Name: 만성의 살모넬라균 감염된 마우스 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-31T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: 학습하세요 만성 살모넬라균 감염 마우스 모델 구축 방법을. 장내 지속 감염을 27주간 관찰하고 분변에서 균을 분리하여 BL 크로마 플레이트로 검출합니다. 이 모델은 숙주-병원체 상호작용 연구에 활용됩니다.

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이 작품은 NIDDK KO1 DK075386 부여하고 Jun Sun에 미국 암 협회 RSG - 09 - 075-01 - MBC에 의해 지원되었다.

세균성 문화, 마우스 gavage 및 살모넬라균 검출이 프로토콜은 세 부분을 포함하고 있습니다. 1. 살모넬라균의 성장 상태. <ol><li> ° C 야간 37 품어 살모넬라균 Luria - Bertani 국물 (LB) 접시를 준비합니다. </li><li> LB 판에서 복제를 선택하고 12 ML 튜브 7 ML의 LB에 넣어 37 ° C 약 5 시간 동안 흔들. </li><li> 약 18 시간 동안 떨지 않고 37 ° C에서 고정 상 문화와 부화의 0.05 ML과 함께 50 ML의 LB의 예방. </li><li> 비율 100:3을 (HBSS LB)를 사용하여 HBSS에있는 박테리아를 중단, 10 분 6,000 RPM과 함께 실온에서 하룻밤 박테리아 문화를 스핀. 예를 들면 다음과 같습니다 모든 50 ML의 LB 문화는 1.5 ML의 HBSS에 일시 중지됩니다. </li><li> 동물 gavage 경우, 추가 1시 10분 비율 박테리아 문화를 희석. 예를 들면 다음과 같습니다 모든 1.5 ML의 LB 문화 15 ML의 HBSS에 일시 중지됩니다. </li></ol> 2. 살모넬라균 감염 모델 * <ol><li> 스트렙토 마이신 솔루션을 준비합니다. 각각의 마우스는 100 μl HBSS에 스트렙토 마이신의 7.5 MG를 받게 될 것입니다. 예를 들어, 10 마우스에 대한 1.2 ML HBSS에 스트렙토 마이신 총 90 MG를 준비합니다. 스트렙토 마이신 솔루션을 준비할 때 항상 몇 가지 여분의 볼륨을했습니다. </li><li> 구두 gavage 치료를 받기 전에 물과 음식을 4 시간 철수. </li><li> 스트렙토 마이신 (제어 마우스에 대한 HBSS 100 μl)의 7.5 MG로 스트렙토 마이신과 Gavage 쥐. 똑바로 식도를 만들기 위해 검지로 머리와 목 스트레칭, 단단히 엄지와 가운데 손가락으로 마우스 어깨 위에 피부를 잡아. 입천장을 따라와 인두의 뒤쪽의 오른쪽 방향으로 먹이 바늘의 볼 - 팁을 직접 다음, 부드럽게 식도로 아래로 통과하고 100 μl 솔루션을 주입. 아무 저항도 느끼지해야합니다. </li><li> 스트렙토 마이신 처리, 철회 물, 생쥐는 박테리아에 감염된 음식을 다시하기 전에 이후 20 시에. </li><li> HBSS 100 μl 현탁액 각 마우스를 Gavage 또는 경구 gavage에 의해 멸균 HBSS (제어)와 치료. gavage 절차는 스트렙토 마이신과 같은) 2.3로 gavage 마우스입니다. </li></ol> * 동물 실험은 특정 - 병원체가없는 여성 C57BL / 이전 1 설명된대로 6~7주 살 때 6 쥐 (타코닉, 허드슨, NY)를 사용하여 수행되었습니다. 프로토콜은 동물 자원 (UCAR)에서 로체스터 대학위원회의 대학에 의해 승인되었습니다. 3. 소장에서 살모넬라균의 검출. <ol><li> (100 MG) 마우스 배설물 수집합니다. </li><li> 적극적으로 1ml PBS와 소용돌이와 1.5 마이크로 원심 튜브에 배설물 샘플을 전송합니다. </li><li> 800 RPM 10 분 원심 분리기. 깨끗한 microfuge 튜브에 뜨는을 전송합니다. </li><li> 5 분을 위해 6,000 rpm으로 원심 분리. 뜨는은 삭제됩니다 200 μL PBS는 쥐똥에 추가 vortexed됩니다. </li><li> 살모넬라균을 검출 BBL CHROMagar 접시에 일회용 휴대 확장기와 리크 200 μl PBS가. 살모넬라균 종은 (보라색으로 장미, Fig.1 참조) 자주빛 나타납니다. 200 μl 산출하면 접시에 너무 많은 식민지는 100 μl 또는 연속 50 μl를 사용합니다. </li></ol> 4. 대표 결과. 프로토콜이 제대로되면 살모넬라균 typhimurium의 식민지가 6 개월 이상 마우스 소장에서 검색된 수 있습니다. 살모넬라균은 6 개월 (Fig.1)을 통해 지저분한 문화에 의해 감지 수 있습니다. 전형적인 아웃이 모델의 결과로서, 몸은 상실과 죽음 4 주 이후에 감염 내에서 발생하는 무게. 감염에 사용되는 살모넬라균의 변종에 따라, 일부 마우스는 6 개월 이상 생존할 수 없습니다. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 살모넬라균의 종의 창자 살모넬라균 인해 선택 chromogens의 존재에 신진 대사의 차이로 색상 (퍼플 로즈) 자주빛 나타납니다. 다른 박테리아가 어느 저해 또는 파란색 - 녹색 또는 무색의 식민지를 생산하고 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 살모넬라균 돌연변이 스트레인 PhoP C, C PhoP에 감염된 마우스의 생존 비율 아브라 -, 그리고 PhoP C AvrA-/AvrA +, 사주 (28 일) PhoP C 아브라. 4 주 동안 살모넬라균에 감염된 생쥐의 표 1. 체중. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> 0 </td><td> 일주 </td><td> 이주 </td><td> 삼주 </td><td> 사주 </td></tr><tr><td> 제어 </td><td> 16.78 ± 1.05 </td><td> 16.91 ± 1.28 </td><td> 18.26 ± 1.23 </td><td> 19.31 ± 1.26 </td><td> 20.26 ± 1.15 </td></tr><tr><td> PhoP C </td> 16.89 ± 1.03 <td> 17.14 ± 1.19 </td><td> 17.43 ± 1.63 * </td><td> 18.68 ± 1.78 </td><td> 20.05 ± 1.11 </td></tr><tr><td> PhoP C 아브라 - </td><td> 16.91 ± 1.12 </td><td> 16.96 ± 1.39 </td><td> 17.06 ± 2.14 ** </td><td> 18.71 ± 2.18 </td><td> 20.15 ± 1.56 </td></tr><tr><td> PhoP C AvrA-/AvrA + </td><td> 16.94 ± 0.96 </td><td> 17.17 ± 1.02 </td><td> 17.63 ± 1.42 * </td><td> 18.44 ± 2.03 </td><td> 20.09 ± 1.17 </td></tr></tbody></table> * 그룹 P에게 &lt;0.05를 제어 비교 ** 그룹 P &lt;0.01를 제어 비교 표 2. 