인정 , 국방, NARSAD, 알프레드 P. 슬로안 재단, 제리와 마지 버넷, 신경 과학, MIT 미디어랩, Benesse 재단과 월러스 H. 쿨터 재단의 혁신을위한 SFN 연구 수상의학과.

1. Stereotaxic 클램프를 건설 <ol><li> stereotaxic 클램프는 인젝터가 stereotaxic 팔이 평행 있도록 stereotax에 인젝터 배열을 연결하는 데 사용됩니다. </li><li> 그것이 하나 이상의 수술이 동시에 자리를 차지할 수있는 예상되지 않는 각각의 연구실에서 단 하나의 클램프 필요합니다. 이 경우, 동시 수술의 예상 최대 번호와 같은 번호를 확인합니다. 또한 처음에 손상의 경우, 추가를하는 것이 좋습니다 수도 있습니다. </li><li> stereotaxic 클램프하려면, 첫째로, 1.5 mm 외경 (OD) 강철 정맥은 길이 2 인치 절단되고 끝을 중 하나가 평면 때까지 Dremeled입니다. </li><li> 다음, 작은 조각 (약 0.5 X 0.5 cm)는 스페이서로 사용, PCB 킬로그램 보드 밖으로 절단합니다. </li><li> 의 모든 상처가 재료의 표면에 직각되는 것을 보장하기 위해 레이저 커터를 사용하여 두 개의 동일한 직사각형 (1 / 2 &quot;X 8분의 3&quot;는) 1 / 8 &quot;아크릴 판금, 두 원형 구멍을 가지고 각각의 사각형에서 버렸어요 사각형의 반대 구석. 첫 번째 구멍은 1.5mm 직경을 가지고 있으며, 단지 단단히 금속 정맥을 가질 정도로 큽니다. 두 번째 구멍은 직경 16분의 1 &quot;(그림 1C)을하고 있습니다. </li><li> 금속 정맥은 두 번째의 1.5 mm 구멍을 통해 다음 하나의 사각형의 1.5 mm의 구멍에 삽입됩니다. 정맥의 아래 끝은 하키 스틱의 모양을 형성 하단 사각형의 하단 표정으로 정렬됩니다. </li><li> 단단히 두 사각형 사이에 개최되는 공백을 유지하면서,이 구조는 gluing에게 사각형에 공백을 피하기 위해주의되는, 정맥 및 1.5mm 구멍 주위에 뜨거운 접착제를 사용하여 함께 초경 있습니다. 모델링 점토는이 과정에서 함께 물건을 개최 도움이 될 수 있습니다. </li><li> 접착제가 마른 후 1-72 나사는 직사각형의 맨 측면에서 16분의 1 구멍에 삽입됩니다. 그런 다음 1-72 헥스 너트가 1-72 나사의 끝 부분에 실수를하고, 강화입니다. 나사와 너트가 함께 클램프를 잡아 제공하고 있습니다. </li><li> 아래쪽 사각형, 5 분 에폭시 소량의 하단 얼굴 헥스 너트를 연결이 에폭시는 헥스 너트 또는 나사의 스레드에 들어갈 수없이 진수 너트의 가장자리 주위에 제외됩니다. 모든 모델링 흙이 제거되고 그것은 공백이 나사를 강화하여 굳게 장소에서 개최되는 수 있음을 확인합니다. </li></ol> 2. 해밀턴 펌프 및 stereotax : 맞춤 인젝터 배열에 대한 시스템을 준비 <ol><li> 연료 분사 장치 배열 시스템은 두뇌에 좌표 거의 모든 설정을 사용자 정의할 수 있습니다. </li><li> 사용자 첫째 찾습니다은 stereotax에서 사용하는 적절한 좌표로 변환, 마우스 (또는 다른 종) 뇌 아틀라스에서 원하는 사출 사이트의 좌표 (여기서, X -, Y - 및 Z - 좌표). 사출 사이트의 번호 (인물 1A 및 1B 세) 이하 K라는 것입니다. </li><li> 10 μl 해밀턴 주사기 K 번호는 같은 하버드 장치에서 하나로서 주입 / 탈퇴 주사기 펌프에 배치됩니다. </li><li> 폴리에틸렌 튜빙의 다음 3 피트 길이의 조각은 안전하게 각 해밀턴 주사기 바늘에 첨부됩니다. </li><li> 폴리에틸렌 튜브, 업처치 과학에서 F - 252 튜브 슬리브의 각 조각을위한 오픈 엔드 이상 하락하고 있으며 포함된 너트를 사용하여 P - 627 튜브 어댑터에 연결된 또한 업처치 과학에서 물미. </li></ol> 3. 사용자 정의 주입기 배열을 구축 <ol><li> 각 인젝터의 배열은 사용자가 선택되는 좌표의 집합으로 정의됩니다. 단, 번역 및 / 또는 회전에 따라 다릅니다 좌표의 집합에 대해 같은 인젝터 배열을 사용할 수 있습니다. </li><li> 오직 상대 X 및 사출 사이트의 Y 좌표를 고려 K 구멍 &quot;이 같은 상대적인 간격으로.이 구멍이 Modela 미니 공장과 0.011를 사용하여 몰락는&quot;두께 32분의 1의 PCB 킬로그램 보드로 뚫고 아르 맥마스터 - 카에서 드릴 비트 직경. 속보 또는 드릴 비트를 착용하지 않도록 책임의 느린 속도 (Z - 스피드)를 사용해야합니다. 방앗간에서 보드를 제거하기 전에, 사각형은 작은 하나를 입고 피하기 위해, 직경 32분의 1 &quot;의 큰 드릴 비트를 사용하여 작은 구멍 주위 몰락하는 미니 밀에 대한 코드가 쉽게 MATLAB을 사용하여 생성할 수 있습니다;. 샘플 코드는 다음과 같은 파일에 제공됩니다. <ol class="lroman"><li> generate.m - MATLAB 코드를 원하는 좌표에서 Modela 코드를 생성 </li><li> holes_ex.rml - 킬로그램 - 보드에 드릴링 링 패턴 (8 홀)에 대한 Modela 코드 </li><li> outline_ex.rml - 구멍 주위에 드릴링 사각형에 대한 Modela 코드 </li></ol></li><li> 245 μm의는 OD/100 μm의 내경 (ID) 융합 실리카 모세관 튜브, Polymicro 기술에서 사용할 수는 3 인치 조각 K 오브 번호로 절단됩니다. 