Name: 쥐 중간 대뇌 동맥의 폐색의 Endovascular 봉합사에 의해 초점 대뇌 국소 빈혈 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-05T17:15:00.000+00:00
Duration: 13 min 50 s
Description: 배우세요 쥐 중대뇌동맥 내혈관 폐색을 통한 국소 뇌허혈 모델 제작 방법을. 이 기법은 뇌졸중 연구 및 허혈성 뇌손상 메커니즘 규명에 활용됩니다.

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우리는 베스 라우흐와 위스콘신 대학의 자기 공명 이미징을위한 작은 동물 이미징 시설을 주셔서 감사합니다. 위스콘신 - 매디슨 대학에서 신경 외과의학과이 작품에 대한 자금을 제공했습니다.

MCAO 랫 모델 Presurgical 준비 무균 기술은 모든 생존 수술 절차를 사용해야합니다. 상업 살균제와 함께 수술 작업 표면을 소독하고 autoclaving하여 악기, 커튼, 거즈, 면봉, 봉합, 그리고 메스 블레이드 살균 외과 팩을 준비합니다. 수술 마스크, 헤어 보넷와 멸균 장갑을 착용하여야한다. Germinator 건조 구슬 살균기는 여러 쥐 수술을 한 세션 동안 할 수있다면 절차를 사이에 수술 악기를 resterilize하는 데 사용됩니다. 흡수성 패드 아래에 Prewarm 물 외피 homeothermic 담요과 장소 수술 중 쥐 저체온증을 방지하기 위해서. <ol><li> 유도 챔버에 자발적 신경성 쥐 (또는 원하는 다른 쥐의 변형) 장소와 함께 5% isoflurane (마취 기계는 1.0 L / 분, O 2 및 1.0 L / 분, N 2 O로 설정되어야합니다.) 마취를 유도 마취를 유지하기 위해 isoflurane 1~2%을 낮춥니다. </li><li> 양쪽 눈 모두에 인공 눈물 연고를 적용합니다. </li><li> 가위 (# 10 블레이드와 오스터 A5)를 사용하여 예비 절개 사이트 넘어 목구멍과 왼쪽 목에 영역을 쉐이브. </li><li> 거즈 패드에 Betadine을 적용하고 바깥쪽으로 나선형으로, 수술이 지역의 중심부터 피부를 소독. 비슷한 패턴의 패드를 움직이는 70 %의 에탄올을 포함하는 멸균 거즈 패드로 헹굼. 세 사이클의 총 단계를 모두 반복합니다. </li><li> 예비 절개 사이트를 따라 subcutaneously 0.5 % bupivacaine의 0.2 ML를 주사. </li><li> 무균 수술 드레이프와 살균 stockinette 또는 커버 플레이스 쥐. </li></ol> MCA의 과도 폐색 <ol start="7"><li> 운영 현미경, 복부 정중선 절개가 수행되고 표면 근막을 해부합니다. </li><li> 마지막으로 sternomastoid 근육, digastric (쉽게 그 반짝 이는 흰색 건의 부분을 통해 식별),기도를 통해 정중선 자리 sternohyoid, : 표면 근막 아래,이 삼각형을 형성 왼쪽 세 근육에 선의 조직입니다. </li><li> 주의 샤프하고 무딘 절개는 경동맥 (독점 무딘 절개가 실수로 조직 손상을 최소화하기 위해 일부로 선호있을 수 있습니다)를 파악하기 위해 삼각형 내에서 수행됩니다. , 외부 내부 및 일반 경동맥 동맥은 (ECA, ICA, CCA) 노출됩니다. 경동맥은 크고 가시 펄스입니다. 미주 신경은 일반적으로 내부 경동맥 동맥 모두의 측면을 따라 자, 이제 볼 수 있으며, 크게 일반 및 내부 경동맥 동맥에서 해부하는 것입니다. </li><li> 두 ECA의 지점은 다음 첫 번째 분기 medially 제목 두 번째 지점은 옆으로 향하고 급격하게 해부하고 있습니다. 두 가지가 큰 혈관을 동원 더욱 쉽게 허용하는, 불로 지졌죠 및 절단됩니다. </li><li> ECA는 이제 더 rostrally 해부하는 것입니다. 