Name: 마우스 신경 줄기 세포 엽 성의 전구 물질의 문화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 27 min 44 s
Description: 배우세요 태아 마우스 대뇌피질에서 신경전구세포를 분리하고 배양하는 방법을. 라미닌 코팅, 조직 소화, 세포 분리 기술을 통해 신경발생 연구에 활용할 수 있는 재현 가능한 실험 절차를 익히세요.

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<ol><li> 마우스 신경 엽 성의 전구 물질 (NPCs)는 E12.5 배아 대뇌 피질에서 격리되었다. </li><li> 피부와 mesenchymal 레이어는 해부 telencephalic vesicles에서 제거되었습니다. </li><li> Vesicles는 37 0.02 % EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 20 분 HBSS에 0.​​2 % BSA ° C.와 0.05 %의 트립신에 incubated되었습니다 </li><li> Trypsinization은 HBSS 1 MG / ML 대두 트립신 억제제의 동일한 볼륨 (시그마 # T6522)에 의해 중지되었습니다. </li><li> 조직 화재 - 세련된 파스퇴르 pipettes로 분쇄 여러 라운드를 사용하여 dissociated되었습니다 요약. </li><li> 세포 HBSS에 0.​​2 % BSA로 한 번 씻어 20 NG / ML EGF, 10 NG / ML FGF2 (R &amp; D 시스템 또는 Peprotech), 2 UG / ML의 헤파린 (와 미디어에 laminin - 코팅 coverslips 50,000 세포 / ML에 도금했다 시그마). </li></ol>

<ol><li>Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+indirect+roles+of+CNS+dorsal+midline+cells+in+choroid+plexus+epithelial+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation.</a> Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).</li>
<li>Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+human+neural+precursor+cells+by+laminin+and+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins.</a> J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).</li>
</ol>

CNS 개발과 줄기 세포 생물학에 대한 우리의 이해에 큰 발전이 배아 신경 줄기 세포를 수확 격리와 문화 능력에 의해 가능하게되었습니다. 이 비디오는 E12.5 마우스 대뇌 피질과 배아 신경 줄기 세포의 후속 disaggregation과 culturing의 절개를 보여줍니다. 다른 많은 다른 유사한 방법이 성공적으로 다른 수사관에 의해 고용되어있다.

<table><tbody><tr><td>직선형 아이리스 가위</td><td>도구</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-11</td><td></td></tr><tr><td>중형 가위</td><td>도구</td><td>Fine Science Tools</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 가위</td><td>도구</td><td>Fine Science Tools</td><td>15002-08</td><td></td></tr><tr><td>곡선형 핀셋</td><td>도구</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스 신경 줄기 세포 엽 성의 전구 물질의 문화

Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors

기본 신경 줄기 세포 문화는 중추 신경 시스템 개발을 기본 메커니즘을 연구하는 데 유용합니다. 줄기 세포 연구는 신경계에 대한 우리의 이해를 증가하고 우리가 현재 불치의 뇌 질병 및 부상에 대한 치료를 개발할 수 있습니다. 또한, 줄기 세포가 신경 분화 및 transdifferentiation의 메커니즘 및 유전과 환경 신호의 세부적인 연구 목적으로 줄기 세포 연구에 사용해야 특정 세포 종류에 세포의 직접 전문. 이 동영상은 배아 일 12.5 마우스 지느러미의 forebrain에서 세포를 disaggregate하는 데 사용하는 기술을 보여줍니다. 해부 절차는 자궁에서 E12.5 마우스 배아를 수확 미세 해부 포셉으로 &quot;피부&quot;를 제거하고 마지막으로 대뇌 피질의 조각 격리가 포함되어 있습니다. 절개 후, 조직은 소화​​와 기계 dissociated 수 있습니다. resuspended dissociated 세포는 다음 신경 줄기 세포의 성장을 하시더군요 &quot;줄기 세포&quot;미디어에서 양식입니다.