이들은 각각의 인젝터를 구성. 모세관 튜브의 일회용 조각을 통해 찌르고있다구멍의 각, 실제 인젝터를 괴롭히는없이 파편을 치워 수 있습니다. 인젝터는 다음 각 구멍에 중간 삽입, 그들이 서로 밀접하게 병렬 개최하고 있습니다 있도록. 인젝터는 연료 분사 장치를 배열의 구조를 형성, 이사회에 epoxied 있습니다. 유지 모든 올바른 길이로 인젝터를 장식하는 것입니다. </li><li> 연료 분사 장치를 배열은 stereotaxic 클램프의 나사를 강화하여 다음 아크릴 사각형 사이의 킬로그램 - 보드 중 하나가 모서리를 배치하여 stereotaxic 클램프에 연결하고 있습니다. 다음, 클램프의 금속 정맥은 stereotax의 부착 메커니즘을 사용하여 stereotax에 첨부되어 있습니다. </li><li> 다음 중 모든 현미경으로 이루어집니다. 외부 인젝터 (즉, 다른 인젝터의 부딪히는없이 스트레이트 에지와 함께 측면에서 접근할 수있는 하나) 중 하나, 킬로그램 보드의 하단 넘어 연장 끝 가위로 절단됩니다. 피질 주사 들어, 인젝터는 킬로그램 기판의 표면을 넘어 약 5mm 연장하도록 적합합니다. 깊은 주사의 경우이 번호는 깊이 해당 증가에 의해 증가 수 있습니다. 팁는 Dremel 도구 평평합니다. 심도 정밀 덜 중요한 경우 인젝터 팁 또한, 막히는에 대한 추가 예방 조치로 각도로 지상 수 있습니다. </li><li> 다음 안정된 기준점이 stereotaxic 팔 범위 내에서 선택하고, 연료 분사 장치를 배열은 외부 주입기의 평평 끝에,이 참조 지점에되도록 이동합니다. </li><li> 두 번째 주입기가 해당 좌표와 함께 선택됩니다. 첫 번째와 두 번째 인젝터 좌표 사이의 높이에 상대적인 차이가 (Z - 방향)입니다 간주됩니다. 인젝터 배열이 상대 거리에 의한 Z의 축을 따라 이동됩니다. 두 번째 주입기는 두 번째 주입기의 끝은 기준점의 높이에서 이제 평평하고 있도록 손질하고 올바른 길이로 Dremeled입니다. 연료 분사 장치를 배열은 참조 지점으로 분사기 팁의 비교를 용이하게하는 X와 Y 방향으로 이동할 수 있습니다. </li><li> 트리밍의이 과정은 나머지 인젝터에 대해 반복됩니다. </li></ol> 4. 전체 시스템을 조립 <ol><li> stereotaxic 클램프 및 맞춤 인젝터 배열은 모두 이미 만들어진,이 부분이 필요합니다. </li><li> 각 인젝터의 백 엔드는 (손질되지 않은 끝), P - 235 너트와 업처치 과학에서 P - 200 물미를 사용하여 F - 240 튜브 슬리브 파란색으로 삽입 이미 연결된 스레드 어댑터에 연결되어 폴리에틸렌 튜브에 의해 해밀턴 펌프합니다. 제조 업체의 지침에 대한 자세한 내용은 상담을하실 수 있습니다. </li><li> 27 게이지 바늘을 사용하여 실리콘 오일은 전혀 공기 방울과 함께 전체 시스템 인젝터 팁에 해밀턴 주사기에서 가득 있도록 해밀턴 주사기의 뒷면에 주입합니다. </li><li> 해밀턴 주사기가 해밀​​턴 펌프에 다시 배치됩니다로서, 실리콘 오일의 가장 큰 가능한 볼륨이 주사기에 유지됩니다. </li><li> 실험은 펌프가 (이 경우 두)을 위해 설계보다 더 주사기가 필요한 경우, 주사기는 한 다른 그들이 평행 유지하고, 모든 조각이되는 것을 보장하기 위해 플라스틱 작은 조각 (예 : 바늘 모자)과 간격 수 동일한 범위에 펌프에 의해 밀려. 또는 다중 랙 업그레 이드 키트는 한 10 주사기까지 개최 하버드 장치에서 구입하실 수 있습니다. </li></ol> 5. 주사 / 수술 <ol><li> 병렬 주입기로 주입의 과정은 하나의 피펫과 주입의 매우 유사합니다. </li><li> 빠른 펌핑은 크고 작은 튜브 사이의 공동에 대한 스트레스를 넣어 있기 때문에 그것은 천천히 리필을 사용하여 /이 과정에서 속도를 달이다하는 것이 필수적입니다. 추천 최대 속도 : 2 μl / 바이러스를로드하는 분, 그리고 0.1 μl / 바이러스를 일으키는위한 분. </li><li> anesthetized 마우스는 stereotax에 배치하고, 실험을 통해 anesthetized 남아있다. </li><li> 필요에 따라 마우스를 준비합니다. 예를 들어, 메스와 싱글 컷이 눈 사이에서 귀 사이에, 피부의 정중선을 만들 수 있습니다. 피부는 두개골을 노출 다시 뽑아이며, 근막이 닦아 있습니다. 가져온 유리 피펫은 stereotax에 첨부되어 있습니다. bregma 및 람다가 같은 높이로 정렬하고, 그래서 그들을 연결하는 라인이 stereotax의 Y 축 평행 것을 때까지 귀 바의 위치가 조정됩니다. stereotax의 축의는 사출 좌표 계산되었습니다있는 좌표계에 따라 지향하고 있습니다. stereotaxic는 bregma에 유리 피펫의 끝에와 제로는 다음 팁을는 X 및 사출 사이트 중 하나의 Y - 좌표에서 약간 두개골 위에 위치합니다. </li><li> 뼈의 매우 얇은 층이 남아 때까지 치과 드릴을 사용하여, 팁 아래의 두개골은 신중하게 멀리 앞에 서있다. 유리 피펫 낮은 수몰락하는 구멍이 올바른 위치에 중심 있는지 확인하기 위해 제기 에드합니다. 