Name: 에서 독소 유도와 단백질 추출 Fusarium 종. 문화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-02-16T15:05:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: 배우세요 Fusarium 종에서 독소 유도 및 단백질 추출 방법을. SDS와 TCA를 활용한 표준화된 프로토콜로 프로테오믹스 연구의 재현성을 높이고 실험 편향을 최소화하여 고품질 단백질 샘플을 확보합니다.

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우리가 그들의 기술 출자를위한 Servane Contal와 보리스 Untereiner 감사드립니다. 우리는 FNR &quot;FUTOX&quot;프로젝트의 지원을 인정합니다.

프로토콜은 완성 16 일 필요합니다. 기간은 그림 1에 자세히 있습니다. 버퍼 준비 세부 <ul><li> 용해 완충액 (샘플 당 3mL)를 준비. </li><li> 세탁 버퍼 (샘플 당 50mL)의 준비. 이 버퍼는 미리 냉장 및 저장 -20 ° C에서 냉동실에 대한 분석까지 전체 절차를 수행하는 동안 얼음에 보관해야합니다. </li><li> 강수량 버퍼 (샘플 당 20mL)의 준비. 전체 절차를 수행하는 동안 필요한 얼음에 보관 때까지 버퍼는 냉동실에 -20 ° C에서 사전 냉장 및 저장해야합니다. </li><li> 작품은 우선적으로 4 추위 챔버로 진행되어야 ° C. </li></ul> 곰팡이 종 proteomic 분석에 사용되는 세 가지 변종들은 형태학의 기능과 번역 - 연신율 팩터 알파 - 1 분석을 바탕으로 Fusarium의 graminearum로 분류되었다 (오도넬 외., 1998) 이 변종은 CRP - 가브리엘 Lippmann 컬렉션에 속한 유지와에 저장된 - 80 ° C 15 %의 글리세롤. mycelia의 준비 곰팡이는 25 ° C 빛과 어둠의 기간을 번갈아 가며 각 12 시간에서 4 일간 V8에서 재배되었다. 문화는 살균 칼날과 이러한 문화의 조각 독소 - 유도 미디어 100 ML를 포함 250 ML Erlenmeyer flasks의를 예방하는 데 사용되었다를 사용하여 조각난되었습니다. Mycelia 10 일 후에 수확되었고 살균 필터와 문화를 필터링하여 중간에서 분리되었다. Mycelia는 중간 잔류물 및 기타 화합물을 제거하는 살균 물을 3 번 씻어했다. 그러면 즉시 액체 질소를 추가하여 세포를 동결하고 -80에서 샘플을 보관 ° C. 단백질 추출에 대한 일반적인 설명 단백질 샘플은 그림 3A와 3B에서 설명한 방법을 사용하여 추출되었다. Fusarium 샘플은 액화 질소에 지상되었고 분말 10 ML 테플론 튜브에 수집되었다. 샘플은 다음, 용해 버퍼로 30 분 incubated 10 분 끓인하고, 실온 (15 분 1만2천그램)에 2 번 centrifuged했다. supernatants는 하루 강수량 버퍼와 -20 ° C에서 수집된와 incubated했다. 4 원심 분리 후 ° C 3만그램 45 분 간은 시켰던 단백질의 알약이 DTT를 포함하는 차가운 아세톤과 함께 3 번 씻어했다. 마지막으로, 알약은 공기 건조되었으며 단백질은 8 산도 조정, 라벨 버퍼에 resolubilized되었습니다. 30 ML의 하위 샘플은 총 단백질 양을 정함 위해 제거된 나머지 뜨는은 단백질 전기 영동까지 -20 ° C에서 보관되었다. <img src="/files/ftp_upload/1690/1690fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 절차의 타임 라인. <img src="/files/ftp_upload/1690/1690fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 여러 연산자 샘플 처리를위한 제도. <img src="/files/ftp_upload/1690/1690fig3atmb.jpg" alt="그림 3a" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3A"> 그림 3A. <img src="/files/ftp_upload/1690/1690fig3btmb.jpg" alt="그림 3b" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3B"> 그림 3B는하시기 바랍니다. <a href="/files/ftp_upload/1690/1690fig3a.jpg">여기를 클릭하십시오</a> 더 큰 그림 3A 버전, 또는 ​​볼 수 <a href="/files/ftp_upload/1690/1690fig3b.jpg">는 여기에</a> 그림 3B의 더 큰 버전을 위해. 그림 3A - B 단백질 추출 절차 흐름 차트 (A : 첫날, B : 두번째 날).. <img src="/files/ftp_upload/1690/1690fig4tmb.jpg" alt="그림 4" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 4"> 그림 4. 단백질 추출물 1D 그림. 단백질은 용암 퍼플 물들일 있던 젤의 끝에 파란색 완벽하게 마이 그 레이션까지 실행했다. 하시기 바랍니다 <a href="/files/ftp_upload/1690/1690fig4.jpg">여기를 클릭</a> 그림 4의 더 큰 버전을 볼 수 있습니다.