살모넬라균의 변종이 연구에 사용. <table border="1"><tbody><tr><td> 이름 </td><td> 설명 </td><td> 참조 또는 소스 </td></tr><tr><td> 살모넬라균 14028s </td><td> 야생 형 S. typhimurium </td><td> ATCC </td></tr><tr><td> PhoP C </td><td> 돌연변이 비 병원성 복잡한 조절기 </td><td> 밀러 외., 1990 </td></tr><tr><td> PhoP C 아브라 - </td><td> 아브라 - 돌연변이 </td><td> 콜리 - 하이엄스 외., 2002 </td></tr><tr><td> PhoP C AvrA-/AvrA + </td><td> PhoP C 보완 플라스미드 인코딩 아브라 ​​아브라 -로 </td><td> 콜리 - 하이엄스 외., 2002 </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Duan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((beta-Catenin+activity+negatively+regulates+bacteria-induced+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">beta-Catenin activity negatively regulates bacteria-induced inflammation.</a> Lab Invest. 87 (6), 613-624 (2007).</li>
<li>Barthel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretreatment+of+mice+with+streptomycin+provides+a+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+colitis+model+that+allows+analysis+of+both+pathogen+and+host%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Pretreatment of mice with streptomycin provides a Salmonella enterica serovar Typhimurium colitis model that allows analysis of both pathogen and host.</a> Infection and immunity. 71 (5), 2839-2858 (2003).</li>
<li>Miller, S. I., Mekalanos, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constitutive+expression+of+the+phoP+regulon+attenuates+Salmonella+virulence+and+survival+within+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+bacteriology%22%5BJournal%5D)">Constitutive expression of the phoP regulon attenuates Salmonella virulence and survival within macrophages.</a> Journal of bacteriology. 172 (5), 2485-2490 (1990).</li>
<li>Valdez, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nramp1+expression+by+dendritic+cells+modulates+inflammatory+responses+during+Salmonella+Typhimurium+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Nramp1 expression by dendritic cells modulates inflammatory responses during Salmonella Typhimurium infection.</a> Cell Microbiol. 10 (8), 1646-1661 (2008).</li>
<li>Woo, H., Okamoto, S., Guiney, D., Gunn, J. S., Fierer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+Salmonella+colitis+with+features+of+diarrhea+in+SLC11A1+wild-type+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A model of Salmonella colitis with features of diarrhea in SLC11A1 wild-type mice.</a> PLoS ONE. 3 (2), e1603-e1603 (2008).</li>
<li>Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+call-and-response%3A+how+Salmonella+learns+the+gospel+from+its+host%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Molecular call-and-response: how Salmonella learns the gospel from its host.</a> Trends Microbiol. 11 (6), 245-246 (2003).</li>
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<li>Townsend, P., Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Animal+Care+Policies+and+Regulations%3A+United+Kingdom%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Laboratory Animal Care Policies and Regulations: United Kingdom.</a> ILAR J. 37 (2), 68-74 (1995).</li>
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</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