30 게이지 바늘을 사용하여 레이어의 작은 조각이 부드럽게 올바른 X -와 Y - 좌표에서, 개털되도록 두라 메이터가 노출되는. 이 구멍은 인젝터 (0.25mm 폭) 중 하나에 맞게 충분 커야합니다. 다이어그램 그림 1D를 참조하십시오. 이 방법에서는 작은 0.25mm 넓은 구멍에서 두개골에 만든 X - 각 주사 사이트에 해당하는 Y는 - 좌표. </li><li> 유리 피펫은 샵스 컨테이너에서 삭제되고 맞춤화된 인젝터 배열은 stereotaxic 클램프를 사용하여 stereotax에 첨부되어 있습니다. </li><li> 제대로 주입기 배열의 각도를 설정하려면 두 외부 인젝터는 다음과 같이 주어진 참조 지점으로 조정하는 선택입니다. 인젝터 중 하나가 참조 지점과 일치하면, 상대 X -이 인젝터에 상대적인 사출 사이트간에 Y - 거리와 다른 하나를 고려하십시오. 전체 주입기 배열이 이러한 상대적인 거리에 의해 X -와 Y - 방향으로 이동되도록 stereotax의 축이 조정됩니다. 두 번째 주입기 이제 기준점에 부합하지 않으면, 금속 정맥은 느슨하게하고 회전합니다. 인젝터 배열이 올바르게 직각 때까지이 과정은 반복 반복됩니다. </li><li> 주사기가 2 μl 점 (이상)에까지 바이러스와 인젝터를 작성하기 전에, 인젝터는 실리콘 오일로 가득합니다. 이것은 제보에 막히는 모든 공기 방울 또는 쉽게로 이전 묘사, 주사기의 뒷면에서 실리콘 오일과 리필로 전체 시스템을하지 않고, 해밀턴 펌프를 사용하여 앞으로 기름을 추진하여 제거할 수 있도록, 버퍼 영역을 제공합니다. </li><li> Parafilm의 살균 조각은 두개골에 위치하며, 인젝터는 부드럽게 Parafilm에 가만히있어. 크게 다양한 깊이, 맞춤 가공된 부분 (예 : 계단 모양의 객체)로 좌표 로딩 용이하게 수 있습니다. </li><li> 다음 부품은 바이러스 1 μl이 (작은 수량이 원하는 경우에는 다음과 같은 수량이 크기를 줄일 수 함) 각 사이트에서 로드할 수 있다고 가정합니다. 바이러스&gt; 1 μl를 각 사이트에서 주입 것을 보장하기 위하여, 바이러스의 1.5 μl은 각 인젝터의 끝에 Parafilm이나 계단에 pipetted입니다. </li><li> 해밀턴 펌프의 리필 속도 1 μl / 분 설정으로 바이러스 1.2 μl은 각 인젝터로 리필됩니다. </li><li> 가장 긴 주입기의 끝은 bregma에서 제로이며, 다음 인젝터 배열은 그 주입기의 X 및 Y - 좌표 이동합니다. 막히는가 문제가있다면 많은 깊은 대상이 참여하는 경우, 말씀 :도 두뇌에 인젝터 팁 삽입하기 전에, 그것은 바이러스가 모든 인젝터 팁에서 신흥 볼 수 때까지 펌프 일으키는를 시작하는 때로는 권합니다. 이것은 인젝터 팁든지 공기 방울을 제거하고, 또한 더 괴롭히는가 없다는 것을 보장합니다. 막히는의 경우, 해밀턴 펌프는 부드럽게 막히는 아웃을 취소, 2 μl / 분 더 높은 속도로 짧은 펄스를 달이다으로 설정됩니다. </li><li> 연료 분사 장치를 배열은 다음 올바른 Z - 깊이, 30 게이지 바늘로 만든 작은 구멍을 통해 저하됩니다. </li><li> 바이러스 1 μl은 0.1 μl / 분, 각 인젝터를 통해 주입합니다. </li><li> 주사는 30 분 동안 혼자 남아 있습니다. </li><li> 연료 분사 장치를 배열 천천히 두뇌에서 추출되면 해밀턴 펌프는 각 인젝터에 막히는 것을 확인하기 위해, 0.1 μl / 분 같은 속도로 불어 넣다로 설정됩니다. </li><li> 다음 인젝터 2 μl / 분 에탄올 1.5 μl를 충진하고 일으키는 청소됩니다. </li><li> 마지막으로, 인젝터는 각 해밀턴 주사기에 2 μl 버퍼 영역을 유지하기 위해 실리콘 오일 리필 있습니다. </li><li> 모든 장비는 기관의 biosafety과 동물 사용 프로토콜에 따라, 절차 전후에 소독해야합니다. </li></ol> 6. 대표 결과 개인 시간이 개업의 기술에 따라 달라집니다 있지만 병렬 인젝터의 배열은, 설치 및 복구 시간을 카운트 아니라, 인젝터의 숫자와 같은 요인에 의해 거의 수술을 속도. 1 microliter 주입을 위해, 우리는 일반적으로 직경 약 1mm (그림 1E)의 영역에 lentivirus 표현을 보았다. 분사의 정밀도 팁 위치의 다양성이 재판에서 재판에 대해 45 미크론 (끝 위치에서 의도 팁 위치로 거리의 표준 편차)가 그러한되었습니다. <img src="/files/ftp_upload/1489/1489fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. 트리플 병렬 인젝터 배열의 사진은 세 동시 주사 들어, 트리플 인젝터의 구성을 보여주는 병렬 인젝터 배열 시스템, 개략도. B, 디자인, 구현 및 병렬 바이러스 인젝터 배열을 사용하지 않습니다. diagrammed . <st롱&gt; C, 위에서 개요에 표시된 stereotaxic 클램프, D, 손상 - 최소화, 두뇌에 주입기 삽입을 위해 두개골에 구멍의 효율적인 개방을위한 기술의 그림 :. 치과 드릴, 얇은 다운 두개골 ~ 50 미크론의 두께로 다음 사용 channelrhodopsin - 2 (ChR2)를 보여주는 작은 craniotomy을 열 날카로운 바늘의 팁. E, 형광 이미지 GFP - 레이블로 트리플 인젝터 배열의 대상이 셋 마우스 대뇌 피질의 지역에서 세포가 B.에 표시