<ol><li>Bridge, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+Extraction+from+Fungi%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Purification+Protocols%22%5BJournal%5D)">Protein Extraction from Fungi.</a> Protein Purification Protocols. , 39-48 (1996).</li>
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곰팡이 생물 도메인 내에서 proteomic 접근법에 최근 관심이 기술을합니다 (김 외., 2007 년 검토)를 사용하는 출판물의 증가 수를되었다. 단백질 추출을위한 방법은 추출 절차의 조합에 의존하고, 그들은 종종 기뻐서 방법론 섹션에서 설명하지 않고 잠재적인 문제 해결 방법을 다루는의 전문 지식을 요구하고 있습니다. 샘플 및 데이터 처리를위한 표준을 설정 기타 &quot;omics&quot;접근에 대해서는 것은 신뢰할 수있는 과학적 정보를 생성하기 위해서는 필수적입니다. 또한 샘플 및 조작의 절차가 적절하게 다른 &quot;omics&quot;실험간에 공유 결과 해석을 수 있도록 설명해야합니다. 이것은 완전히 게놈, proteomics, metabolomics에 간 데이터 마이닝의 잠재력을 활용을 위해 필수적인 것입니다 ... (모리슨 외., 2006). 실험의 모든 측면 (겔 전기 영동, 질량 분광법, 분자 상호 작용, 단백질 수정, Proteomics의 정보학, 샘플 처리)에 대처하기 위해서는 proteomic 실험에 대한 최소 정보는 초안되었으며 작업 그룹이 설립되었습니다. 현재에는 정의된 정보는 샘플 처리 절차에 사용할 수 없습니다. (테일러 외., 2007) MIAPE 지침의 골격 내에서 표준화를 높일 수 있습니다 절차를 구현하기 위해, proteomic 연구의 최종 품질을 결정하는 단백질 추출 절차의 중요성을 감안할 때, 우리는 샘플을 상세하게 비디오 프로토콜의 사용을 제안 처리. 실험의 비디오 설명은 &quot;omics&quot;실험 (Pasquali, 2007)보다 재현성을 초래할 수 샘플 처리에 대한 정보의 수를 늘리기 위해 크게 기여할 수 있습니다. 사실, 실험실에 걸쳐 재현성은 proteomics 결과 (http://www.fixingproteomics.org)의 유효성을 보장하기 위해 기본적인 요구 사항입니다. 다른 instrumentations과 다른 연산자 샘플을 조작 : 크로스 실험실 재현성은 두 요인에 의해 영향을받습니다. 설명 프로토콜에서, 우리는 수행하기 위해 제안 생물 학적 데이터 (즉, 결과의 기술 변화가 고려됩니다)의 신뢰성을 높이기 위해 여러 개의 연산자 (그림 2 및 비디오)를 포함하는 복제합니다. 단백질 추출에 대해 설명한 절차는 SDS와 난방을 기반으로합니다. 이것은 이전에 단백질의 좋은 순도와 수량 (브리지 1996) 보장하는 표시했다. SDS는 세포 벽, 소수성 단백질을 해체하고 oligomers 형성 단백질의 중단 석출을 방지 끓고와 결합. 비등은 프로 테아제의 불활 성화도 있습니다. 같은 효과는 EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산), PMSF하고 완전한 미니 테아제 억제제에 의해도 생산합니다. DTT는과 단백질 solubilization을 촉진 단백질 사이의 이황화 다리를 제거합니다. IEF 전에 SDS를 제거하기 위해 단백질은 아세톤 / TCA / DTT에 의해 시켰던 있습니다. 또한, 아세톤 / TCA / DTT 강수량이 화합물이 존재할 때 이러한 lipids, 핵산, 염분 또는 / 및 페놀 수지 carbon 화합물 같은 오염 물질을 제거하실 수 있습니다. SDS와 마찬가지로,이 분자는 IEF 동안 좋은 마이 그 레이션되지 않습니다. 이 강수량에 따라, 그것이 IEF를 방해할 수있는 TCA를 제거하기 위해 아세톤 / DTT에 의해 시켰던 단백질을 씻어 필요합니다. 좋은 샘플 준비는 좋은 결과의 핵심입니다. 이를 위해, 분말 무료 장갑 작업과 좋은 실험실 관행을 존중 환경에서 단백질의 오염을 방지하는 것도 중요 그것이다. 보기의 기술적 관점에서 설명하는 프로토콜 내에서 단백질의 충분한 양을과 정결을 얻기위한 가장 중요한 단계는 두 단계입니다. 먼저, 연삭 세포의 완전한 파괴는 단백질을 공개하는 근본이다 단계, 둘째, 총 단백질의 정화, lipids, DNA와 단백질의 마이 그 레이션을 방해할 수있는 다른 오염 물질의 대부분의 제거를 포함한 위상.