설골을가 발생 될 수 있으며이 주동이의 절개의 범위를 제한합니다. 외부 경동맥은 6-0 실크 봉합사로 distally 최대한 떨어져 묶여 있습니다. </li><li> 또 다른 6-0 실크 봉합사는 ICA와 분기점 근처 ECA 주위에 느슨하게 배치됩니다. 폐색에 사용될 intraluminal 봉합 나중 단계에서 이곳을 거치는 것입니다로 혈관을 막다하지 않도록하십시오. </li><li> Microsurgical 클립은 분기점 근처 일반 및 내부 경동맥 동맥에 표시됩니다. </li><li> 초기 부분 arteriotomy은 외부 경동맥에있는 두 개의 실크 봉합사의 유대 사이에 생성됩니다. </li><li> microsurgical 클립이있는 CCA쪽으로 ECA 루멘으로의 둥근, 실리콘 코팅 팁에서 꼬임 2.0 cm로 4-0 monofilament 나일론 봉합사의 2.2 -3.0 cm 길이를, 아래 소개합니다. 이러한 봉합은 (Doccol 공단, 레들랜즈, CA, 미국) 상업적으로 사용할 수 있습니다. 선거 유세 및 위치 ECA와 ICA의 분기점 아래의 그루터기를 무료로 ECA의 나머지 부분을 (부분 arteriotomy의 사이트에서) 절단, 이것은 더 쉽게 intraluminal 봉합이 ICA에 슬라이드 수 있습니다. </li><li> intraluminal 나일론 봉합사를 안전하고 출혈을 방지하고, 다음 ICA에서 microvascular 클립을 제거하는 ECA 스텀프 주변 실크 봉합사를 조이십시오. 출혈를 확인하기 위해 그것을 제거하기 전에 천천히 클립을 엽니다. </li><li> 중간 대뇌 동맥 (MCA)에 ECA에서 ICA 루멘으로 나일론 봉합사를 발전 계속합니다. 이 길이는 일반적으로 18-20밀리미터하고 삽입하기 전에 봉합에 꼬임을 배치하는 이유입니다. 나일론 봉합사의 변수 길이가 삽입되면 저항이 느낄 수 있습니다. 이 많은 선박 외부 여전히 현재 나일론 봉합사의가 발생하면, 그것은 봉합 가능성이 (아래 참고 참조) pterygopalatine 동맥을 입력을 나타냅니다. 후퇴와 곡선 봉합사가 약간 더 medially 실행되는, ICA 따라 계속합니다. 또한, PPA의 기원에 절개가 더 나은 경로를 시각화하기 위해 할 수 있습니다intraluminal 필라멘트니다. 저항이에 있으며 2cm kinked 위치 이후에 생각 때까지 나일론 봉합사를 삽입 계속합니다. 이 시점에서, intraluminal 봉합은 MCA의 출처를 차단했습니다. MCA 폐색은 레이저 도플러 유량계를 (한 장비 소스 재료 테이블을 참조)를 사용하여 지역 대뇌 혈류의 감소를 모니터링하여 확인하실 수 있습니다. 또한 intraluminal 봉합이 선박의 사고 삽관법을 피하기 위해, 원하는 경우 ICA의 해제 pterygopalatine 동맥의 기원이 직접 떨어져 묶여있을 수 있습니다. </li><li> 타이머 및 기록 폐색 시작 시간을 시작합니다. </li><li> CCA에서 microclip를 제거합니다. </li><li> 3-0 실크 봉합사 (간단한 연속 패턴 reperfusion에 대한 재조사 용이하게합니다)와 함께 신속하게 절개를 (진피, panniculus carnosus, 피하 조직 층) 닫고 조심스럽게 복구 케이지에 쥐를 놓습니다. 코와 입 주위 케이지 바닥 침구 소재 및 마취에서 모니터 복구 무료입니다 있는지 확인합니다. </li></ol> MCA의 혈류의 복원 (reperfusion) <ol start="21"><li> 폐색 기간이 종료해야 직전, 쥐를 다시 마취 Betadine 70 %의 에탄올 (3주기, 이전과) 함께 절개 사이트를 소독하고 닫는 봉합을 제거하여 절개를 다시 엽니다. </li><li> 이전처럼, CCA에 microclip 놓으십시오. </li><li> 봉합사의 끝이 ICA를 통해 볼 때까지 ICA에서 occluding의 봉합의 파트를 철회가. 