Name: 애벌레의 모니터링 심장 기능 Drosophila melanogaster 생리 연구 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-16T17:02:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: 배우세요 Drosophila melanogaster 애벌레 심장 기능 모니터링 방법을. 완전 및 해부 표본 준비, 심박수 측정, 세포내·외 전위 기록 기술을 통해 심장 생리학 및 이온 채널 연구에 활용하세요.

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생물의 도서관, 켄터키 영 연구자 및 대학 교육 유레카의 G.의 리블 장학금 기금에 의해 제공! 오피스 (KY의 Univ.).

<ol><li>Ashton, K., Wagoner, A. P., Carrillo, R., Gibson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+trait+loci+for+the+monoamine-related+traits+heart+rate+and+headless+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Quantitative trait loci for the monoamine-related traits heart rate and headless behavior in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 157, 283-294 (2001).</li>
<li>Azpiazu, N., Frasch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tinman+and+Bagpipe%3A+Two+homeo+box+genes+that+determine+cell+fates+in+the+dorsal+mesoderm+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Tinman and Bagpipe: Two homeo box genes that determine cell fates in the dorsal mesoderm of Drosophila.</a> Genes & Development. 7, 1325-1340 (1993).</li>
<li>Badre, N. H., Martin, M. E., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physiological+and+behavioral+effects+of+carbon+dioxide+on+Drosophila+melanogaster+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Mol+Integr+Physiol%22%5BJournal%5D)">The physiological and behavioral effects of carbon dioxide on Drosophila melanogaster larvae.</a> Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 140, 363-376 (2005).</li>
<li>Baker, J. D., McNabb, S. L., Truman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hormonal+coordination+of+behavior+and+physiology+at+adult+ecdysis+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">The hormonal coordination of behavior and physiology at adult ecdysis in Drosophila melanogaster.</a> J. Exp. Biol. 202, 3037-3048 (1999).</li>
<li>Bier, E., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+an+emerging+model+for+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Drosophila, an emerging model for cardiac disease.</a> Gene. 342, 1-11 (2004).</li>
<li>Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gene+tinman+is+required+for+specification+of+the+heart+and+visceral+muscles+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The gene tinman is required for specification of the heart and visceral muscles in Drosophila.</a> Development. 118, 719-729 (1993).</li>
<li>Bodmer, R., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+homeobox-containing+gene%2C+msh-2%2C+is+transiently+expressed+early+during+mesoderm+formation+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A new homeobox-containing gene, msh-2, is transiently expressed early during mesoderm formation of Drosophila.</a> Development. 110, 661-669 (1990).</li>
<li>Cooper, A. S., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+activity+of+Drosophila+larvae%3A+Impedance+%26+video+microscopy+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila+Information+Service%22%5BJournal%5D)">Monitoring activity of Drosophila larvae: Impedance & video microscopy measures.</a> Drosophila Information Service. 87, 85-87 (2004).</li>
<li>Dasari, S., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+influence+of+serotonin+on+the+larval+heart+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%22%5BJournal%5D)">Direct influence of serotonin on the larval heart of Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Physiol. B. 176, 349-357 (2006).</li>
<li>Dasari, S., Viele, K., Turner, A. C., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+p-CPA+and+MDMA+on+physiology%2C+development+and+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22European+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Influence of p-CPA and MDMA on physiology, development and behavior in Drosophila melanogaster.</a> European J. Neurosci. 26, 424-438 (2007).</li>
<li>Dowse, H., Ringo, J., Power, J., Johnson, E., Kinney, K., White, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+congenital+heart+defect+in+Drosophila+caused+by+an+action-potential+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">A congenital heart defect in Drosophila caused by an action-potential mutation.</a> J. Neurogenetics. 10, 153-168 (1995).</li>
<li>Dulcis, D., Levine, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamatergic+innervation+of+the+heart+initiates+retrograde+contractions+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glutamatergic innervation of the heart initiates retrograde contractions in adult Drosophila melanogaster.</a> J. Neurosci. 25, 271-280 (2005).</li>
<li>Feng, Y., Ueda, A., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+minimal+hemolymph-like+solution%2C+HL3.1%2C+for+physiological+recordings+at+the+neuromuscular+junctions+of+normal+and+mutant+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae.</a> J. Neurogenetics. 18, 377-402 (2004).</li>
<li>Ganetzky, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+ion+channel+dysfunction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of ion channel dysfunction in Drosophila.</a> Kidney International. 3, 766-771 (2000).</li>
<li>GG, G. u <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+analysis+of+heartbeat+in%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila.+J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Pharmacological analysis of heartbeat in.</a> Drosophila. J. Neurobiol. 28, 269-280 (1995).</li>