미디어 솔루션 PDA : 39g 포테이토 덱스 트로 오스 아가르 (Difco), 1 L 증류수. V8의 한천 : 200 ML V8 (캠벨, 미국), 2g CaCO3 (시그마), 16g 아가르 (DIFCO), 800 ML 증류수 독소의 유도 매체 : 1g K 2 HPO 4 0.5g KCl, 0.5g MgSO 4 7H 2 O, 10 MG FeEDTA, 2g L 글루탐산, 증류수 1L에 10g의 자당. 용해 완충액 : <table border="1"><tr><td></td><td> 100mL </td><td> 최종 농도 </td><td></td></tr><tr><td> 트리스 - HCL pH8 </td><td> 5mL </td><td> 50mM </td><td> 1M </td></tr><tr><td> SDS </td><td> 2g 또는 10mL </td><td> 2퍼센트 </td><td> 20% </td></tr><tr><td> DTT </td><td> 500mL </td><td> 10mM </td><td> 2M </td></tr><tr><td> EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) </td><td> 20mL </td><td> 0.1mM </td><td> 0.5M </td></tr><tr><td> PMSF </td><td> 200mL </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 완료 미니 테아제 억제제 </td><td> 1 정제 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 물 </td><td> Qsp </td><td></td><td></td></tr></table> 강수량 버퍼 : <table border="1"><tr><td></td><td> 100mL </td><td> 최종 농도 </td></tr><tr><td> TCA </td><td> 20mL </td><td> 20% </td></tr><tr><td> DTT </td><td> 0.1mL </td><td> 0.1 % </td></tr><tr><td> Aceton </td><td> Qsp </td><td></td></tr></table> 버퍼 워싱 : <table border="1"><tr><td></td><td> 100mL </td><td> 최종 농도 </td></tr><tr><td> DTT </td><td> 0.1mL </td><td> 0.1 % </td></tr><tr><td> Aceton </td><td> 100mL </td><td></td></tr></table> Labelling 버퍼 (° C 작은 aliquots에서 -18에 저장) <table border="1"><tr><td></td><td> 1mL </td><td> 최종 농도 </td></tr><tr><td> 요소 </td><td> 140 MG </td><td> 은 7m </td></tr><tr><td> 티오 우레아 </td><td> 50 MG </td><td> 2M </td></tr><tr><td> 챕스 </td><td> 40 MG </td><td> 4퍼센트 </td></tr><tr><td> 트리스 </td><td> 30 μL </td><td> 30 MM </td></tr><tr><td> 물 </td><td> 1 ML </td><td></td></tr></table>