이 동영상은 배아 생쥐의 개발​​ 피질에서 neuroprecursors의 절연에 사용되는 방법을 설명합니다. , 자궁에서 태아를 제거하는 대뇌 피질의 조직을 해부하고, 고립 대뇌 피질을 소화에 대한 절차는 표시됩니다.

일차 신경줄기세포 배양은 중추신경계 발달의 기저 기전을 연구하는 데 유용합니다. 줄기세포 연구는 ...를 증가시킬 것입니다.

신경 전구세포의 분리, 해리 및 배양의 첫 번째 단계입니다. 먼저 24 웰 플레이트를 코팅하겠습니다. 이 플레이트는 조직 배양용 처리가 되지 않은 제품입니다.세포가 부착될 수 있도록 라미닌으로 코팅하겠습니다. 먼저 물과 폴리-D-라이신(poly-D-lysine) 혼합액으로 코팅하겠습니다. 웰당 약 450 µL를 첨가하겠습니다.이제 저는 플레이트의 절반, 여기 이 두 줄을 poly D lysine 용액으로 코팅했습니다. 그리고 여기 후드 안에서 실온으로 5분 동안 배양하겠습니다. 이제 5분 동안의 배양이 완료되었습니다.여기서 진공 흡입기를 사용하여 PDL 용액을 제거하겠습니다. 일반 진공 청소기 방식입니다. 이제 웰을 다시 약 450 µL의 물로 헹구겠습니다.물 세척 단계에서는 배양 시간이 전혀 필요 없습니다. 바로 물을 흡입하여 제거하겠습니다. 이제 라미네이트 용액을 첨가하겠습니다.Laminate를 EM EM 배지에 2 µg/mL 농도로 용해했습니다. 이제 각 웰에 laminate 용액 450 µL를 추가하겠습니다. 현재는 플라스틱을 코팅하고 있지만, 이 웰들에 코팅된 커버슬립을 사용할 수도 있습니다.세포를 조직 배양 배양기 내 37°C에서 최소 4시간 동안 배양하겠습니다. 45도 각도로 굽은 미세 핀셋 두 개와 마찬가지로 45도 각도로 굽은 미세 가위가 준비되어 있습니다.자궁의 초기 해부를 위한 뭉툭한 포셉과 암컷의 절개를 위한 대형 가위가 필요합니다. 이제 CD1 정상 암컷을 사용하겠습니다. 이 개체는 배아 발달 12.5일 차의 배아를 임신한 상태입니다.이미 CO2 질식사와 경추 탈구를 통해 안락사를 진행하였습니다. 이제 자궁과 그 안에 있는 배아를 적출하겠습니다. 먼저 70% ethanol을 사용하여 복부 부위를 소독해야 합니다.큰 포셉으로 복부 중앙과 하단부를 잡고 한 번 절개한 뒤, 기구를 내려놓고 단순히 피부를 찢어 복부를 다시 노출시키며 동일한 부위를 잡습니다. 중앙에서 다시 한 번 절개하고 가로 방향으로 절개하여 암컷의 체강을 엽니다. 이제 배아들이 노출됩니다.여기 배아로 인해 부풀어 오른 자궁이 있습니다. 난소 바로 아래쪽을 첫 절개하고, 지방을 제거하며 위쪽으로 잡아당깁니다. 해당 부위를 아래로 눕히고 배아 사이의 부분만 잡습니다.배아의 윗부분을 잡는 것은 조직에 손상을 줄 수 있음이 분명합니다. 이는 자명한 사실입니다. 배아들은 마치 포도 송이처럼 보이기 때문입니다.다시 포도 사이를 잡고,

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

여기 마우스 표피 신경 능선의 줄기 세포를 (에피 NCSC) 분리하기 위해 방법을 보여줍니다. 기술과 관련된 마이크로 해부, 수염 모공 볼록한 분리하고 조직 문화에 그것을 placeing. 사일 - 에피 NCSC 3 이내 하층에 팽창의 explants에서 이민을 시작합니다.