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</ol>

모든 절차는 실험 동물에 대한 NIH 가이드에 따라되었으며 MIT 동물 관리 및 사용 Biosafety위원회의 승인을.

(예 : 1,4,5,6,7,8 빛을 짧은 펄스에 대한 응답으로, temporally - 정밀한 방식으로 최근에는 유전자 인코딩 광학 sensitizers의 숫자가 활성화되는 뉴런을 활성화하고 생체내의 침묵 , 11). 뉴런은 포유류의 두뇌에 빛을 sensitized있다있는 주요 방법은,에서 마우스에서 원숭이에 이르기까지 동물의 두뇌에 opsins에 대한 인코딩 유전자를 제공할 수있는 등 lentiviruses 및 adeno - 관련 바이러스 (AAV)와 같은 바이러스를 통해이다 안전하고 지속 패션 (예 : 2,9,10). 바이러스는 특히 쥐가 원숭이와 같은 유전자 모델 생물되지 않은 생물, 트렌스 제닉보다 빠른 처리 시간을 허용하고, opsins에 대한 유전자 변형 시나리오에서 가능하지 않을 수 있습니다 높은 표현 수준을 사용 수 있습니다. 여기서 우리는 하나의 수술 단계에서 전체 3 차원 뇌 구조가 virally 유전자를 타겟팅할 수 있도록 신속한 timescale에 만들 수있는 병렬 인젝터 배열, &quot;회로 수준 트렌스 제닉을&quot;보여줍니다. 연료 분사 장치를 배열은 polyimide / 융합 - 실리카에 피드를 각 각 드라이브 주사기 세트는 높은 압력 관용 커넥터를 통해 모세관 하나 이상의 변위 펌프로 구성됩니다. 모세 혈관은 크기이며, 다음 stereotactic 위치 보드를 지정 밀링에 의해 지정된 원하는 위치에 삽입, 따라서 바이러스 또는 다른 시약이 뇌 영역의 원하는 집합에 전달 될 수 있도록. 장치를 사용하려면, 외과 먼저 기름을 완전히 유체 서브 시스템을 가득 채우고 바이러스와 모세 혈관을 backfills, 삽입 두뇌에 장치 및 (&lt;0.1 ​​μL / 분) 천천히 시약을 infuses. 이 기술 (예 : 같은 행동을하는 동안 정확한 시간에 complexly 모양의 구조의 밀리초 - timescale 종료 (예 : 해마 등), redundantly 행위 수 있습니다 양자 구조의 temporally - 정밀 불활 성화와 같은 실험을 새로운 종류의 다양한 활성화됩니다 왼쪽과 오른쪽 편도) 및 위상 밖으로있는 두 지역을 운전 여러 개별 뇌 영역 (예,의 섭동 교차 지역 synchrony 각 지역 내의 활동에 따라 달라집니다 방법을 연구, 또는 일부를 입을 동안 지역으로 입력을 자극하는 ) 몇 가지 목표 중 어느 이러한 입력의 효과를 중재에 대한 중요 이해하기 위해서는 대상으로하고 있습니다. 영장류에서이 같은 큰 두뇌 들어있는 우리는 최근 광학 셀 타입의 특정 신경 활성화 3 behaviorally - 관련 분야에서 활동을 perturbing 것은 크고 복잡한 구조의 바이러스 라벨이 필요할 수 있습니다를 증명하고있다. 마약, neuromodulators, 신경 전달 물질, 심지어 세포 - - 두뇌의 복잡한 3 - D 패턴에 temporally - 정밀한 방식으로 우리는 병렬 인젝터 배열이 거의 모든 페이로드를 삽입하는 데 사용할 수 있습니다. 마지막으로, translational 관점에서 그것은 빠르게, 환자 맞춤형 유전자 치료 또는 약물 전달 장치가 빠르게 될 수도 있습니다 사용자 정의 - 설계 및 잠재적으로의 사용을 통해 pathologies 다양한위한 새로운 치료법을 지원, 각각의 뇌 형상에 맞게 가공 광학 제어 분자. 연료 분사 장치를 배열 양쪽 공간과 volumetrically, 정확하게 설계되었습니다. 에서 X 및 Y - 지시,이 인젝터는 서로 평행하게 개최되도록 인젝터를 맞게 충분 큰 구멍이있는, 저렴한 미니 밀을 사용하여 매우 정확하게 배치 구멍을 시추에 의해 성취, 그리고 정확한에 위치입니다. Z - 방향에서 인젝터는 stereotaxic 수술 자체의에 상응하는 정밀도 수준을 허용, stereotaxic 장치를 사용하여 손질하고 있습니다. 용적 정밀도 해밀턴 펌프의 정밀도뿐만 아니라 고압 액체 크로마 토그래피 (HPLC) 필드에서 적응 거의 제로 죽은 볼륨 커넥터에서 발생한다. 인젝터는 등 철강 cannulas과 같은 대안의 큰 벽 두께없이 강하고 그것이 압력을 받고 정확한 모양과 간격을 유지 충분한 강성이다 융합된 실리카 모세관 튜브에서 만들어집니다. 작은 수정을 쉽게 실험의 다양한 병렬 인젝터 배열을 적응 할 수 있습니다. 바이러 스나 미세한 간격의 작은 볼륨이 필요한 경우 예를 들어, 작은 모세관 튜브는 해당 작은 드릴 비트와 함께, 고용 수 있습니다. 미래의 장치는 (아마도 같은 장치가 자유롭게 이동하는 동물의 머리에 장착할 수 있도록)의 크기를 최소화하기 위해, 병렬 인젝터의 수를 증가, microfluidic 채널과 펌프를 활용 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>드레멜 툴(Dremel Tool)</td><td>도구</td><td>Dremel</td><td>3956-02</td><td></td></tr><tr><td>레이저 커터</td><td>도구</td><td>Universal Laser Systems</td><td>VLS2.30</td><td></td></tr><tr><td>글루건</td><td>도구</td><td>Stanley Bostitch</td><td>GR20</td><td></td></tr><tr><td>주입/회수 시린지 펌프 (Hamilton 펌프)</td><td>도구</td><td>Harvard Apparatus</td><td>702001</td><td></td></tr><tr><td>10 &amp;mu;l Hamilton 시린지</td><td>도구</td><td>Hamilton Co</td><td>701N</td><td>주입 지점당 하나씩 필요</td></tr><tr><td>마우스 정위 고정 장치(stereotax)</td><td>도구</td><td>Stoelting Co.</td><td>51725D</td><td></td></tr><tr><td>Modela 미니 밀(mini-mill)</td><td>도구</td><td>Roland</td><td>MDX-15</td><td></td></tr><tr><td>미니 밀용 직경 0.011&quot; 드릴 비트</td><td>도구</td><td>McMaster-Carr</td><td>8915A12</td><td></td></tr><tr><td>미니 밀용 직경 1/32&quot; 드릴 비트</td><td>도구</td><td>McMaster-Carr</td><td>8848A35</td><td></td></tr><tr><td>고속 치과용 드릴</td><td>도구</td><td>Lynx</td><td>333</td><td></td></tr><tr><td>치과용 드릴 액세서리</td><td>도구</td><td>Pearson Assessments</td><td>F 35-08-25 F 35-07-10 P 86-02-38</td><td></td></tr><tr><td> </td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>외경(OD) 1.5mm 스테인리스 스틸 캐뉼라</td><td>재료</td><td>Small Parts, Inc.</td><td>HTX-15R</td><td></td></tr><tr><td>1-72 바인딩 슬롯 머신 나사</td><td>재료</td><td>Small Parts, Inc.</td><td>MX-0172B</td><td></td></tr><tr><td>1-72 육각 너트</td><td>재료</td><td>Small Parts, Inc.</td><td>HNX-0172</td><td></td></tr><tr><td>PCB 프로토보드, 두께 1/32&quot;</td><td>재료</td><td>Digi-Key</td><td>PC57-T-ND</td><td></td></tr><tr><td>아크릴 판, 두께 1/8&quot;</td><td>재료</td><td>McMaster-Carr</td><td>8560K239</td><td></td></tr><tr><td>HPLC 커넥터</td><td>재료</td><td>Upchurch Scientific</td><td>F-252, P-627, P-200, P-235, F-240 (일부는 10개 묶음으로 구매 가능하며, 품번 끝에 &amp;#8216;x&amp;rsquo;를 추가하면 됨)</td><td>재사용 가능한 F-252, P-627, P-235를 제외하고, 지점당 주입 1회마다 하나씩 필요</td></tr><tr><td>융합 실리카 모세관 튜브, OD: 245 &amp;mu;m, ID: 100 &amp;mu;m</td><td>재료</td><td>Polymicro Technologies</td><td>2000022-10M</td><td></td></tr><tr><td>5분 경화 범용 에폭시</td><td>재료</td><td>Permatex</td><td>84101</td><td>5분 경화 범용 에폭시</td></tr><tr><td>폴리에틸렌 튜브 .066 x .095 inch</td><td>재료</td><td>VWR international</td><td>63018-827</td><td></td></tr></tbody></table>

