Name: 항체 라벨링에 대한 Drosophila Polytene의 염색체 Squashes의 준비 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-02-09T17:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 37 s
Description: 학습하세요 Drosophila 다선 염색체 squash 기법으로 항체 라벨링을 위한 표본을 준비하는 방법을. 타액선 분리, 이중 고정, 유산 아세트산 처리를 통해 유전자 발현 연구에 활용할 수 있습니다.

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비행기는 주식이 작품은 건강 그랜트 (GM62916)과 국립 과학 재단 (National Science Foundation) 부여 (MCB0817107)에 대한 국립 연구소에 의해 지원되었다의 유지 보수를 위해 양 V. Lephart 감사합니다.

polytene 염색체 스쿼시 준비에 대해 다음 프로토콜은 요한센 외에서 설명한 절차에서 조정됩니다. (2009). 1. 셋째 instar Drosophila의 애벌레의 문화 고품질 스쿼시 준비를위한 최적의 polytene 염색체를 얻기 위해서는, 솟아 culturing 조건 (즉, 주위 20 달걀 누워 매일 새로운 병에 표준 4 "비행 병 및 변경에 여성 파리). 선택 뚱보 개인 필수입니다 그들은 아직도 방황하고 있지만 pupation하기 직전하는 동안 세번째 instar의 유충을 등반의 첫 번째 작물에서. 21 우리는 정기적으로 문화 ° C 있지만 18 ° C 예를 들어 같은 몇 가지 목적을 위해 더 적합 있습니다 오르게 염색체를 얻을 것이다 때 밴드 / interband 지역은 높은 해상도 시각해야합니다. 2. Polytene 스쿼시 자료 <ul><li> 드루먼드 해부의 포셉 (2) </li><li> 페트리 요리 (60 X 15mm) </li><li> 프로스트 현미경 슬라이드 (피셔 번호 12-544-3) (폴리 - 라이신 - 코팅) </li><li> 22 X 22mm 번호 15 커버 전표 (피셔 번호 12 520B) (Sigmacote와 코팅, 시그마 # SL2) </li><li> 22 X 40mm 번호 15 커버 전표 (피셔 번호 12 - 530B) </li><li> 김 - 쳐줍니다 </li><li> 20X 목적으로 위상 대비 현미경 </li><li> 소형 듀어 (예 : 진공 플라스크 또는 보온병 병) </li><li> 롱 포셉 </li><li> 면도날 </li><li> 코플린 잘 </li><li> 고무 메이드 또는 유리 섬유 복합 트레이 (또는 이와 동등한 sealable 트레이) </li><li> Parafilm (22mm 사각형으로 절단) </li><li> 175g의 무게 </li></ul> 3. Fixatives 및 솔루션 <ol><li> 배 포름 알데히드 주식. 0.74 G.의 새로운 솔루션을 준비 DH 2 O의 4.0 ML과 1N 코 28 μl로 paraformaldehyde. 65 따뜻한 ° C paraformaldehyde를 해산하고 얼음에 저장합니다. </li><li> 정착액 1. 