<li>He, B., Adler, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+in+the+development+of+the+Drosophila+arista%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms in the development of the Drosophila arista.</a> Mechanisms of Development. 104, 69-78 (2001).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+Drosophila+heartbeat+by+neurotransmitters%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%22%5BJournal%5D)">Modulation of Drosophila heartbeat by neurotransmitters.</a> J. Comp. Physiol. B. 167, 89-97 (1997).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Bray, N., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+pharmacological+identification+of+ion+channels+central+to+the+Drosophila+cardiac+pacemaker%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">Genetic and pharmacological identification of ion channels central to the Drosophila cardiac pacemaker.</a> J. Neurogenetics. 12, 1-24 (1998).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Native+and+heterologous+neuropeptides+are+cardioactive+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Native and heterologous neuropeptides are cardioactive in Drosophila melanogaster.</a> J. Insect Physiol. 1, 1229-1236 (2000).</li>
<li>Johnson, E., Sherry, T., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+the+cardiac+pacemaker+of+Drosophila%3A+cellular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%2C+Biochem.%2C+Systemic%2C+Environmental+Physiol%22%5BJournal%5D)">Modulation of the cardiac pacemaker of Drosophila: cellular mechanisms.</a> J. Comp. Physiol. B, Biochem., Systemic, Environmental Physiol. 172, 227-236 (2002).</li>
<li>Lewis, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+standard+food+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Drosophila+Inform.+Serv%22%5BJournal%5D)">A new standard food medium.</a> Drosophila Inform. Serv. 34, 117-117 (1960).</li>
<li>Miller, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+circulation+in+insects%5BTitle%5D)+AND+%22General+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Control of circulation in insects.</a> General Pharmacol. 29, 23-38 (1997).</li>
<li>Molina, M. R., Cripps, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ostia%2C+the+inflow+tracts+of+the+Drosophila+heart%2C+develop+from+a+genetically+distinct+subset+of+cardial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Ostia, the inflow tracts of the Drosophila heart, develop from a genetically distinct subset of cardial cells.</a> Mechanisms of Development. 118, 51-59 (2001).</li>
<li>Muller, K. J., Nicholls, J. G., Stent, G. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMuller%2C+KJ+%22Neurobiology+of+the+Leech%22">Neurobiology of the Leech</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. 254-254 (1981).</li>
<li>Nichols, R., Kaminski, S., Walling, E., Zornik, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulating+the+activity+of+a+cardioacceleratory+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Regulating the activity of a cardioacceleratory peptide.</a> Peptides. 20, 1153-1158 (1999).</li>
<li>Ocorr, K., Akasaka, T., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+cardiac+disease+model+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Ageing+and+Development%22%5BJournal%5D)">Age-related cardiac disease model of Drosophila.</a> Mechanisms of Ageing and Development. 128, 112-116 (2007a).</li>
<li>Ocorr, K. A., Crawley, T., Gibson, G., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+variation+for+cardiac+dysfunction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Genetic variation for cardiac dysfunction in Drosophila.</a> PLoS ONE. 2, e601-e601 (2007).</li>
<li>Papaefthmiou, C., Theophilidis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+method+for+recording+the+electrical+activity+of+the+isolated+heart+of+the+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+%26+Developmental+Biol.+Animal%22%5BJournal%5D)">An in vitro method for recording the electrical activity of the isolated heart of the adult Drosophila melanogaster.</a> In Vitro Cellular & Developmental Biol. Animal. 37, 445-449 (2001).</li>
<li>Peron, S., Zordan, M. A., Magnabosco, A., Reggiani, C., Megighian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+action+potential+to+contraction%3A+Neural+control+and+excitation-contraction+coupling+in+larval+muscles+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.Physiol.+A%3A+Molecular+%26+Integrative+Physiol%22%5BJournal%5D)">From action potential to contraction: Neural control and excitation-contraction coupling in larval muscles of Drosophila.</a> Comp. Biochem.Physiol. A: Molecular & Integrative Physiol. 154, 173-183 (2009).</li>
<li>Ponzielli, R., Astier, M., Chartier, A., Gallet, A., Therond, P., Semeriva, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+tube+patterning+in+Drosophila+requires+integration+of+axial+and+segmental+information+provided+by+the+Bithorax+Complex+genes+and+hedgehog+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Develop%22%5BJournal%5D)">Heart tube patterning in Drosophila requires integration of axial and segmental information provided by the Bithorax Complex genes and hedgehog signaling.</a> Develop. 129, 4509-4521 (2002).</li>
<li>Sl ma, K., Farkas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heartbeat+patterns+during+the+postembryonic+development+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Heartbeat patterns during the postembryonic development of Drosophila melanogaster.</a> J. Insect Physiol. 51, 489-503 (2005).</li>
<li>St hmer, W., Roberts, W. S., Almers, W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSt+hmer%2C+W+%22Single+channel+recordings%22">Single channel recordings</a>. Sakmann, B., Neher, E. The loose patch clamp, Plenum Press. New York. 123-132 (1983).</li>
<li>Wessells, R. J., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+assays+for+heart+function+mutants+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Screening assays for heart function mutants in Drosophila.</a> Biotechniques. 37, 58-66 (2004).</li>
<li>Zornik, E., Paisley, K., Nichols, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+transmitters+and+a+peptide+modulate+Drosophila+heart+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Neural transmitters and a peptide modulate Drosophila heart rate.</a> Peptides. 20, 45-51 (1999).</li>
</ol>