완전히 ICA / ECA에서 봉합사를 제거하지 마십시오! </li><li> intraluminal 봉합사의 끝을 위 ICA에 microclip 놓으십시오. </li><li> 완전히 occluding의 봉합사를 제거하고 단단히 ECA 스텀프를 묶을. 폐색의 기록 엔드 (reperfusion 시작) 시간. </li><li> ICA에서 microclip를 제거합니다. </li><li> CCA에서 microclip를 제거합니다. </li><li> 멸균 생리 여러 방울과 함께 지역을 축축하게하다 간단한 중단 패턴을 사용하여 3-0 실크 봉합사와 절개의 레이어를 (진피, panniculus carnosus, 피하 조직) 닫습니다. </li><li> 복막 공간에 (당신의 제도적 지침에 따라 또는 기타 적절한 사후 수술 진통제) 0.05 밀리그램 / kg buprenorphine을 관리할 수 있습니다. </li><li> prewarmed 생리 intraperitoneally의 5cc를 주입. 이것은 복구 단계에서 수화를 제공합니다. </li><li> 마취에서 암흑의 복구를 모니터링합니다. </li><li> 쥐가 회복되면 꼬리로 쥐를 개최하고 쥐가 양쪽을 설정할 수 있는지 여부를 관찰하여 경색의 행동 표시를위한 시험. 한쪽으로 컬링은 예정입니다. 간단한 점수 비늘이 (토론 참조) 초기 이후 경색 behavorial 기능을 기록하는 데 사용할 수 있습니다. </li><li> buprenorphine (위와 동일 투여)의 추가 주사는 통증의 24 시간을위한 모든 6-8시간 부여해야합니다. 동물 불편의 흔적을 보여주는 경우 진통제를 확장합니다. </li></ol> 대표 결과 <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 1"> 그림 1. endovascular 봉합사에 의해 중간 대뇌 동맥의 폐색이. 쥐의 두개골 순환 시스템의 단순화 그림은 MCA의 출처를 occluding 실리콘 코팅 intraluminal 봉합과 함께 표시됩니다. 왼쪽 ECA의에서 OA 및 ST 지점은 출혈도 잡았 및 ECA 그루터기 주위 봉합의 넥타이는 장소에 intraluminal 봉합을 보유하고 있습니다. ACA, 앞의 대뇌 동맥, BA, 두개골 기저부의 동맥, CCA, 일반 경동맥, ECA, 외부 경동맥, ICA, 내부 경동맥, MCA, 중간 대뇌 동맥, OA, 후두 동맥, PCA, 후부 대뇌 동맥, PComA, 사후 통신 동맥, PPA, pterygopalatine 동맥, ST, 우수한 갑상선 동맥. 사사키 외. 4 리 3 적응 그림. <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 쥐의 뇌 24 시간 코로나 섹션의 대표 자기 공명 이미징 1 시간 과도 MCAO 후. 초점 국소 빈혈을 동반 뇌 부종은 T2 - 가중 MRI 이미지 시각이다. 경색 영역 T2 이미지 (밝은) hyperintense 나타납니다. 비슷한 경색 패턴은 이러한 확산 - 가중 이미지와 5 단계를 매핑 겉보기 확산 계수와 같은보다 고급 MRI 기술을 볼 수 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig3.jpg" alt="그림 3" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="그림 3"> 그림 3. 쥐 두뇌의 대표 코로나 섹션 1 시간 과도 MCAO 후 TTC 24시간 물들일. TTC의 얼룩은 그림 2에 표시된 것과 같은 쥐의 대뇌 피질과 striatum의 흰색 (흠없는) infarcted 영역을 보여줍니다. 결정 최종 경색 영역 histologically T2 병변보다 약간 작은 수 있지만 초점 허혈성 병변의 일반적인 패턴이, MRI T2 - 가중 영상에서 본 것과 유사한입니다.