배 포름 알데히드 주식의 0.5 ML 10X PBS, 50μl 트리톤 X - 100, 3.45 ML DH 2 O 및 1.0 ML의 새로운 솔루션을 준비합니다. 트리톤 X - 100을 분산하고 1 시간 이내에 사용하는 웜. </li><li> 정착액 2. 1.5 ML DH 2 O, 2.5 ML 빙초산, 1 시간 이내에 배 포름 알데히드 재고 및 사용에서 1.0 ML의 새로운 솔루션을 준비합니다. </li><li> Lactoacetic 산성 솔루션입니다. 1 ML 젖산, 2 ML DH 2 O, 3 ML 초산의 솔루션을 준비합니다. </li></ol> 4. Polytene의 염색체 스쿼시 준비 : <ol><li> 물을 애벌레를 씻어 해부를위한 조직 문화 접시에있는 PBS로 전송할 수 있습니다. </li><li> , 입 포셉 한 쌍의와 후크의 팁을 파악 다른 페어와 방법 아래의 2 / 3에 대한 본문을 보유하고 입으로 당겨 침샘이 노출되도록 후크. 타액 두뇌에서 분비와 눈 - antennal 디스크를 분리하고,이 선들의 지방 신체 및 기타 관련 조직 멀리 해부하다. </li><li> 두 잘 우울증 슬라이드 잘 첫 번째와 정착액 2 200-300 microliters 잘 두 정착액 1 200 microliters를 추가합니다. 물론 하나의 정착액 1 번에 침샘 중 하나 쌍을 전송하고 일반적으로 1-2분에 대한 대상 에피토프에 필요한 시간의 금액에 대해 숙고하다. (참고 : 같은 히스톤 수정의 대부분 같은 epitopes가 5 분 이상 고정이 필요할 수 있습니다.) </li><li> 사용 포셉 잘 2 정착액 2 침샘을 전송하고 2 분 동안 품어. </li><li> 깨끗한 Sigmacoted coverslip에 Lactoacetic 산성 솔루션의 10-30 μl에 분비를 전송합니다. 부드럽게 coverslip에 polylysine - 코팅 현미경 슬라이드를 낮추고,이 선들은 슬라이드와 coverslip 사이 있도록 수직 압력을 적용하지 않고, coverslip을 선택합니다. 즉시 조심스럽게 한쪽 가장자리에 집게로 coverslip 쥐고하여 확산 세포 용해와 염색체를 촉진 그리고 부드럽게 조직에 대한 수직 압력을 최소화하기 위해 노력하고, 약간 앞뒤로 그것을 이동. 또는 부드럽게 앞뒤로 coverslip을 이동에도 지우개 연필의 측면이나 손가락을 사용합니다. 앞뒤로 coverslip 이동에 지연 그들이 Lactoacetic 산성 용액에 노출시보다 엄격한되는 경향이 있으므로 염색체 무기의 확산 감소 가능성입니다. 솔루션의 혼돈 스럽 것은 종종 세포 분리의 좋은 표시이다. 부드럽게 몇 번 염색체 확산을 지원 또한 연필의 지우개 측면 (수직 압력을 피하기 위해) obliquely coverslip을 수 도청. </li><li> 즉시 염색체가 잘 확산한지 여부를 확인할 20 40X 목적으로 위상 대비 현미경으로 조직을 검사합니다. </li><li> 확산 염색체가 충분하면 깨끗한 김 - 잎사귀의 스택에 다운 coverslip 측면으로 슬라이드를 설정합니다. 플레이스 두 번째 위에 김 - 닦아 및 전단 것이다 coverslip의 수평 운동을 피하 coverslip가 위치하고 단단히 눌러 어디 위에 엄지를 배치하여 염색체를 평평하게염색체. </li><li> 준비가 용도에 적합한지 확인하기 위해 현미경으로 다시 슬라이드를 검사합니다. 