Haemagglutination 분석을 사용하여 혈청의 반응성 및 Titre를 결정

헤마글루티닌 분석을 사용하여 혈청에 대한 반응성 및 역가를 측정합니다. 글루텐 국가는 용해성 항체와 미립자 항원 사이에서 일어나는 반응입니다. 여기에는 세포가 포함되거나 분자가 있을 수 있습니다.

캐리어 표면의 에피토프는 항체가 캐리어를 함께 결합하고 가교할 수 있도록 하여 항원 항체 복합체라고 하는 복잡한 격자를 형성합니다. 헴 응집(hem agglutination)은 항체가 미립자 항원 역할을 하는 적혈구에 결합하는 특정 형태의 응집입니다. 적혈구는 쉽게 구할 수 있고 결과를 육안으로 쉽게 볼 수 있기 때문에 유용한 표적으로 사용할 수 있습니다.

혈청 샘플을 연속적으로 희석한 다음 96웰 UBO 플레이트에 넣습니다. 그런 다음 적혈구 Riva 세포의 현탁액이 추가됩니다. 항체가 고농도로 존재할 때 적혈구에 결합하는 일이 일어나 큰 격자를 형성합니다.

이 격자는 중력에 의해 침전되기 때문에 우보 판의 모양을 따릅니다. 위에서 보면 넓은 적혈구가 보입니다. 이것은 양성 헤마글루티닌 반응입니다.

항체 수치가 낮으면 격자가 형성되지 않고 적혈구가 UBO 플레이트의 모양에 순응하고 베이스에 집중되어 작은 펠릿을 형성합니다. 이것은 음성 밑단 응집 반응입니다. 이 다이어그램은 긍정적인 반응을 보여줍니다.

세포는 정착할 때 격자를 형성하고 U 바닥 판의 모양을 따릅니다. 왼쪽과 오른쪽에는 넓은 적혈구가 보이는 평면도가 보입니다. 중간 정도의 항체가 존재하면 일부 문자 형성이 관찰됩니다.

헴 응집은 또한 알려진 항원에 대해 다른 혈청 샘플의 반응성을 테스트할 수 있도록 합니다. 혈청 샘플의 역가도 측정할 수 있습니다. 역가는 긍정적인 반응이 관찰된 마지막 희석액입니다.

일반적으로 혈청 샘플의 항체 농도가 높을수록 역가가 높아집니다. 이 다이어그램은 음의 헴 응집 반응을 보여줍니다. 적혈구를 가교할 수 있는 항체가 충분하지 않습니다.

세포가 중력에 의해 가라앉으면서 우물 옆으로 미끄러져 내려가 바닥에 단단한 펠릿을 형성합니다. 오른쪽 다이어그램은 위에서 볼 때 적혈구를 보여줍니다. 이 실험에는 1 96웰 U 바닥 플레이트가 필요합니다.

평평한 바닥판은 세포가 펠릿으로 침전되는 것을 허용하지 않아 해석을 불가능하게 만들기 때문에 U 바닥판을 사용하는 것이 필수적입니다. 50마이크로리터의 혈청, Riva 세포의 1% 현탁액 및 베론 완충 식염수의 1회 용액을 각 웰에 전달할 수 있는 애완 동물. 1에서 12까지, 50 마이크로 리터의 roal 완충 식염수를 제공합니다.

이것은 희석제로 사용됩니다. 이제 50마이크로리터의 세럼을 A 1의 우물에 넣습니다. 이것은 두 가지 희석 중 첫 번째 희석입니다.

퍼펫을 사용하여 혈청 샘플이 완전히 혼합되었는지 확인합니다. 혼합되면 웰 A 1에서 50마이크로리터를 제거하고 웰 A 2로 옮깁니다. 이것은 두 가지 희석 중 두 번째 희석으로, 4배의 희석을 제공합니다.

웰 3에서 11까지 사용하여 이 희석 시리즈를 계속합니다. 12에 어떤 혈청도 넣지 마십시오. 이것은 당신의 로알 버퍼 식염수 음성 대조군입니다. 이제 완전히 혼합된 Riva 세포의 1% 현탁액을 50마이크로리터를 1에서 12까지 이동합니다.

세포가 추가되면 플레이트를 덮고 플레이트를 부드럽게 두드려 샘플과 세포가 혼합되었는지 확인합니다. 이제 37도에서 60분 동안 배양합니다. 가습 인큐베이터가 적합합니다.

60분의 배양 기간 동안 항원 항체 상호작용이 일어나고 세포가 정착하기 시작합니다. 지금 보고 있는 동영상은 60분 전체의 타임랩스 사진입니다. 이것은 5에서 10까지의 우물을 근접 촬영한 것입니다.

우리는 이미 12를 조사했는데, 이는 이것에서 VBS 컨트롤이었습니다. 글쎄요, 세포는 분석이 적절하게 기능했음을 나타내는 단단한 펠릿을 형성했습니다. 웰 5와 6은 양성 헴 응집의 예입니다.

음, 7은 중간 응집 결과의 예이고 웰 8, 9 및 10은 헴 응집에 대해 음성입니다. 이 결과를 바탕으로 역가는 웰 7의 희석을 기반으로 결정되며, 이것이 마지막 웰이므로 긍정적 인 반응이 관찰되었습니다.