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저자는 공개하지 충돌 관심이 없습니다. 이 프로토콜은 실험 동물의 사용을위한 건강 지침 국립 연구소에 의해 의학 및 공중 보건과 abides의 위스콘신 - 매디슨 대학 학교 기관 애니멀 케어 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다.

대뇌 국소 빈혈의 설치류 모델은 글로벌 또는 초점과 같은 가역 또는 돌이킬으로 분류하실 수 있습니다. 우리는 인간의 뇌졸중 환자에서 다음과 같은 recanalization을 발생할 수 reperfusion 부상을 모방하기 위해 가역 초점 국소 빈혈 모델을 사용합니다. 동안 쥐의 주 인간, 윌리스와 일관성이 경색 볼륨 6 leptomeningeal anastomoses 결과의 서클로 인한 광범위한 intracranial 부수적인 순환과 유사한 두개골 순환의 장점. 경색의 크기는 70-10 normotensive 쥐에 비해 초점 대뇌 국소 빈혈에 노출 SHRs 더욱이기 때문에 우리는 저절로 신경성 쥐 (SHR) 변형을 사용합니다. SHRs의 행정 유도도 더 일관성 있고 다른 일반적으로 사용되는 종자 11보다 사망률을 생성할 수 있습니다. 변동 경색 볼륨의 다양성에 추가할 수 있기 때문에뿐만 아니라, 생리적 매개 변수, 수술 전반에 걸쳐 모니터링해야합니다, 이러한 매개 변수는 허혈성 부상에게 2,12 증명했다 수있는 혈압, 동맥 O 2, CO 2 레벨, 저체온증과 고혈당증를 포함 . 그것이 필수적인 수술 중에 thermoregulatory 가열 패드에 밀고를 삽입, 따라서의 연결 허혈성 손상의 정도를 완화하고, 저체온 수 있기 때문에 특정 관심사입니다. 우리는 상업 경색 크기 13-15의 일관성을 향상하기 위해이 절차에 실리콘 코팅 봉합을 준비하는 회사들도 있습니다. 전통적으로, MCA를 막다하는 데 사용 intraluminal 봉합은 불꽃 - 반올림 3-0 나일론 봉합사 팁 또는 코팅 작은 구슬 접착제 16로 봉합 팁를 뜨거운 아교 총을 사용하여 준비하고 있습니다. 이러한 절차는 특정 암흑의 혈관 직경에 맞는 치료를 찾는 전에 폐색에 여러 번 시도해야 할 수도 있습니다, 따라서 다양한 팁 직경과 함께 봉합을 생산합니다. 이 동영상에 설명되어있는 MCAO 방법에 대한 자세한 차이는 부수적인 혈액 흐름 6,9을 줄이기 위해 순수한 대뇌 피질의 경색 17 및 MCA와 ipsilateral 일반적인 경동맥의 동시 폐색을하기 위해 lenticulostriate 지점을 살려주는 더 말초 폐색을 포함합니다. 뇌졸중의 기능적 효과는 특정 작업에 적자가 단순한 점수 규모에 반영하는 행동 테스트의 다양한 사용 평가하실 수 있습니다. 예를 들어, Bederson 외. 18 강화된 신체 위치, 수평 밀어 비대칭 저항, 그리고 오픈 필드 돌고 행동 forelimb 굴곡의 범위에 신경 점수 등급 쥐를 개발하였습니다. 고가와 다른 적자를 전시없는 경우 바닥에 두 앞발을 확장 쥐 평점 있었다 &quot;일반 (0)&quot;, contralateral forelimb 굴곡과 쥐에만 &quot;보통 결손 (1)&quot;로 분류되었다 반면. &quot;심한 학년 2&quot;쥐가 측면 강제로 contralateral 측면에 감소 저항을 표시하고 &quot;심한 학년 3&quot;쥐 또한 행동을 휘감은에 종사. 낮은 등급 행동 적자는 항상 다음 높은 학년 관찰 (예, 등급 2도 forelimb 굴곡을 표시 3 동물) 및 이러한 점수는 경색의 크기 18 차이 예측 하였다. 따라서, 이러한 단순한 채점 시스템은 행정의 기능 적자의 급속한 일관성 세미 양적 평가 수 있습니다. 대뇌 경색의 범위 측정은 일반적으로 TTC, cresyl 바이올렛 (Nissl는 얼룩) 또는 hematoxylin 및 eosin를 사용하여 조직 손상에 대한 histological 염색법에 의해 수행됩니다. 를 포함하여 확산 - 가중 폐색 후, 조직을 수확 필요없이 각각의 쥐의 경색 볼륨의 결정에 대한 허용 초기 시간 지점에서 경색을 시각화하기 위해 MRI. 자기 공명 이미징 기술, 이미징 MCAO 후 밀고 있지만 이전에 치료 관리는 변화의 혼란함을 주죠 효과를 감소, 모든 실험 및 제어 동물이 시작 유사한 뇌졸중을 경험하는 조사의 신뢰를 제공, 이것은 스트로크에 따라 neuroprotective 치료의 효능을 결정하기위한 연구에 특히 가치가있다 뇌졸중 유도 인치