이 시스템을 사용하려면, 그것은 동물을 gavage하는 방법을 알아보려면 연구자가 필요합니다. 박테리아 문화를 준비하고 쥐를 gavage 위해 우리는 세부 방법론을. 우리는 또한 위장 (GI) 트랙트에서 살모넬라균 지속성을 모니터링하는 방법을 보여줍니다. 포함이 프로토콜의 중요한 단계 <ol><li> 스트렙토 마이신 - 전처리 : 스트렙토 마이신 - 전처리 일부 공생 굿 식물 제거 및 살모넬라균 감염 2 민감한 쥐를 만들 수 있습니다. </li><li> 살모넬라균 gavage : 초보자를위한, gavage가 도전 수 있습니다. 솔루션 실수로기도에 주입하고 마우스 사망의 원인이되기 때문에 언젠가, gavage가 실패합니다. </li><li> 영구 세균성 식민지가 : 가까이 GI 트랙트의 모니터링 박테리아가 필요합니다. 마우스 배설물 문화뿐만 아니라,이게 맹장의 내용도 BBL CHROMagar 플레이트에서 살모넬라균 검출에 사용될 수 있습니...

<table><tbody><tr><td>HBSS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>ABCD1234</td><td></td></tr><tr><td>Luria-Bertani 배지</td><td>BD Biosciences</td><td>244610</td><td></td></tr><tr><td>피딩 니들</td><td>Popper &amp;amp; Sons, Inc.</td><td>7920</td><td></td></tr><tr><td>Streptomycin</td><td>MP Biomedicals</td><td>100556</td><td></td></tr><tr><td>BBL CHROMagar &lt;em&gt;Salmonella&lt;/em&gt;</td><td>BD Biosciences</td><td>214983</td><td></td></tr><tr><td>일회용 세포 도말기</td><td>Biologix Research Company</td><td>65-1010</td><td></td></tr></tbody></table>