마우스 표피 신경 크레스트 줄기 세포 (에피 NCSC) 문화

이 비디오 프로토콜은 배아 일 14 마우스 뇌의 ganglionic eminences에서 신경 줄기 세포의 분리 및 확장에 대한 neurosphere 분석의 응용 프로그램을 보여줍니다.

Neurosphere 분석을 사용하여 마우스 배아 신경 줄기 세포 문화 구축

신경 튜브의 배아 신경 능선의 분리가의 사용을...

배아 Murine 신경 튜브에서 신경 크레스트 세포의 분리 및 문화

이 비디오는 성체 쥐의 뇌에서 외측 심실 벽을 분리하고 효소 조직 해리를 수행하여 단일 세포를 얻기 위한 자세한 프로토콜을 보여줍니다. 그런 다음 이러한 세포는 신경 줄기 세포의 증식을 선택적으로 강화하고 희소돌기아교세포와 성상세포의 공동 배양으로의 분화를 촉진하는 특정 배양 조건에 적용됩니다.

성체 마우스 신경 줄기세포에서 혼합 희소돌기아교세포와 성상교세포 배양 획득

이 동영상은 마우스 배아 줄기 세포(mESC)에서 신경전구세포(NPC)를 체외에서 생성하는 방법을 보여줍니다. mESC는 현탁액에서 배양되어 배아체(EB)를 형성한 다음, 부착 배양에서 레티노산 처리를 통해 NPC로 분화하도록 유도됩니다.

마우스 배아 줄기 세포에서 신경 전구 세포를 생성하는 기술

여기서 우리는 subventricular 영역과 개인 성인 쥐의 치아 이랑 (dentate gyrus)에서, 부착 단층 또는 neurosphere를 하나로서, 신경 전구 세포 배양의 동시 발생에 대한 자세한 프로토콜을 설명합니다.

하나의 마우스, 두 문화 : 분리 및 성인 신경의 문화가 개인 마우스의 두 신경 인성 영역에서 줄기 세포

이 프로토콜은 무혈청 단층 방법을 사용하여 배아 줄기 세포에서 신경 전구 세포를 생성하는 방법을 자세히 설명합니다. 이러한 전구 세포는 성숙한 신경 세포 유형을 유도하거나 신경 사양 과정을 연구하는 데 사용할 수 있으며 복합 스크리닝을 위한 멀티웰 형식 확장에 적합합니다.

혈청이없는 단층 문화 마우스 배아 줄기 세포의 신경 분화

성체 신경 줄기세포(aNSCs) 확장을 위한 배양 시스템을 구축하면 치료를 위한 aNSC를 검사하고 적용할 수 있습니다. 굳은살하영역(subcallosal zone, SCZ)은 최근 성체 마우스에서 새로운 신경아세포 형성 영역으로 인식되고 있습니다. 여기에서는 SCZ-aNSC의 분리, 확장 및 분화 방법에 대해 설명합니다.

마우스 뇌량 밑 영역에서의 분리 및 성인 신경 줄기 세포의 문화

여기, 전자13 마우스 배아 절 예 하에서 신경 줄기 세포의 분리에 대 한 새로운 microsurgical 기술을 소개합니다.

절연 및 마우스 배아 신경 줄기 세포의 문화

우리는 매달려 드롭 방법을 사용하여 신경 세포로 마우스 배아 줄기 세포의 체외 분화에 대한 절차를 설명합니다. 또한 RT-qPCR, 면역형광, RNA-seq 및 유동 세포종을 통해 포괄적인 현상 분석을 수행합니다.

마우스 배아 줄기 세포에서 신경 전조및 뉴런의 분화 및 특성화

배우세요 태아 마우스 대뇌피질에서 신경전구세포를 분리하고 배양하는 방법을. 라미닌 코팅, 조직 소화, 세포 분리 기술을 통해 신경발생 연구에 활용할 수 있는 재현 가능한 실험 절차를 익히세요.

마우스 신경 줄기 세포 엽 성의 전구 물질의 문화

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