<ol><li> 해부 도구 : 좋아요 # 5 핀셋과 (모든 파인 과학 도구 (미국), 주식 회사, 373 - G 빈티지 파크 드라이브, 포스터 시티, CA 94404-1139에서 얻은) 고급 가위 </li><li> 해부 및 계산 심장 박동을위한 줌 기능과 함께 현미경을 해부. 심장의 자극에 초점 이것은뿐만 아니라 필요합니다. </li><li> 세포외 및 세포내 레코딩을위한 직립 목표 (4 x와 20X)와 복합 현미경이 사용됩니다. 표준 세포 증폭기와 컴퓨터에 라인 녹음에 대해서도 A / D 보드. 전기 신호는 PowerLab/4s 인터페이스 (ADInstruments, 호주)에 온라인으로 기록됩니다. 우리는 차트 또는 범위 이름을 ADInstruments에서 표준 소프트웨어를 사용합니다. </li><li> 화학 물질 : 모든 생리 화학 물질 시그마 화학 회사 (세인트 루이스, MO)에서 얻을 수 있습니다. </li><li> 세포내 녹음을 위해 우리는 유리 모세관 튜브 (FHC, 브런즈윅, ME, 04011, 미국의 카탈로그 # 30-31-0)과 초점 macropatch 녹음 그리고 우리가 Kimax - 51을 사용하여 자극 전극, 킴블 제품 아트를 사용합니다. 100mm 번호 34502, ID 0.8 - 1.1mm, 길이. 세포내 전극은 20-30 mOhm의 저항이 있어야합니다. macropatch 전극은 좋은 팁이 전극 풀러에서 만든 후 유리의 끝을 위반하여 구성되어 있습니다. 깨진 해제 팁 직경은 20μM에 대한 깨끗한 수직 휴식이 필요합니다. 팁 다음 초점 세포 녹음 10μM에 대한 내경을 연마 열 수 있습니다. 마음을 드라이브에 자극 전극을 위해 우리는 직경 20-50 μm의 약의 마지막 팁을 사용합니다. 전극의 샤프트는 그것이 점진적으로 구부 러와 함께 약 45 도로 구부 원인 가열 요소를 통해 실행됩니다. 이것은 준비하는 또 다른 45도에 대한 생산되는 마이크로 조작하는 사람과 각도로 심장 관을 통해 평면 또는 수직 전극 루멘을 생산하고 있습니다. </li></ol>