만성의 살모넬라균 감염된 마우스 모델

Chronic Salmonella Infected Mouse Model

세균성 감염 마우스 모델은 감염, 염증, 면역학, 신호 전달, 그리고 tumorigenesis과 같은 분야를 공부를위한 강력한 모델 시스템입니다. 많은 연구자에 의해 유도된 대장염의 이점을 데리고<em&gt; 살모넬라균</em염증과 감염의 초기 단계에있는 연구&gt; typhimurium. 단, 몇 가지 보고서는 만성 감염에<em&gt; 생체내에</em&gt;. 와 쥐<em&gt; 살모넬라균</em위장관에서&gt; 지속적인 존재는 우리가 장기 호스트 세균 상호 작용, 신호 전달, 그리고 tumorigenesis를 탐험하실 수 있습니다. 우리는 함께 만성 세균 감염 마우스 모델을 설립<em&gt; 살모넬라균</em6 개월 이상 마우스 소장에서&gt; typhimurium의 식민지. 이 시스템을 사용하려면, 그것은 박테리아 문화를 준비하고 동물을 gavage하는 방법을 알아보려면 연구자가 필요합니다. 준비 박테리아 문화와 gavage 생쥐에 대한 우리는 세부 방법론을. 우리는 또한을 감지하는 방법을 보여줍니다<em&gt; 살모넬라균</em위장관에서&gt; 끈기. 전반적으로,이 프로토콜은 기본적으로 중요한 생물 학적 및 미생물 질문을 주소로 세균성 감염 마우스 모델을 사용하여 연구를 지원합니다.

영구와 만성 세균 감염 마우스 모델 수립<em&gt; 살모넬라균</em27주에 대한 소장에서&gt; typhimurium의 식민지.

세균 감염 마우스 모델은 감염, 염증, 면역학, 신호 전달 및 ... 등의 분야를 연구하는 데 있어 매우 강력한 모델 시스템입니다.

본 절차의 전체적인 목표는 만성 살모넬라 감염 마우스 모델을 구축하는 것입니다. 이는 먼저 살모넬라 용액을 준비함으로써 수행됩니다. 절차의 두 번째 단계는 마우스에게 스트렙토마이신을 가바지(gavage) 투여한 후 살모넬라를 투여하거나, 스트렙토마이신만 투여하는 것입니다.절차의 세 번째 단계는 마우스 분변에서 salmonella를 분리하고, BL chroma 플레이트를 사용하여 마우스 장 내의 salmonella 감염을 검출하는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 마우스의 체질량을 관찰 및 기록하고, salmonella 감염 이후의 활성도 변화를 확인하는 것입니다. 최종적으로, salmonella를 경구 투여(gavage)한 마우스의 장 내에 salmonella 감염이 성립될 수 있음을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.안녕하세요, 저는 로체스터 대학교 의과대학 Johnson 박사님 연구실의 Michelle P입니다. 저는 Sun 연구실 소속이며, 저는 Sun 연구실의 Y입니다. 오늘은 Alytic Lennar 감염 종양 모델을 구축하는 절차를 보여드리겠습니다.본 실험실에서는 숙주-박테리아 상호작용 신호 전달 및 종양 발생을 연구하기 위해 이 절차를 사용합니다. 이제 시작하겠습니다. 실험 전, 각 salmonella 균주에 맞게 실험 전체 과정에서 사용할 충분한 양의 Luria-Bertani 또는 LB 배지 플레이트를 준비하십시오.플레이트는 냉장 보관하여 수개월 동안 저장할 수 있습니다. 다음으로, 살모넬라 배양액을 준비합니다. -80 °C에서 냉동 보관된 살모넬라 스톡 바이알을 꺼내어 상온에서 해동한 후 살모넬라를 플레이트에 도말합니다.백금이를 버너 불꽃으로 가열한 후 해동된 박테리아 스톡에 담급니다. LB 플레이트의 상단 3분의 1 영역에 백금이를 지그재그 방향으로 앞뒤로 도포합니다. 백금이를 다시 화염 멸균하고 플레이트를 회전시킵니다.루프를 지그재그로 움직여 이전 스트리크와 교차시키며 플레이트의 두 번째 구역에 박테리아를 도포합니다. 이 과정을 한 번 더 반복합니다. 루프를 다시 화염 멸균합니다.루프가 한천에 박히지 않도록 주의하십시오. 플레이트를 37 °C 배양기에 넣고 하룻밤 동안 보관하여 콜로니를 성장시킵니다. 올바르게 수행되었다면, 살모넬라 플레이트의 적어도 한 구역에서는 개별 콜로니가 형성되어야 합니다.다음 날, 멸균된 이쑤시개나 백금이를 사용하여 LB 플레이트에서 클론을 선택하고, 12 mL 튜브에