에서 독소 유도와 단백질 추출 fusarium 종.</emproteomic 연구> 문화

Toxin Induction and Protein Extraction from Fusarium spp. Cultures for Proteomic Studies

Fusaria 다른 독소를 생산할 수 filamentous 곰팡이 있습니다. 이러한 deoxynivalenol, nivalenol, T2, zearelenone, fusaric 산, moniliformin 등 Fusarium의 mycotoxins .. 인간과 동물 모두 건강에 악영향을하고 일부는 pathogenicity 요인으로 간주됩니다. Proteomic 연구 Fusaria 잠재적인 병원성 요인 (종이 외., 2007, Houterman 외., 2007) 식별을위한 독소 생산 메커니즘 (테일러 외., 2008)뿐만 아니라 해독 효과로했다. 그것은 실험, 종자 및 연구소 간의 단백질 발현에있는 진실의 차이에 의존하기 위해 proteomic 연구 간의 비교에 대한 신뢰할 수있는 방법을 확립하는 것이 기본이된다. 설명되는 절차는 두 가지 방법에 의해 proteomic 절차의 표준화 수준 증가에 기여한다. 촬영 프로토콜은 정확하게 표현할 수있는 세부 수준을 향상하는 데 사용됩니다. 또한, 생물 학적 처리 표준 절차의 가용성 추출 절차의 기술 재현성 내에서 또한 계정에 인간의 요소를 복용 데이터의 높은 견고을 보장해야 복제합니다. 문화와 단백질 추출 (그림 1)의 두 가지 일 십사일 : 설명 프로토콜은 완성 16 일 필요합니다. 간단히, Fusarium의 종자는 4 일 동안 고체 매체에 재배되며 그들은 다음 수동 조각과 10 일 동안 수정된 독소의 유도 매체 (Jiao 외, 2008.)으로 전송됩니다. 균사체는 Miracloth 계층을 통해 여과에 의해 수집됩니다. 연마는 감기 챔버에서 수행됩니다. 추출을 수행 다른 연산자는 계정으로 기술 변화 (그림 2)로 인해 편견을하기 위해 (N = 3)를 복제합니다. 추출로 테일러 외에 설명된 SDS / DTT 버퍼를 기반으로했다. (2008) 약간 수정. 총 단백질 추출 Aceton / TCA / DTT 버퍼 야간 및 DTT / 아세톤 세척 (그림 3A, 3B)를 사용하여 단백질의 침전 과정을 필요합니다. 단백질은 결국 단백질 분류 버퍼 resolubilized 및 계량했다. 추출 결과는 2D 젤 (IEF / SDS - PAGE)로 진행하기 전에, 1D 젤 (그림 4, SDS - PAGE)에 시각되었습니다. 동일한 절차는 다른 성장 미디어 및 기타 filamentous 곰팡이 (마일즈 외., 2007)에서 proteomic 분석에 대해 적용할 수 있습니다.

곰팡이 종의 proteomic 분석을위한 단백질 추출 proteomic 실험 (MIAPE) 지침에 대한 최소한의 정보에 따라 달성하는 표준화의 높은 수준이 필요합니다. 우리는에서 독소 유도와 단백질 추출하는 동안 실험 바이어스를 최소화하는 절차를 포함하는 비디오 프로토콜을 제시<em&gt; Fusarium 종.</em

에서 독소 유도와 단백질 추출 Fusarium 종.</emProteomic 연구> 문화

Fusaria는 다양한 독소를 생성할 수 있는 사상균입니다. 데옥시니발레놀(deoxynivalenol), 니발레놀(nivalenol), T2, 제아랄레논(zearelenone), 푸사린산(fusaric acid)과 같은 Fusarium 마이코톡신은...