애벌레의 모니터링 심장​​ 기능 drosophila melanogaster 생리 연구

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

우리는 애벌레에서 심장 기능을 기록하는 다양한 방법을 제시<em&gt; Drosophila</em&gt;. 접근 방식은 심장 박동이 억제 및 억제 전체 애벌레에서 측정 수 있습니다. 심장 주변의 환경을 직접 제어를위한 또 다른 방법은 원하는 화합물의 마음을 목욕하기 위해 해부 애벌레와 내장 제거를 사용합니다. 노출 심장도 막 잠재력이 myocytes에 의해 및 심장 관을 따라 전기 전도에 대해 생성된 이온 전류의 통찰력을 줄 수있는 모니터링할 수 있습니다. 이러한 방식은 논의 이후의 실험을위한 다양한 장점과 단점이 있습니다. 애벌레 심장 준비가 외에 추가 모델을 제공합니다<em&gt; Drosophila</em&gt; 골격 NMJ는 세포 기능에 세포 내 칼슘 조절의 역할을 조사합니다. 더 다양한 수종의 myocytes의 행동 잠재력을 형성 기본 이온 전류에 대한 학습, 하나는 포유류의 다양한 질환에 대한 책임 특정 유전자에 관련된 알려진 이온 장애에 대한 핸들을 얻을 수 있도록 노력하겠습니다하실 수 있습니다.

우리의 유충에서 심장 기능을 모니터링하는 여러 가지 방법을 제시<em&gt; Drosophila</em&gt; 간격 분기점, 이온 채널 돌연변이, 맥박 조정기 활동의 변조 및 약리 연구의 기능을 다루는 질문을 평가하십시오.

애벌레의 모니터링 심장​​ 기능 Drosophila melanogaster 생리 연구

본 연구에서는 초파리(Drosophila) 유충의 심장 기능을 기록하는 다양한 방법을 제시합니다. 이러한 접근 방식을 통해 구속되지 않은 상태 및 ... 에서의 심박수를 측정할 수 있습니다.