손상 3 - d 뇌 회로의 타겟팅 바이러스성을위한 확장 가능한 유체 인젝터 배열

Scalable Fluidic Injector Arrays for Viral Targeting of Intact 3-D Brain Circuits

신경 회로에 대한 우리의 이해 - 크게 빠른 속도로 복잡한 3 유전자를 타겟팅하는 기술을 이용하여 용이 될 - 그들이 보조하다 감각, 생각, 감정, 그리고 행동, 어떻게 그들이 신경 및 정신 장애에 손상이있는 계산을 중재하는 방법 - 의 빠른 생성 활성화 차원 신경 회로, &quot;회로 수준 트렌스 제닉을.&quot; 우리는 최근에 빛에 민감한 단백질에 대한 바이러스 인코딩 밀리초 - timescale 활성화 특정 세포 유형을 감광성을하고 그대로 머리에 입을 수있는 방법을 개발했습니다. 우리는 여기에서 뇌의 3 차원 구조 내에서 정의된 포인트 수십하는 바이러스를 (또는 다른 유체) 제공 가능한 인젝터 배열의 설계 및 구현을 제시 (<strong&gt; 그림. 1A, 1B</strong&gt;). 연료 분사 장치를 배열은 polyimide / 융합 - 실리카에 피드를 각 각 드라이브 주사기 세트는 높은 압력 관용 커넥터를 통해 모세관 하나 이상의 변위 펌프로 구성됩니다. 모세 혈관은 크기이며, 다음 stereotactic 위치 보드를 지정 밀링에 의해 지정된 원하는 위치에 삽입, 따라서 바이러스 또는 다른 시약이 뇌 영역의 원하는 집합에 전달 될 수 있도록. 장치를 사용하려면, 외과 먼저 기름을 완전히 유체 서브 시스템을 가득 채우고 바이러스와 모세 혈관을 backfills, 삽입 두뇌에 장치 및 (&lt;0.1 ​​microliters / 분) 천천히 시약을 infuses. 연료 분사 장치를 배열의 병렬 특성은 가벼운 활성화 및 정의 뇌 회로의 입을를 활성화하기 위해 광학 sensitizers 같은 바이러스성 payloads과 전체 신경 회로의 신속 정확하고 안정적​​인 라벨을 용이하게합니다. 같은 뇌 영역의 원하는 세트 조명 납품을위한 광섬유 어레이와 같은 다른 기술과 함께, 우리는 그대로 머리에 인과 신경 기능의 탐색 체계를 수있는 도구 상자를 만들 수 있도록 최선을 다하겠습니다. 이 기술은 포유류의 회로에 초점을 맞춘 신경 과학 이러한 체계적인 접근을 열고 같은 비 인간 영장류와 같은 큰 동물의 뇌 영역의 라벨 촉진뿐만 아니라 셀 - 특정 광 제어 prosthetics에 대한 임상 translational 경로를 열 수 없습니다 있습니다 누구의 정밀도는 어려운 뇌 질환의 개선 치료를 가능하게 수 있습니다. 마지막으로, 여기에서 설명한 같은 장치가 원활히 수 있습니다 정확하게 - 초과 쉽게 사용자 정의 방식으로 3 차원 구조 이러한 줄기 세포 및 약리 대리인 등 다른 payloads의 유체 전달,.

신경 회로를 제어 및 분석<em&gt; 생체내에</em&gt; 뇌 영역의 원하는 3 차원 세트에 바이러스 및 기타 시약의 전달 기술에 의해 촉진됩니다. 우리는 복잡한 뇌 회로의 광학 조작을 지원, 사용자 정의 유체 인젝터 배열 제조 및 virally 인코딩된 광 sensitizers의 배달을 보여줍니다.

손상 3 - D 뇌 회로의 타겟팅 바이러스성을위한 확장 가능한 유체 인젝터 배열

신경 회로가 감각, 사고, 감정 및 행동을 뒷받침하는 계산 과정을 어떻게 매개하는지, 그리고 이러한 회로가 어떻게 손상되는지에 대한 우리의 이해는...