이 영상에서는 일부 종, 여기서는 특히 Fusarium graminearum의 독소 합성을 유도하는 절차와 저희 실험실의 단백질체 연구에 사용되는 전단백질 추출 프로토콜을 설명합니다. 전체 절차 기간은 16일로, 곰팡이 생장에 4일, 독소 합성에 10일, 그리고 단백질 추출에 2일이 소요됩니다. 4일 후, 콜로니는 여전히 플레이트 가장자리를 향해 활발하게 성장하고 있습니다.전형적인 기균사가 형성되면 층류 작업대 내에서 멸균된 블레이드를 사용하여 플레이트 표면을 부드럽게 긁어 수집합니다. 균사를 5개의 작은 조각으로 자른 후, 25 mL의 독소 유도 배지가 들어 있는 삼각 플라스크에 넣습니다. 독소 유도는 암조건보다 더 효율적입니다.플라스크를 알루미늄 호일로 덮습니다. 그 후 배양액을 25°C에서 분당 150회 회전 속도로 10일 동안 흔들어 줍니다. 배지는 SAPH이며 고농도의 S row 용액을 포함하고 있습니다.암조건과 함께 배양하는 것은 ria의 독소 합성을 촉진하는 것으로 알려져 있습니다. 그 후 균사를 MI close 조직으로 여과하여 독소가 함유된 액체로부터 분리합니다. 분리된 액체는 독소 함량 측정에 사용하며, 균사는 단백질 추출에 사용합니다.배지 잔류물을 방지하기 위해 균사체를 멸균수로 3회 세척합니다. 이후 과잉 수분을 제거하고, 액체 질소를 첨가하여 샘플을 -80°C에서 보관하거나 단백질 추출에 사용할 수 있습니다. 단백질 추출 과정은 SDS와 TCA의 사용을 기반으로 하며, 여러 단계의 용해 과정으로 구성됩니다.여러 작업자가 수행할 수 있는 방법을 제안할 것입니다. 생물학적 반복 시료를 추출하는 동시에, 각 반복 시료는 서로 다른 작업자가 수행합니다. 이 절차는 반복 시료를 처리하는 서로 다른 작업자로 인해 발생할 수 있는 추출 과정의 차이를 고려한 것입니다.따라서 실험자 변수가 반복군에 포함되므로 생물학적 반복 시료를 비교할 때 더 높은 강건성을 나타낼 것입니다. 동시에, 여러 실험자를 투입함으로써 처리 시간을 단축할 수 있습니다. 균사가 고운 분말이 될 때까지 액체 질소를 사용하여 멸균된 막자사발에서 시료를 갈아줍니다.이 단계는 단백질의 품질과 양을 결정하는 매우 중요한 단계입니다. 균사체를 10 ml 테플론 튜브에 튜브 전체 부피의 4/10 비율로 수집합니다. 그다음 SDS와 다양한 프로테아제 억제제가 포함된 용해 버퍼를 첨가합니다.그 후 튜브를 흔들어 균질한 용액이 될 때까지 섞어줍니다. 다음으로 샘플을 콜드 챔버에서 30분 동안 흔들어 더욱 균질화하며, 세포벽과 소수성 단백질을 용해시키기 위해 샘플을 가열하여 끓입니다. SDS의 존재는 단백질 침전을 방해하는 올리고머의 형성을 방지합니다.원심분리 단계를 통해 세 가지 층으로 분리됩니다. 단백질은 투명한 상층액에 부유하며, 이를 얼음에 보관된 새 튜브에 수집합니다. 그 후 펠릿을 사용하여 두 번째 용해 단계를 수행하며, 볼텍싱, 가열 및 원심분리 과정을 반복합니다.두 번의 용해 과정에서 얻은 상층액을 합쳐서 아세톤, 트리클로로아세트산(trichloroacetic acid) 및 DTT를 함유한 침전 버퍼를 사용하여 침전을 수행합니다. 그 후 단백질 침전을 위해 샘플을 -20°C에서 16시간 동안 하룻밤 동안 보관합니다. 침전을 촉진하기 위해 단백질이 튜브 바닥에 위치하도록 합니다.튜브를 고속으로 45분 동안 원심분리합니다. 이제 펠릿이 명확하게 보입니다. 5 mL 파이펫 팁을 사용하여 상층액을 제거할 수 있습니다.그 후 acetone과 DTT가 포함된 glacial 세척 완충액 25 milliliter를 첨가하여 TCA를 제거합니다. 이어서 충분하고 강하게 흔들어 섞어줍니다. 그 다음 새로운 원심분리 단계를 수행합니다.단백질 펠릿이 현재 떠 있는 상태이므로, 상층액을 제거하는 데 주의를 기울여야 합니다. 세척 완충액을 추가하고 흔든 후 원심분리하여 두 번째 세척 단계를 수행합니다. 상층액을 제거하고 스피드백(speed vac)을 사용하여 샘플을 건조합니다.시료가 건조되면 단백질은 분말과 같은 상태가 됩니다. 보관을 위해, 플라스틱에 의한 정전기 간섭을 줄이기 위해 튜브에서 시료 단백질을 수집해야 합니다.정전기 제거총을 사용하고 금속 스패튤라를 사용하여 단백질 분말을 수집합니다. 그 후 단백질을 라벨링 버퍼에 직접 재현탁합니다. 2D-PAGE를 위해 800 g에서 30분간 사용합니다.가용화에 충분한 양입니다. 고가의 2D-DIGE 라벨링 단계로 진행하기 전, 단백질의 품질을 확인하기 위해 그림과 같이 1차원 SDS-PAGE 젤에서 테스트를 수행합니다.레인 가장자리에 유의미한 스미어(smear)가 없다는 것은 샘플의 품질이 양호함을 시사합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