초파리는 심장의 발달과 기능 및 그 기저에 있는 박동 조율 활동을 연구하기에 유전적으로 매우 적합한 모델입니다. 본 절차에서는 온전한 상태 및 해부된 상태의 유충 표본을 제작하는 방법과 심박수를 모니터링하는 방법을 보여줍니다. 해부된 표본을 이용하면 세포 외 또는 세포 내 전위를 기록하여 이온 통로 기능을 더욱 상세히 분석할 수 있습니다.안녕하세요, 저는 켄터키 대학교 생물학과 교수인 Robin Cooper입니다. 오늘 저의 학생들인 Ann Cooper, Kyla Ryman, Matt Ward, Easter Boku가 Drosophila 유충의 심박수를 모니터링하는 다양한 절차를 보여드릴 것입니다. 다음과 같은 구속하지 않는 방식의 방법은 유충을 하나의 초점 평면 내에서 시각화하기 때문에 ant farm이라고 불립니다.유충을 가장 잘 관찰하려면 2x 대물렌즈와 0.5x 경통 렌즈가 장착된 해부 현미경을 사용하여 1 cm x 0.5 cm 직사각형 영역에서 최적의 공간 해상도와 배율을 확보하십시오. 사진과 동영상은 접안렌즈 마운트에 장착된 카메라를 통해 기록할 수 있습니다. 이 방법을 시작하려면 두 장의 유리 슬라이드 사이에 먹이를 얇게 펴 바르고 그 사이에 유충을 끼워 넣으십시오.슬라이드는 네 면 모두에 플라스틱 스페이서를 배치하여 1~1.5mm 간격으로 유지합니다. 유충의 머리가 아래쪽을 향하도록 준비물을 20~45도 각도로 몇 분 동안 기울입니다. 심장 박동을 관찰하기 위해 심장이나 두 기관의 대비가 가장 잘 보이도록 현미경 거울을 조정합니다.글루 방법은 유동성 유충을 유리 슬라이드에 고정하기 위한 영구 마운트 방식입니다. 글루 방법을 시작하려면, 깨끗한 커버슬립을 유리 슬라이드 위에 놓습니다. 커버슬립의 한쪽 모서리에 순간접착제를 소량 떨어뜨립니다.다음으로, 유충을 물로 헹굽니다. 과도한 먹이를 제거하기 위해 티슈나 종이 타월의 모서리를 이용하여 액체를 흡수시킵니다. 유충이 충분히 헹궈지면, 깨끗한 핀셋으로 조심스럽게 집어 현미경 아래 슬라이드 글라스의 커버 슬립이 없는 위치에 놓으며, 유충의 배 부분이 아래로 향하도록 배치합니다.위 부분에는 미세한 검은색 털과 함께 희미한 가로 홈이 나 있습니다. 유충의 등 부분이 위를 향해야 하며, 기관(trachea)에 해당하는 두 개의 레이싱 스트라이프 모양의 줄무늬가 특징입니다. 접착제 전용 핀셋을 사용하여 슬라이드 끝에 맺힌 접착제를 소량 묻힌 뒤, 반대편 모서리에 배치합니다.핀셋 끝부분을 덮을 정도로 아주 적은 양만 사용하십시오. 동물을 집어 올려 배 부분이 아래로 향하게 하여 검은색 입구의 접착제 위에 고정시킵니다.갈고리는 커버슬립의 가장자리나 그 근처에 위치해야 하며, 입 갈고리와 갈색 나선형 구조가 확인되어야 합니다. 접착제에 닿지 않도록 주의하십시오. 유충을 가볍게 눌러 평평하게 폅니다.시험 물질을 처리하려면 시린지를 사용하여 유충의 머리 근처에 작은 방울 형태로 분주하는 것이 가장 좋습니다. 나선형 구조가 1분 동안 박동하는 횟수를 세어 심박수를 관찰하십시오. 장시간 관찰이 필요한 경우, 유충에게 제자리에서 먹이를 공급하고 수분을 공급하여 탈수를 방지할 수 있습니다. 현미경 하에서 사용 가능한 해부판을 만들려면, 메스로 마그네틱 테이프 조각 중앙에 지름 2cm의 구멍을 뚫은 후 이를 유리 슬라이드에 부착하십시오.더 쉽게 고정하기 위해 굽힌 뒤 클립에 접착제로 붙인 해부 핀을 사용하십시오. 해부 과정에서 온전한 3단계 별 모양 유충을 해부 접시 위에 놓습니다. 등 쪽이 위로 향하게 하면 큐티클을 통해 기관이 보일 것입니다.입갈고리 양측에 핀 두 개를 꽂고, 나선형 구조 양측에 추가로 핀 두 개를 꽂습니다. 다음으로, 유충이 건조해지지 않도록 식염수를 추가합니다. 그런 다음 꼬리 끝부분을 따라 가로로 절개하고, 이어서 나선형 구조 옆을 따라 동물의 머리 방향으로 세로 절개를 진행합니다.등쪽 핀 하나를 들어 올려 큐티클 아래에 겁니다. 핀을 사용하여 벌려 줍니다. 체강을 엽니다.나머지 세 개의 핀으로도 동일하게 반복합니다. 