Research

연구

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Biology

생물학

출처: Lo, B. C. 외 만성 살모넬라 감염으로 인한 장섬유증. J. Vis. 경험 (2019)이 영상은 스트렙토마이신 내성 살모넬라 티피무리움 에 감염된 마우스 모델에서 박테리아 부하를 정량화하는 과정을 보여줍니다. 안락사와 멸균 해리 후에는 맹장과 비장 조직을 채취하여 박테리아를 방출하기 위해 강철 구슬로 균질화하고, 연속적으로 희석합니다. 희석액은 선택적 한천에 도판되며, 가시적 군락을 세기 위해 장 및 전신 부위의 조직당 세균 부하를 추정합니다.

만성 장 감염 마우스 모델에서 조직 세균 부하의 정량화

출처: Lenhard A. 외. 바이러스 공동 감염 시 폐 렴 구균이 집착자에서 병원체로 전환되는 마우스 모델은 연령에 따른 악화된 질병을 재현합니다. J. Vis. 경험 (2022)이 영상은 병원성 박테리아와 바이러스에 공동 감염된 쥐의 폐 처리 과정을 보여줍니다. 폐 조직을 다지고 균질화하며 플레이트링을 하면 박테리아 부하를 정량화하여 폐로의 박테리아 확산과 질병의 심각도를 알 수 있습니다.

쥐 공동 감염 모델에서 박테리아 열거를 위한 감염 조직 처리

Citrobacter rodentium 감염이 장의 세균 감염을 공부뿐만 아니라 마우스의 면역 반응 및 대장염를 개최 할 수있는 중요한 모델을 제공합니다. 이 프로토콜은 장벽 무결성, 병원체 부하와 손쥐 전염성 대장염에 대한 병원체 및 호스트 공헌의 철저한 특성을 허용하는 조직 학적 손상의 측정을 설명합니다.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; 마우스 모델 : 감염성 대장염에 대한 공부 병원체 및 호스트 기부

이 논문은 사용하는 마우스의 경구 감염에 대한 새로운 방법을...

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동물 모델은 만성 염증의 발달에 기여하는 호스트와 병원체의 특정 메커니즘을 규정하는 매우 중요한 도구로 입증되었다. 여기서 우리는 로컬 및 전신성 염증 부위에서의 진행을 평가하기 위해 인간 병원체 Porphyromonas 진지 발리 및 세부 방법론 경구 감염 마우스 모델을 설명한다.

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의 Cefoperazone 처리 된 마우스 모델 임상 관련<em&gt; 클로스 트리 디움 디피</em&gt; 스트레인 R20291

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이 논문은 바이러스 감염 동안 폐렴구균이 무증상 집락 상태에서 질병을 유발하는 병원체로 전환하기 위한 새로운 마우스 모델을 설명합니다. 이 모델은 질병 진행의 여러 단계 동안 다양한 숙주에서 다미생물 및 숙주-병원체 상호작용을 연구하는 데 쉽게 적용할 수 있습니다.

바이러스 동시 감염 시 콜로니자에서 병원체로 Streptococcus pneumoniae 의 전환을 위한 마우스 모델은 연령 악화 질병을 요약합니다.

여기서는 Klebsiella pneumoniae 를 비강 주입하여 마우스 패혈증 면역억제 모델을 구축하는 프로토콜을 제시하고, 다양한 지표를 통해 모델을 검증하였습니다.

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