무균 조건 하에서 Gibberella zeae, 수집을위한 절차에 ascospores의 발달 과정을 공부를하는 것은 프로토콜에 대한 정보의 최고 수준을 생성하기 위해 촬영입니다. 이것은 실험, 전체 게놈 표현 프로필 테스트 구현하는 중요한 부분의 재현성을 촉진한다.

Microarray 실험에 대한 Gibberella zeae Ascospore 생산 및 수집.

종자 - 감염 곰팡이에 의한 시리얼 작물의 참화 더 나은 식물 병원체 상호 작용을 이해하기 위해 많은 연구 노력을하라는 메시지가있다. 실험실 환경에서 씨앗 - 곰팡이 상호 작용을 연구하기 위해, 우리는 곰팡이 복제, 바이오 매스, 그리고 커널 bioassays를 사용하여 진균 독소 오염의 부량위한 강력한 방법을 개발했다.

커널 Bioassays를 사용하여 곰팡이 콜로니, Sporogenesis 및 Mycotoxins 생산의 부량

Burkholderia의 속의 구성원은 임상 중요성 병원균이다. 우리는 기계적 중단하고 후속 단백질체 분석에 2-D 겔 전기 영동을 사용하여, 전체 박테리아 단백질을 추출하는 방법을 설명한다.

총 단백질 추출 및 2-D 겔 전기 영동 방법에 대한<em&gt; Burkholderia의</em&gt; 종

우리는 균류 아스 퍼질러 flavus를 아플라톡신에 합성 유전자 사일런 위해 RNA 간섭 신호를 포함하는 땅콩 종자 아플라톡신 및 유전자 발현 분석을위한 방법을 보여준다. 식물에서 곰팡이 독소의 RNAi를 매개 제어는 이전에보고되지 않았습니다.