두 개의 직사각형 아크릴 조각을 레이저로 절단한 후 조립하여 정위 고정 클램프를 제작하며, 이는 정위 고정 장치에 대해 인젝터 어레이를 단단히 고정하는 역할을 합니다. 원하는 뇌 회로에 맞게 폴리에틸렌 튜빙이 연결된 시린지를 시린지 펌프에 장착합니다. 밀링 머신을 사용하여 구멍을 뚫고 그 통해 용융 실리카 튜빙을 삽입함으로써 인젝터를 형성합니다.인젝터는 클램프에 가역적으로 장착된 후, 관심 있는 뇌 회로를 겨냥하도록 조정됩니다. 각 인젝터는 단일 폴리에틸렌 채널에 연결되어 있습니다. 시스템 사용 준비 단계에서는 주사기를 통해 시스템 내부를 실리콘 오일로 채운 다음, 인젝터에 유체 시약을 로딩합니다.그 후 병렬 인젝터를 뇌 표적 부위에 삽입하고 시약을 주입합니다. 안녕하세요, 저는 MIT 합성 신경생물학 그룹의 스테파니 찬(Stephanie Chan)입니다. 지금까지 공간적으로 복잡한 뇌 회로에서 유전자를 발현시키기 위해서는 시간이 오래 걸리고 비용이 많이 드는 형질전환 동물 제작이나, 한 번에 한쪽씩 수행해야 하는 고된 바이러스 주입 과정이 필요했습니다.오늘은 뇌의 복잡한 3차원 패턴에 유체를 전달할 수 있는 병렬 인젝터 어레이를 구축하고 활용하는 방법을 보여드리겠습니다. 저희는 이 어레이를 사용하여 여러 인젝터 세트를 통해 바이러스를 병렬로 전달함으로써 모든 표적에 동시에 도달하게 하여, 회로 특이적 형질전환 마우스를 빠르게 제작합니다. 본 인젝터는 뇌의 복잡한 분포 지점에 모든 종류의 유체 시약을 전달하는 데 사용할 수 있습니다.오늘의 목표는 광민감성 단백질을 인코딩하는 바이러스를 전달하여, 특정 회로 내의 특정 세포 유형을 시간적으로 정밀하게 켜고 끌 수 있도록 하는 것입니다. 저희 연구실에서는 이 기술을 회로 특이적인 방식으로 빛을 전달하는 광섬유 어레이와 결합하여 사용합니다. 그럼 시작하겠습니다.먼저 인젝터 어레이를 고정하며 정위 고정 장치(stereo tax)에 장착할 수 있는 정위 고정 클램프를 제작합니다. 클램프 제작을 위해 다음 품목들이 필요합니다. 한쪽 끝이 납작하게 처리된 외경(OD) 1.5 millimeter의 2인치 스틸 캐뉼라, 약 0.5 by 0.5 centimeter 크기의 작은 PCB 프로토보드 조각, 그리고 동일한 크기의 직사각형 조각 두 개가 필요합니다.두 개의 아크릴 직사각형은 각각 1/8인치 두께의 아크릴 시트를 1/2 x 3/8인치 크기로 절단하여 준비합니다. 서로 반대편 모서리에 두 개의 원형 구멍을 뚫습니다. 첫 번째 구멍의 직경은 1.5 mm여야 하며, 금속 캐뉼라를 단단하게 고정할 수 있을 정도의 크기여야 합니다.두 번째 구멍의 직경은 1/16인치여야 합니다. 금속 캐뉼라를 첫 번째 직사각형의 1.5 mm 구멍에 삽입한 다음, 두 번째 직사각형의 1.5 mm 구멍을 통과시키십시오. 이때 캐뉼라의 하단 끝을 아래쪽 직사각형의 바닥면과 일치시켜 하키 스틱 모양이 되도록 하고, 두 직사각형 사이에 스페이서를 배치합니다. 이 과정에서 스페이서가 두 직사각형 사이에 단단히 고정된 상태를 유지하며 구성 요소들을 고정하려면 모델링 클레이를 사용하는 것이 유용합니다.캐뉼라 주변과 1.5 millimeter 구멍 주위에 글루건을 사용하여 이 구조물을 고정합니다. 접착제가 마른 후 스페이서가 직사각형 부분에 붙지 않도록 주의하십시오. 1/72 육각 너트를 1/16 구멍 위에 올린 다음, 직사각형의 반대편에서 1/72 나사를 조여 고정합니다.너트를 직사각형에 고정하기 위해 너트 가장자리에 5분 경화 에폭시를 소량 도포합니다. 이때 에폭시가 너트의 나사산이나 나사에 들어가지 않도록 주의하십시오. 에폭시가 경화되면, 직사각형 상단의 1/16인치 구멍으로 1-72 나사를 삽입하여 너트에 조입니다.모델링 클레이를 제거하고 나사를 조여 스페이서가 단단히 고정되는지 확인합니다. 인젝터 어레이 시스템은 뇌의 거의 모든 좌표 세트에 맞게 맞춤 설정할 수 있습니다. 먼저, 대상 종의 뇌 지도(brain atlas)에서 원하는 주사 부위의 좌표를 찾고, 이를 스테레오탁식 장치에서 사용하는 적절한 좌표로 변환하십시오.본 시연에서는 마우스를 사용하며, 세 곳의 주사 부위가 있으므로 주사기용 튜브 세 개가 필요합니다. X, y, Z 좌표는 마우스 뇌 지도(atlas)의 내측-외측, 전측, 후측 및 복측 좌표에 해당합니다. 다음으로, Harvard Apparatus 사의 제품과 같은 주사 주입 및 회수 펌프에 10 µL Hamilton 시린지 세 개를 장착하고, 각 Hamilton 시린지의 바늘에 3피트 길이의 폴리에틸렌 튜브를 각각 단단히 연결합니다.F 2 52 튜브 슬리브를 개방된 끝단 위로 밀어 넣고, P 2 35 너트와 P 200 fal을 사용하여 P 6 27 튜브 어댑터에 연결합니다. 맞춤형 인젝터 어레이를 제작하려면, modela mini mill과 0.011 inch 직경의 드릴 비트를 사용하여 1/32 inch 두께의 PCB 프로토보드 공간에 세 개의 구멍을 뚫습니다. 주입 부위의 상대적 X 및 Y 좌표에 따라 세 개의 구멍을 뚫은 후, 보드를 밀에서 분리하기 전에 1/32 inch 직경의 드릴 비트를 사용하여 작은 구멍들 주변으로 직사각형 모양으로 뚫습니다.다음으로, 각 인젝터를 각 구멍의 절반 정도까지 삽입하여 단단히 고정되고 서로 평행을 유지하도록 합니다. 에폭시를 사용하여 인젝터를 보드에 부착함으로써 인젝터 어레이를 형성합니다. 그 후 인젝터 어레이를 스테레오택식 클램프에 부착합니다.프로토보드의 한쪽 모서리를 아크릴 직사각형 사이에 놓고 정위 고정 클램프의 나사를 조입니다. 그 후, 스테레오택스의 부착 메커니즘을 사용하여 클램프의 금속 캐뉼라를 스테레오택스에 부착합니다. 다음 단계들은 다른 인젝터와 충돌하지 않고 직선 가장자리로 측면에서 접근 가능한 외부 인젝터 중 하나를 대상으로 현미경 하에서 수행됩니다.프로토보드 하단 너머로 뻗어 나온 팁 부분을 절단합니다. 드레멜 툴을 사용하여 팁 끝을 평평하게 만듭니다. 다음으로, 뇌정위 고정 장치(stereotaxic arm)의 범위 내에서 안정적인 기준점을 선택하고, 외부 인젝터의 평평한 팁 부분이 이 기준점에 오도록 인젝터 어레이를 이동시킵니다.해당 좌표와 함께 두 번째 인젝터를 선택하십시오. 첫 번째 인젝터 좌표와 두 번째 인젝터 좌표 사이의 상대적인 높이 차이 또는 Z 방향 거리만큼 인젝터 어레이를 Z축을 따라 이동시키십시오. 이 두 번째 인젝터의 팁이 기준점의 높이에 오도록 다듬은 후 Dremel 툴로 평평하게 만드십시오.