염색체가 부수에 따라 크게 이동하는 경우 후속 준비에 Lactoacetic 산성 솔루션의 적은 볼륨을 사용합니다. 적합한 슬라이드 충분한 번호가 얻은 때까지 반복 4.1-4.8 단계를 반복합니다. 슬라이드의 coverslip에 175g 무게를 놓습니다. </li><li> 액체 질소로 작은 듀어 (예, 보온병 병) 채웁니다. 긴 집게를 사용하여 액체 N 2로 수영 슬라이드 끓는 멈출 때까지, 슬라이드를 제거하고 즉시 coverslip을 뒤집기 한 모퉁이에 깨끗한 면도날의 가장자리를 사용합니다. 4 PBS와 코플린있는 항아리에 슬라이드가 즉시 사용할 수있다면, 장소 ° C. 그렇지 않으면 95 % 에탄올로 가득 코플린 병에 슬라이드를 수집합니다. 서리가 조직 슬라이드에 준수하여 coverslip로 남아 않았 확인 멀리 sublimed 일단 coverslip을 검사합니다. 모든 슬라이드는 PBS (몇 시간 이내에 사용하기 위해) 또는 에탄올 (장기 저장을 위해) 중 하나에 저장된 때까지 슬라이드의 나머지와 함께 반복합니다. </li></ol> 대표 결과 고품질 polytene 스쿼시 준비를위한 첫 번째 중요한 단계는 큰 침샘과 핵 지방 애벌레를 성장하는 것입니다. 두 번째는 연습이 걸릴 수 있습니다 확산 과정과 좋은 기술입니다. 개선 확산 성공 한 팁은 부수 단계에서 lactoacetic 산성 솔루션의 최소한의 볼륨을 찾을 수 있습니다. 이것은 멀리 염색체 팔이 씻을 수있는 과도한 스트리밍 군대를 생성하지 않고 염색체의 확산 충분한을 촉진합니다. 또한 Lactoacetic 산성 용액에 노출 때 그들이 더 엄격한 해짐에 따라 앞뒤로 coverslip 이동에 지연이 염색체 무기의 확산 줄일 수 있다고 지적 가치가있다. 모든 것들이 잘되면, 수많은 잘 확산 polytene 염색체가 있어야합니다. 그림 1은 두 초록색으로 interband 지역에 대한 마커와 염료로 분류, 이러한 준비의 예를 보여주는 얼룩 파란색 줄무늬 지역. 부족 확산을 얻을 경우, 염색체는 그림 2에 표시된 작은 공처럼 보이게됩니다. 반면에, 너무 많은 전이가 발생하는 경우, chomosomes 너무 얇고 확장이나 그림 3과 같이 작은 조각으로 조각난 경우에 따라 것입니다. <img src="/files/ftp_upload/1748/1748fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. Polytene 스쿼시 준비 더블 JIL - 1 히스톤 H3S10 키나제 (빨간색)와 Hoechst (파란색)에 항체으로 표시. <img src="/files/ftp_upload/1748/1748fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 부족 확산과 그림 2. Polytene 스쿼시. <img src="/files/ftp_upload/1748/1748fig3.jpg" alt="그림 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"> 그림 3. 너무 확산과 Polytene 호박.