땅콩에서 아플라톡신의 RNAi를 매개 제어 : 방법은 땅콩에 곰팡이 독소 생산 및 형질 전환 유전자 발현을 분석 /<em&gt; 아스 페르 길 루스</em&gt; Pathosystem

여기 선물이 분석 Aspergillus flavus 성장과 아플 라 톡 신 생산 옥수수 커널에서 항진균 단백질을 표현 하는 프로토콜.  우리는 감염 및 실시간으로 성숙한 커널에 곰 팡이의 확산을 모니터링 GFP 표현 A. flavus 긴장을 사용 하 여. 분석 결과 신속 하 고 신뢰할 수 있는, 재현.

Aspergillus flavus 성장 및 유전자 변형 옥수수 표현 Lablab purpureus L.에서에서 α-아 밀라 아 제 억제제에서 아플 라 톡 신 생산의 억제

이 프로토콜의 목적은 혐기성 챔버를 사용하지 않고 국부적으로 구매한 식품, 특히 엡실론 독소생성 균주 B 및 D에서 다른 클로스트리디움 퍼프린스 독시노타입을 검출하는 것입니다.

소매 식품 시료에서 클로스트리디움 퍼프린지 독시변의 농축 및 검출

여기서, 우리는 질량 분광계 기지를 둔 proteomics에 의하여 감염 도중 호스트와 병원체 사이 상호 작용을 프로파일기 위하여 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 단일 실험에서 호스트(예를 들어, 대식세포)와 병원체(예를 들어, Cryptococcus neoformans)의단백질 풍부도의 변화를 측정하기 위해 라벨이 없는 정량화를 사용합니다.

발견 중심의 숙주-병원균 상호 작용을 위한 라벨 프리 정량적 프로테오믹스 워크플로우

여기서 우리는 MALDI-TOF-TOF 탠덤 질량 분광법 및 하향식 프로테오믹 분석을 사용하여 사내에서 개발된 단백질을 신속히 서열화한 병원성 박테리아에 의해 생성되는 단백질의 신속한 식별을 위한 프로토콜을 제시합니다. 메타안정 단백질 이온 단편 때문에 아파르트산 효과 및 이러한 특이성은 단백질 식별을 위해 이용된다.

MALDI-TOF-TOF-MS/MS 및 하향식 프로테오믹 분석을 사용하여 대장균에 있는 항균 면역 단백질의 식별

여기서 우리는 토양 샘플에서 entomopathogenic 균류 (EPF)를 분리하고 선택하는 데 사용 된 식사 벌레 (Tenebrio molitor)-미끼 시스템을 기반으로 프로토콜을 제시합니다. 효과적인 코니디아 번호(ECN) 포뮬러는 현장에서 해충 미생물 조절을 위한 생리적 특성에 기초하여 높은 스트레스 내성 EPF를 선택하는 데 사용된다.

토양 샘플에서 내토모 병원성 곰팡이의 격리 및 선택 및 곤충 해충에 대한 곰팡이 독성의 평가

엔토모병원성 진균 콜로니는 테네브리오 미끼, 갤러리아 미끼 및 선택적 인공 배지, 즉 클로람페니콜, 티아벤다졸 및 시클로헥시미드(CTC 배지)로 보충된 효모 추출물이 풍부한 감자 덱스트로스 한천을 사용하여 열대 토양 샘플로부터 분리된다.

토양 샘플에서 엔토모병원성 곰팡이를 분리하는 방법의 비교

현재 논문은 식물 관련 내생균의 분리, 분리물의 장기 보존, 형태학적 특성 분석 및 후속 분자 식별 및 균유전체 분석을 위한 전체 DNA 추출을 위한 상세하고 적절한 프로토콜을 제공하는 것을 목표로 합니다.

Mycoheterotrophic 식물에서 내생균 균류를 식별하기 위한 분리, 특성화 및 전체 DNA 추출

배우세요 Fusarium 종에서 독소 유도 및 단백질 추출 방법을. SDS와 TCA를 활용한 표준화된 프로토콜로 프로테오믹스 연구의 재현성을 높이고 실험 편향을 최소화하여 고품질 단백질 샘플을 확보합니다.

에서 독소 유도와 단백질 추출 Fusarium 종. 문화

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