인젝터 어레이는 X 및 Y 방향으로 이동 가능하여 인젝터 팁과 기준점을 쉽게 비교할 수 있습니다. 나머지 인젝터들에 대해 이 트리밍 과정을 반복하면, 인젝터 어레이를 전체 시스템에 조립할 준비가 완료됩니다. 전체 시스템을 조립하려면 앞서 제작한 스테레오택틱 클램프와 맞춤형 인젝터 어레이가 필요합니다.인젝터 어레이를 멸균한 후, 각 인젝터의 뒷부분(트리밍되지 않은 끝부분)을 blue F two 40 튜빙 슬리브에 삽입합니다. P 2 35 너트와 P 200 페룰을 사용하여 인젝터의 뒷부분을 폴리에틸렌 튜빙으로 Hamilton 펌프에 이미 연결되어 있는 나사산 어댑터에 부착합니다. 27 gauge 바늘을 사용하여 Hamilton 시린지에 멸균 실리콘 오일을 주입하여 Hamilton 시린지부터 인젝터 팁까지 전체 시스템이 채워지도록 합니다.공기 방울이 유입되지 않도록 매우 주의하십시오. 그렇지 않으면 주입되는 바이러스의 부피가 부정확해지거나 바이러스가 전혀 주입되지 않을 수 있습니다. 해밀턴 펌프(Hamilton pump)에 해밀턴 시린지(Hamilton syringes)를 장착할 때, 시린지 내에 가능한 최대 부피의 실리콘 오일이 유지되도록 합니다. 실험에 세 개 이상의 시린지가 필요한 경우, 본 영상에서와 같이 해밀턴 펌프에 스페이서를 배치할 수 있습니다.또는, 한 번에 최대 10개의 주사기를 고정할 수 있도록 Harvard apparatus에서 멀티 랙 업그레이드 키트를 구매할 수 있습니다. 마우스 뇌에 바이러스를 주입하려면, 먼저 동물 실험 프로토콜에 따라 적절한 진통제를 투여하십시오. 마취된 마우스를 스테레오탁스(stereo attacks)에 배치하고, 발가락 꼬집기 테스트를 통해 동물이 충분히 마취되었는지 확인하십시오.그런 다음 양 눈 사이에서 양 귀 사이까지 피부 중앙선을 따라 한 번 절개합니다. 피부를 젖혀 두개골을 노출시키고 근막을 제거합니다. 실체 현미경의 스테레오 어택에 연마된 유리 피펫을 부착합니다.bgma와 lambda가 동일한 높이로 정렬되고, 두 지점을 잇는 선이 정위 고정 장치(stereo attacks)의 Y축과 평행해질 때까지 이어바(ear bar)의 위치를 조정합니다. 유리 피펫의 끝을 bgma에 맞추어 정위 고정 장치의 영점을 잡은 다음, 피펫 끝을 주입 지점 중 한 곳의 x 및 Y 좌표에서 두개골보다 약간 위에 위치시킵니다. 치과용 드릴을 사용하여 두개골 끝부분 아래를 조심스럽게 뚫어 매우 얇은 뼈 층만 남깁니다. 30 gauge 바늘을 사용하여 정확한 x 및 y 좌표에서 해당 층의 아주 작은 조각을 부드럽게 제거하여 경막(dura mater)을 노출시킵니다.이 구멍은 인젝터 하나가 다음과 같은 방식으로 들어갈 수 있을 만큼만 충분히 커야 합니다. 각 주입 부위에 해당하는 x 및 y 좌표의 두개골에 0.25 millimeter 너비의 작은 구멍을 뚫습니다. 드릴링이 완료되면 유리 정렬 피펫을 제거하고, 정위 고정 클램프를 사용하여 맞춤형 인젝터 어레이를 스테레오택스에 부착합니다.인젝터 어레이의 각도를 정확하게 설정하기 위해, 특정 기준점에 맞춰 보정할 두 개의 외부 인젝터를 선택합니다. 인젝터 중 하나를 기준점에 맞춘 후, 해당 인젝터와 다른 인젝터 간 주입 부위의 상대적인 X 및 Y 거리를 고려합니다. 이 상대 거리만큼 인젝터 어레이를 x 및 y 방향으로 이동시킵니다. 두 번째 인젝터가 기준점과 일치하지 않는 경우, 금속 캐뉼라를 풀어서 회전시킵니다.인젝터 어레이의 각도가 올바르게 조절될 때까지 이 과정을 반복적으로 수행합니다. Hamilton 펌프의 리필 속도를 1 µL/min으로 설정하고, 시린지가 2 µL 지점 또는 그 이상이 될 때까지 실리콘 오일로 인젝터를 리필합니다. 이렇게 하면 오일 버퍼가 확보되어, 앞서 설명한 대로 시린지 뒷면에서 시스템 전체를 다시 리필할 필요 없이 Hamilton 펌프를 사용하여 오일을 앞으로 밀어냄으로써 팁의 기포나 막힘을 쉽게 제거할 수 있습니다.깨끗한 파라폼 조각을 두개골 위에 놓고 인젝터를 파라폼 위로 조심스럽게 내립니다. 각 부위에 1 µL의 바이러스를 주입하려는 경우, 분당 1 µL의 동일한 충전 속도로 각 부위당 1.5 µL의 바이러스를 파라폼 위에 피펫팅합니다. 각 인젝터에 1.2 µL의 바이러스를 충전합니다.가장 긴 인젝터의 팁을 bgma에서 영점 조절한 다음, 인젝터 어레이를 해당 인젝터의 x 및 Y 좌표로 이동시킵니다. 30 gauge 바늘로 만든 작은 구멍을 통해 인젝터 어레이를 내려 Z 깊이를 보정합니다. 각 인젝터를 통해 분당 0.1 µL 이하의 속도로 바이러스 1 µL를 주입합니다.약물이 확산될 수 있도록 주입 상태로 30분 동안 유지합니다. 30분 후, 뇌에서 인젝터 어레이를 천천히 추출합니다. 그 다음, 각 인젝터의 막힘 여부를 확인하기 위해 Hamilton 펌프를 분당 0.1 microliters의 동일한 속도로 주입하도록 설정합니다.그 후, 2 µL/min의 속도로 에탄올 2 µL를 다시 채우고 주입하여 인젝터를 세척합니다. 마지막으로, 각 Hamilton 시린지에 2 µL의 버퍼 존을 유지하기 위해 인젝터를 실리콘 오일로 다시 채웁니다. 이 그림은 방금 보여드린 3개의 캐뉼라가 포함된 인젝터 어레이를 사용하여 마우스 뇌의 분산된 부위에 바이러스 시약을 전달한 결과를 보여줍니다.이 사례에서 바이러스의 유전적 페이로드는 형광 분자인 GFP를 포함하고 있으며, 그 결과 단 한 번의 단계로 라벨링된 세포의 세 가지 형광 부피를 얻을 수 있습니다. 원칙적으로는 임의의 수의 캐뉼라를 사용하여 바이러스 주입기 어레이를 구축할 수 있습니다. 예를 들어, 여기에는 해마의 ca1 영역을 양측으로 타겟팅하기에 적합한 16개의 주입기로 구성된 주입기 어레이가 제시되어 있습니다.오늘 저희가 보여드린 프로토콜을 통해 뇌에 3차원 패턴으로 바이러스를 전달함으로써, 회로 수준의 형질전환을 효과적으로 구현할 수 있을 것입니다. 또한, 병렬 인젝터 어레이를 사용하여 모든 유체 시약을 뇌에 전달할 수 있으며, 예를 들어 머리가 고정된 상태로 행동하는 동물에서 특정 신경 회로에 도파민성 작용제를 패턴 방식으로 전달하는 것이 가능할 것입니다. 시청해 주셔서 감사하며, 여러분의 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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연구