<ol><li>Cai, W., Bao, X., Deng, H., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+polymerase+II-mediated+transcription+at+active+loci+does+not+require+histone+H3S10+phosphorylation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">RNA polymerase II-mediated transcription at active loci does not require histone H3S10 phosphorylation in Drosophila.</a> Development. 135, 2917-2925 (2008).</li>
<li>DiMario, P., Rosby, R., Cui, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+visualization+of+GFP-fusion+proteins+on+polytene+chromosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Dros.+Inf.+Serv%22%5BJournal%5D)">Direct visualization of GFP-fusion proteins on polytene chromosomes.</a> Dros. Inf. Serv. 89, 115-118 (2006).</li>
<li>Johansen, K. M., Cai, W., Deng, H., Bao, X., Zhang, W., Girton, J., Johansen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+studying+transcription+and+epigenetic+chromatin+modification+in+Drosophila+polytene+chromosome+squash+preparations+using+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Methods for studying transcription and epigenetic chromatin modification in Drosophila polytene chromosome squash preparations using antibodies.</a> Methods. 48, 387-397 (2009).</li>
</ol>

기존 스쿼시 고정 프로토콜의 아세트산과 젖산 지방산의 포함은 확산 interband 해상도와 염색체 팔 모두를 용이하게하지만, 불행히도 일부 epitopes이 치료를 생존하지 않습니다. 이러한 에피토프의 예는 H3S10ph입니다 (까 외., 2008). 산성 치료 또한 GFP - 태그 단백질, DiMario 외의 고유의 형광을 꺼버리는 그 단점을 가지고 있기 때문에. (2006) 최근에 산성에 민감한 epitopes의 항체 검출을위한 GFP - 항체 라벨뿐만 아니라없이 polytene 염색체에 GFP - 융합 단백질의 직접적인 시각화를 허용 포름 알데히드 기반 &quot;산성 무료 스쿼시 기술&quot;을 개발했습니다. 이 절차에 대한 수정은 추가 요한센 외에 자세히 설명되어 있습니다. (2009). 더블 JIL - 1 히스톤 H3S10 키나제와 Hoechst하는 항체와 레이블 대표​​ 산성 고정 polytene 스쿼시 준비는 그림에 표시됩니다. 1.

항체 라벨링에 대한 drosophila polytene의 염색체 squashes의 준비

Preparation of Drosophila Polytene Chromosome Squashes for Antibody Labeling

Drosophila 오래 염색질 구조와 셋째 instar의 애벌레의 거대한 침샘 polytene 염색체에서 제공하는 cytological 장점으로 인해 유전자 규제 사이의 관계를 공부 좋아하는 모델 시스템을하고 있습니다. 이 조직에서 염색체는 약 1000 사본을 상승을주는 세포 분열의 부재에서 복제의 많은 순찰을 받고있다. DNA는 특정 단백질의 지방화로 염색질 형태를 상호 연관시킬 수있는 독특한 기회를 제공합니다 크게 확대 염색체의 결과로 각 replicative 사이클 이후에 정렬 남아있다. 따라서, 다른 유전자에 존재하는 epigenetic 수정 정의 및 전사 프로세스의 여러 단계에서 관심이 높은 수준이되었습니다. 이러한 연구에 중요한 도구가 효소에 항체와 polytene 염색체의 라벨, 전사 인자, 또는 관심 히스톤 수정입니다. 이 비디오 프로토콜은 항체 라벨에 대한 Drosophila polytene 염색체를 준비 요한센 실험실에서 사용되는 스쿼시 기술을 보여줍니다.

이 비디오 프로토콜은 준비하는 요한센 실험실에서 사용되는 스쿼시 기법을 보여줍니다<em&gt; Drosophila</em항체 라벨에 대한&gt; polytene 염색체.

항체 라벨링에 대한 Drosophila Polytene의 염색체 Squashes의 준비

초파리(Drosophila)는 세포학적 특성으로 인해 염색질 구조와 유전자 조절 사이의 관계를 연구하는 데 있어 오랫동안 선호되어 온 모델 시스템입니다.