동물을 핀으로 고정하여 개방한 후, 기관이나 심장이 손상되지 않도록 주의하며 내장을 제거합니다. 뇌와 일부 지방체를 포함한 일부 구조물은 심장에 연결되어 있어, 이를 제거할 때 심장이 손상될 수 있습니다.박리 후 준비물을 HL three 식염수 배스에서 3~5분 동안 안정시킵니다. 약물을 심장에 직접 투여하면서 이 준비물을 이용해 세포 내 기록 및 필드 기록을 수행합니다. 이 박리 단계에 소요되는 총 시간은 3~6분입니다. 전기적 페이싱을 수행하려면 먼저 초점 전극을 제작해야 합니다. 유리 전극을 가열 요소 위로 통과시켜 화염 연마(fire polish)를 하고 약 45도 각도로 서서히 구부려 초점 전극을 만듭니다. 실온의 HL three 식염수가 채워진 초점 전극을 팁이 아래를 향하도록 조절기에 장착합니다.자극기 와이어가 전극 내부의 식염수에 닿아 있는지 확인하고, 자극기의 전원이 꺼져 있는지 확인하십시오. 새로 해부한 심장 표본을 현미경 위에 고정합니다. 접지 와이어를 식염수에 넣으십시오.핀을 건드리거나 표본을 흐트러뜨리지 않도록 주의하십시오. 조작기를 사용하여 전극을 식염수 속으로 내리는 동안 전극에 계속 집중하십시오. 식염수 내에 진입하면, 루멘(lumen) 부분이 심장에 평평하게 밀착되어 가볍게 닿도록 전극 팁의 위치를 잡으십시오.전극을 배치한 후, 자극기의 주파수를 2 Hz로 설정하고 전압을 최저 설정값으로 맞춥니다. 자극기를 켭니다. 주파수를 약 3 Hz로 조정하고, 심박수가 자극기의 리듬과 일치하도록 전압을 천천히 높입니다.이제 자극기를 통해 리듬을 조절할 수 있습니다. 화합물을 첨가하여 수축이나 전기 전도에 영향을 미치는지 확인할 수 있습니다. 전위 기록(field potential recordings)을 수행하려면, 매크로 패치 기록 전극을 배양액으로 채운 후 복합 현미경의 조작기에 장착하십시오.전극을 증폭기 및 기록 장치에 연결합니다. 조작기를 사용하여 현미경에 고정된 해부 표본의 심장 위로 전극의 루멘을 내립니다. 전극 팁으로 심장을 매우 가볍게 터치합니다.이제 심장의 다른 영역에서 전위(field potentials)를 기록하기 위해 필드 기록을 수행할 수 있습니다. 조작기(manipulator)를 사용하여 전극의 팁을 부드럽게 들어 올려 새로운 영역으로 이동시킨 다음, 다시 팁 전위 기록을 수행하십시오. 심장 내 전기 신호의 빈도와 지속 시간을 정밀하게 모니터링하여 유생 심근세포의 막전위(transmembrane potentials)를 측정하십시오.먼저, 3 M KCl로 채워진 날카로운 전극의 루멘이 수직에서 약 45도 각도로 심장에 평평하게 밀착되었는지 확인하십시오. 적절하게 위치가 잡히면, 전극 팁으로 심장을 부드럽게 터치한 다음 팁을 세포 안으로 톡 쳐서 삽입하십시오. 전극이 부러지지 않았다면 다시 사용할 수 있습니다.세포 내 기록을 통해 활동 전위의 이온적 기초와 전위의 특징적인 형태를 측정함으로써, 이온 채널 돌연변이나 채널 조절제의 영향을 조사할 수 있습니다. 지금까지 심장 기록 방법과 세포 내 전위 및 전장 전위를 측정하는 방법을 설명해 드렸습니다. 이러한 기술을 활용하여 심장의 변화뿐만 아니라 약물학적 조작 및 유전자 변형을 관찰할 수 있습니다.이 절차를 수행할 때, 심장에 부착된 관련 구조물을 잡아당기지 않도록 주의하고 포컬 전극으로 너무 세게 누르지 않는 것이 중요합니다. 또한 접착제 방법을 사용할 때는 입이나 구형 부분이 붙어 닫히지 않도록 주의하십시오. 이것으로 모두 끝났습니다.시청해 주셔서 감사드리며, 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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이 보고서는 TriKinetics Drosophila Activity Monitor를 사용하여 초파리 유충 활동을 측정하는 방법을 설명합니다. 이 장치는 적외선 빔을 사용하여 최대 16 마리의 개별 동물의 움직임을 감지합니다. 데이터를 분석하여 분석 챔버 내 동물의 비율 및 위치를 포함한 모션 매개변수를 나타낼 수 있습니다.