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신경과학

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마약, 바이러스성 벡터, 또는 세포 이식 전달 Microinjections 깊은 뇌 구조의 타겟팅

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Adeno - 관련 바이러스성 벡터의 Intracranial 분사

출처: Pereira, M. et. al., 바이러스 벡터의 뇌내 주사에 의한 상주 신경교세포를 인터뉴런으로 생체 내 직접 재프로그래밍. J. Vis. 경험. (2019년)이 비디오는 형질전환 마우스의 대뇌 피질에 아데노 관련 바이러스를 정위 주사하여 Cre 의존성 뉴런 재프로그래밍 및 형광 리포터 유전자를 신경교세포에 전달하는 방법을 보여줍니다.

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여기에서, 우리는 마카크 두뇌에 있는 큰 피질 지역에 걸쳐 광유전학적 표현을 달성하기 위한 효율적이고 간단한 접근으로 피질로 바이러스 벡터의 자기 공명 (MR) 유도된 대류 강화한 납품 (CED)를 보여줍니다.

대류 온라인 MRI 이미지의 지도하에 Rhesus Macaque의 피질에 광유전학 아데노 관련 바이러스 벡터의 향상된 납품

여기에 설명된 것은 각진 관상 접근 법을 사용하여 도전적이고 도달하기 어려운 뇌 영역(공간 제한으로 인해)을 표적으로 할 수 있는 입체적 절차입니다. 이 프로토콜은 마우스와 쥐 모델에 모두 적응할 수 있으며, 바이러스 구조의 캐뉼라 이식 및 미세 주입을 포함하여 다양한 신경 과학 응용 분야에 적용 될 수있다.

다목적 신경 과학 기술을 위한 적응가능한 각진 입체 적 접근 법

이 프로토콜은 단일 신경 줄기 세포와 뇌 슬라이스의 뉴런으로 미세 주입을위한 로봇 플랫폼의 사용을 보여줍니다. 이 기술은 다재다능하며 높은 공간 해상도로 조직에서 세포를 추적하는 방법을 제공합니다.

로봇 미세 주입을 사용하여 뇌 조각의 단일 신경 줄기 세포 및 뉴런 조작

현재 시행 된 바와 같이, 인간이 아닌 영장류의 광유전학은 바이러스 벡터를 뇌에 주입해야합니다. 최적의 주입 방법은 신뢰할 수 있어야 하며 많은 응용 분야에서 사후 조직학에서 쉽고 명확하게 식별되는 임의의 깊이의 개별 부위를 표적으로 삼을 수 있어야 합니다. 이러한 특성을 갖는 주입 방법이 제시된다.

마취 및 깨어 있는 행동하는 비인간 영장류 뇌에서 광유전학을 위한 AAV 벡터 주사

Miniscope in vivo 칼슘 이미징은 자유롭게 행동하는 마우스에서 신경 역학과 미세 회로를 연구하는 강력한 기술입니다. 이 프로토콜은 미니 스코프를 사용하여 좋은 생체 내 칼슘 이미징을 달성하기 위해 뇌 수술을 수행하는 것을 설명합니다.

입체 택시 바이러스 주입 및 생체 내 심부 뇌를위한 그라디언트 인덱스 렌즈 이식

배우세요 병렬 유체 인젝터 배열을 사용하여 뇌 회로에 바이러스를 동시 전달하는 방법을. 이 기술은 광유전학적 조작을 통해 신경 회로 분석 연구의 효율성을 크게 향상시킵니다.

손상 3 - D 뇌 회로의 타겟팅 바이러스성을위한 확장 가능한 유체 인젝터 배열

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