본 절차는 초파리 병에서 지방이 많은 3령 유충을 배양하는 것으로 시작합니다. 두 쌍의 핀셋을 사용하여 유충으로부터 침샘을 박리합니다. 그 후, 2구 함입 슬라이드에서 두 가지 서로 다른 고정액을 사용하여 침샘을 성공적으로 고정합니다.마지막으로, 커버 슬립과 현미경 슬라이드 사이의 젖산 초산 용액(lacto acetic acid solution)에서 샘을 압착합니다. 안녕하세요, 저는 아이오와 주립대학교 생화학, 생물물리학 및 분자생물학과의 Kristen Johansen 박사입니다. 안녕하세요, 저는 Johansen 연구실의 대학원 조교입니다.오늘은 항체 표지에 적합한 초파리 다사염색체 스쿼시 표본 제작 절차를 보여드리겠습니다. 저희 실험실에서는 이 절차를 통해 후성유전학적 히스톤 수정과 염색질 구조 및 유전자 발현 사이의 관계를 연구하고 있습니다. 그럼 시작하겠습니다.고품질의 스쿼시 표본을 위한 최적의 다사 염색체(polytan chromosomes)를 얻으려면, 밀집되지 않은 배양 조건이 필수적입니다. 표준 4인치 초파리 병에 산란기 암컷 파리를 약 20마리 넣고 매일 새 병으로 교체하십시오. 대부분의 목적에는 21°C에서 배양하는 것이 적당하지만, 18°C에서 배양하면 일부 실험(예: 밴드 간 영역을 고해상도로 시각화해야 하는 경우)에 더 적합한 굵은 염색체를 얻을 수 있습니다.첫 번째로 부화하여 병 벽을 타고 올라가는 3령 스타 larvae 중 가장 통통한 개체들을 선택하십시오. larvae가 배회하며 아직 휴면(pation)에 들어가기 직전일 때, 먹이 위쪽의 병 벽면에서 쉽게 확인할 수 있습니다. 핀셋을 사용하여 larvae를 조직 배양 접시에 옮기십시오.압착의 각 라운드마다, 해부를 위해 깨끗한 PBS 접시로 옮기기 전 2~3마리의 유충을 물로 함께 헹굽니다. PBS가 유충을 덮어야 하지만, 시간에 쫓길 필요는 없습니다. 유충은 이러한 조건에서 몇 시간 동안 생존할 수 있으므로, PBS가 담긴 유충 접시를 핀셋 한 쌍을 사용하여 해부 현미경의 스테이지 위에 놓습니다.몸체를 잡은 상태에서 구강 갈고리(mouth hooks)의 끝부분을 잡습니다. 두 번째 핀셋을 사용하여 구강 갈고리 아래쪽 약 3분의 2 지점을 잡고 당겨 타액선을 노출시킵니다. 타액선을 뇌, 눈 및 테날 디스크(tenal discs)로부터 분리하고, 지방체와 기타 관련 조직들을 절제하여 제거합니다.2구 함몰 슬라이드의 첫 번째 웰에 고정액 1 200 µL를 넣고, 두 번째 웰에 고정액 2 200~300 µL를 넣습니다. 핀셋을 사용하여 타액선 한 쌍을 웰 1의 고정액 1로 옮긴 후, 표적 에피토프에 필요한 시간(보통 약 1~2분) 동안 배양합니다.침샘을 고정액이 들어있는 2번 웰로 옮기고 2분 동안 배양합니다. 핀셋을 사용하여 침샘을 10~30 µL의 갓 조제한 락토 아세트산 용액이 도포된 깨끗한 시그마 코팅 커버슬립으로 옮깁니다. 폴리리신 코팅된 현미경 슬라이드를 커버슬립 위에 조심스럽게 내립니다.수직 압력을 가하지 않고 액체의 접착력을 이용하여 슬라이드를 조심스럽게 들어 올려 커버슬립을 집어 올립니다. 염색체를 즉시 퍼뜨리기 위해 핀셋으로 커버슬립의 가장자리를 조심스럽게 잡고 부드럽게 앞뒤로 약간씩 움직입니다. 