에서 애벌레 활동의 측정<em&gt; 초파리</em&gt; 활동 모니터

여기에서는 다양한 발달 단계에서 초파리를 준비하고 맞춤형 광학 간섭 현미경(OCM) 시스템을 사용하여 초파리 심장 박동의 종단 광학 이미징을 수행하기 위한 실험 프로토콜에 대해 설명합니다. 심장의 형태학적 및 역학적 변화는 OCM 이미지에서 심장의 구조적 및 기능적 매개변수를 분석하여 정량적으로 특성화할 수 있습니다.

초파리 준비 및 빛 간섭 현미경을 사용하여 생체 내에서 심장 기능의 세로 이미징 (OCM)

프로토콜 정상적인 대기 산소 수준에서 산소를 발생 하는 초파리 melanogaster 애벌레를 식별 하는 간단한 분석 결과를 설명 합니다. 이 프로토콜에 hypoxic 애벌레를를 겹치는 고기 느린 성장 부진 등을 보여 주는 다른 돌연변이 구별 될 수 있습니다.

초파리 melanogaster 애벌레에서 Hypoxia의 검출에 대 한 분석 결과 내/터널링

이 프로토콜 비용 효율적이 고 편리한 약리학 대리인, 신경 단백질의 유전자 돌연변이의 테스트를 가능 하 게 초파리 melanogaster 중앙 신경 시스템의 하강 전기 활동을 기록 하는 방법을 설명 합니다. 또는 미개척된 생리 적인 통로의 역할입니다.

제 3-탈피 초파리 Melanogaster 의 중앙 신 경계 활동의 electrophysiological 녹음

본 프로토콜은 OCT 영상화 및 광유전학적 심장 페이싱을 위해 심장에서 eNpHR2.0 또는 ReaChR 옵신을 발현하는 초파리 멜라노가스터의 생성을 기술한다. 초파리 OCT 영상 및 심장 박동 조절에 대한 자세한 지침, 다른 발달 단계에서 살아있는 동물에서 회복 가능한 심장 마비, 서맥 및 빈맥의 시뮬레이션을 포함하여보고됩니다.

심장 기능의 영상 및 광유전학적 제어를 위한 초파리 멜라노가스터 모델 개발

이 프로토콜은 전통적인 포유류 모델에 대한 대안으로 운동 기능 장애의 정량화를 통해 초파리의 신경 독성을 평가하기 위한 고처리량, 비용 효율적인 방법을 제시합니다. 민감하고 재현 가능하며 윤리적으로 유리한 모델을 사용하여 제약 화합물, 환경 제제 또는 유전자 변형의 신경독성 영향을 평가하는 것을 목표로 합니다.

신경독성에 대한 판독으로서의 Drosophila melanogaster 의 운동 기능 장애에 대한 행동 분석

이 프로토콜은 Drosophila melanogaster에서 스트레스로 인한 행동 변화를 평가하는 틀을 제공합니다. 상호 보완적인 분석법을 결합하면 개별 파리의 활동, 탐구, 의사결정 능력을 정량화할 수 있습니다. 이 접근법은 유연하며 스트레스 생물학, 대사, 신경행동 기능을 조사하는 다양한 연구에 적용할 수 있습니다.

초파리 멜라노가스터에서 스트레스 유발 우울과 유사 상태의 다중 행동 표현형 분석

배우세요 Drosophila melanogaster 애벌레 심장 기능 모니터링 방법을. 완전 및 해부 표본 준비, 심박수 측정, 세포내·외 전위 기록 기술을 통해 심장 생리학 및 이온 채널 연구에 활용하세요.

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