다시 한번, 조직에 가해지는 수직 압력을 최소화하면서 커버슬립을 흔들어 주는 것은 타액선의 개별 세포들을 적절히 분리하는 데 중요합니다.연필 지우개 부분으로 커버 슬립을 비스듬히 가볍게 두드리면 용액의 혼탁함이 퍼지는 데 도움이 될 수 있으며, 이는 종종 세포 분리의 좋은 지표가 됩니다. 위상차 현미경으로 조직을 즉시 관찰하여 염색체 팔이 명확하게 분리되고 확장되어 염색체가 잘 퍼졌는지 확인하십시오. 처음 시도했을 때 염색체가 충분히 퍼지지 않은 것으로 보인다면,충분한 확산이 이루어질 때까지 커버슬립을 가볍게 두드리는 과정을 반복할 수 있습니다. 슬라이드를 커버슬립 쪽이 아래로 향하게 하여 깨끗한 Kimwipe 더미 위에 놓습니다. 준비된 시료 위에 깨끗한 와이프를 덮습니다.커버슬립 위치 위에 엄지손가락을 올리고 수직으로 세게 누릅니다. 염색체가 전단될 수 있으므로 수평 이동은 피하십시오. 현미경으로 슬라이드를 다시 검토하여 현재 실험에 적합한지 확인합니다.충분한 수의 슬라이드를 얻기 위해 해부 및 염색체 압착 표본 제작 과정을 반복합니다. 긴 핀셋을 사용하여 슬라이드의 커버 슬립 위에 175 gram 무게추를 올립니다. 준비된 슬라이드를 액체 질소가 담긴 작은 용기에 담그고, 끓음이 멈출 때까지 그대로 유지합니다.슬라이드를 꺼내고 깨끗한 면도날의 가장자리를 커버슬립 모서리 아래에 넣어 즉시 젖혀서 제거합니다. 즉시 사용할 경우에는 차가운 PBS가 채워진 코플란 용기에, 장기 보관할 경우에는 95% ethanol이 채워진 코플란 용기에 슬라이드를 수집합니다. 성에가 승화되어 사라지면, 커버슬립을 확인하여 조직이 슬라이드에 그대로 남아 있는지 확인합니다.고품질의 INE squash 표본을 얻기 위한 첫 번째 핵심 단계는 침샘 핵이 큰 비대한 유충을 배양하는 것입니다. 두 번째는 도말 과정에서의 숙련된 기술이며, 이는 어느 정도의 연습이 필요할 수 있습니다. 도말 성공률을 높이기 위한 한 가지 팁은 squash 단계에서 젖산 초산 용액의 최소 부피를 찾는 것입니다.이렇게 하면 염색체 팔이 씻겨 내려갈 수 있는 과도한 흐름의 힘을 생성하지 않으면서도 염색체를 충분히 펼칠 수 있습니다. 또한, 커버 슬립을 앞뒤로 움직이는 시간이 지체되면 염색체 팔이 락토 아세트산(lacto acetic acid) 용액에 노출되어 더 딱딱해지므로, 염색체 팔의 확산이 감소한다는 점에 유의해야 합니다. 각 슬라이드에서 모든 과정이 원활하게 진행되었다면, 잘 펼쳐진 수많은 다색 염색체(polytan chromosomes)가 관찰될 것입니다.여기에서는 인터밴드 영역을 빨간색 마커로, 밴드 영역을 파란색 염색약으로 이중 표지한 준비 표본의 예를 보여줍니다. 충분히 퍼지지 않은 경우, 여기에서 보는 것과 같이 염색체가 작은 공 모양으로 보입니다. 반대로 너무 많이 퍼진 경우, 여기에서 보는 것과 같이 염색체가 너무 가늘고 길게 늘어나거나 경우에 따라 작은 조각으로 단편화될 수 있습니다.지금까지 초파리 다핵세포 염색체 압착 표본을 만드는 방법을 살펴보았습니다. 이 절차를 수행할 때는 반드시 지방체에서 시작해야 한다는 점을 기억하는 것이 중요합니다. 이것으로 모든 설명을 마칩니다.시청해 주셔서 감사드리며, 귀하의 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

분리 및 위상 콘트라스트와 형광 현미경으로 이미징 초파리 고환 샘플 (생활하고 고정)을 제조하는 방법이 설명된다.

정자의 세포 학적 분석 : 라이브와 고정 준비<em&gt; 초파리</em&gt; 고환

염색체 페인팅은 세포 핵의 조직과 카요타입의 진화를 연구하는 데 유용한 방법입니다. 여기서, 우리는 이후 시상 혼성화(FISH)에서 2차원 및 3차원 형광에 사용되는 단일 폴리텐 염색체로부터 관심 있는 특정 영역을 분리하고 증폭시키는 접근법을 시연한다.

말라리아 모기의 2D 및 3D 염색체 페인팅

여기에서는 슬라이드 장착형 염색체에서 반복적인 이색성 염기서열을 시각화하기 위해 형광 DNA 제자리 혼성화(DNA ISH)를 수행하는 간단한 방법을 제시합니다. 이 방법은 최소한의 시약만 필요하며 짧거나 긴 프로브, 다양한 조직, 형광 또는 비형광 기반 신호로 검출하는 데 사용할 수 있습니다.

형광 DNA를위한 간단한 방법<em&gt; 현장에서</em&gt; 숙청 염색체에 하이브리드

이 프로토콜은 kinesin-5의 소분자 억제제에 민감한 초파리 S2 세포주를 생성하는 방법을 설명합니다. 세포 기반 오류 수정 분석에서 이러한 세포를 사용하는 방법도 간략하게 설명되어 있습니다.

&quot;인간 답게&quot;를 생성<em&gt; 초파리</em키네신-5의 약리 억제에&gt; S2 세포주 민감성

우리는 성숙한 초파리 난모세포의 수집, 준비 및 이미징을 위한 프로토콜을 제시합니다. 이러한 방법을 사용하면 염색체 거동과 방추체 조립 및 감수분열 중 기능을 시각화할 수 있습니다.

고정의 이미지 Prometaphase 및 중기 감수 분열의 I위한 기술<em&gt; 초파리</em&gt; 난 모세포

핵 표면 퍼짐은 만피증 도중 염색체 사건을 공부하기 위한 필수적인 공구입니다. 여기서 우리는 제브라피쉬 정자세포로부터 의한 1단계 진행 중에 메오성 염색체를 준비하고 시각화하는 방법을 시연한다.

제브라피쉬 정자세포에서 메오틱 염색체 스프레드 의 준비

이 프로토콜은 드로소필라 폴리텐 세포에서 이종로크로마틴 골재를 시각화하는 것을 목표로 한다.

드로소필라 살리바리 땀샘의 이종로크로마티닌 관련 단백질의 시각화를 위한 면역형성 염색

이 프로토콜은 기존의 GFP/mCherry-tag 접근법을 사용하여 검출하기 어려운 저농도 단백질 또는 번역 후 변형의 실시간 이미징을 가능하게 하는 맞춤형 항체 기반 형광 라벨링 및 초기 초파리 배아에 주입하는 방법을 설명합니다.

형광 항체 주입을 통한 살아있는 초파리 배아의 저농도 단백질 및 번역 후 변형 시각화

이 연구는 참수, 고정, 동결 절제, 형광 염색, 면역 염색 및 이미징을 포함하는 조직 처리를 위한 단순화된 프로토콜을 제시하며, 이는 공초점 및 다광자 이미징으로 확장될 수 있습니다. 이 방법은 복잡한 해부에 필적하는 효능을 유지하며 고급 운동 기술의 필요성을 우회합니다. 정량적 이미지 분석은 광범위한 조사 잠재력을 제공합니다.

향상된 뇌 형광 염색 및 면역 염색을 위한 초파리 머리의 직접 동결 절편

이 연구에서는 D. melanogaster 난소의 TurboID 기반 근접 표지(PL)에 대한 세부 프로토콜을 수립하여 비오틴 보충 및 난소 절제부터 이식유전자 발현 검증 및 질량 분석을 위한 비오틴화 펩타이드 농축에 이르는 단계를 다룹니다.

생체 내 Drosophila melanogaster에 TurboID 기반 근접 라벨링 적용

이 글에서는 시약을 경제적으로 사용하고 소수의 상상 디스크를 쉽게 다룰 수 있는 효율적인 상상 디스크 해부 및 항체 염색 프로토콜을 설명합니다.

Drosophila melanogaster의 눈-더듬이 및 날개 상상 디스크의 소규모 해부 및 항체 염색

학습하세요 Drosophila 다선 염색체 squash 기법으로 항체 라벨링을 위한 표본을 준비하는 방법을. 타액선 분리, 이중 고정, 유산 아세트산 처리를 통해 유전자 발현 연구에 활용할 수 있습니다.

항체 라벨링에 대한 Drosophila Polytene의 염색체 Squashes의 준비

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