<table><tbody><tr><td>4-0 나일론 봉합사</td><td>Doccol Corporation</td><td></td><td>실리콘 코팅 길이 2-3 mm, 팁 직경 0.39 mm</td></tr><tr><td>자발성 고혈압 쥐(SHR)</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td>290-300 g, 수컷</td></tr><tr><td>Gaymar T/Pump 체온 조절 펌프 및 패드</td><td>Gaymar Industries</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vetroson V-10 양극 전기수술기</td><td>Summit Hill Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Germinator 500 유리 비드 멸균기</td><td>CellPoint Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vasamedics Bpm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;Laserflo 혈류 모니터</td><td>TSI Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

쥐 중간 대뇌 동맥의 폐색의 endovascular 봉합사에 의해 초점 대뇌 국소 빈혈 모델

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

행정 장애 1 전 세계 성인 사망의 세 번째 주요 원인의 주요 원인이다. 인간의 뇌졸중에서 높은 변수 임상 상태가 존재, 초점 국소 빈혈의 동물 모델의 개발에, 그러나 실험적으로 유도 경색 볼륨의 재현성을 달성하는 것은 필수적입니다. 쥐는 비교적 낮은 동물 축산 비용과 인간 2,3의하기 위해 두개골 순환의 유사성으로 인해 뇌졸중에 널리 사용되는 동물 모델입니다. 인간에서는, 중간 대뇌 동맥 (MCA)가 가장 일반적으로 뇌졸중 syndromes와 MCA 폐색 (MCAO)의 여러 방법에 영향을받습니다 것은 동물 모델에서이 임상 증후군을 모방하기 위해 설명되었습니다. recanalization은 일반적으로 폐색 기간 후에 인간, reperfusion에 급성 뇌졸중에 따라 발생하기 때문에 이러한 모델의 많은에 포함되었습니다. 이 비디오에서는, 우리는 저절로 신경성 쥐 (SHR)에서 일시 endovascular 봉합 MCAO 모델을 보여줍니다. 실리콘 팁 코팅 필라멘트가 reperfusion 다음 60 분 동안 MCA의 기원에 intraluminally 배치됩니다. 최적의 폐색 기간이 같은 위스타이나 스프 라그 - 돌리 등 다른 쥐의 변종에 따라 다를 수 있습니다. 쥐에서 뇌졸중의 여러 행동 지표가 표시됩니다. 초점 국소 빈혈은 T2 - 가중 자기 공명 이미지를 사용하여 확인 24 시간 MCAO 후 2,3,5 - triphenyltetrazolium 염화물 (TTC)와 두뇌 섹션을 얼룩에 의해. 것입니다

쥐에서 허혈성 뇌 손상 외과 유도는 뇌졸중 연구 널리 사용되는 모델입니다. 여기서 우리는 중간 대뇌 동맥의 폐색에 의해 초점 대뇌 국소 빈혈의 유도를 보여줍니다. histological 얼룩 및 자기 공명 영상에 의해 발생하는 경색의 시각화도 표시됩니다.

쥐 중간 대뇌 동맥의 폐색의 Endovascular 봉합사에 의해 초점 대뇌 국소 빈혈 모델

뇌졸중은 전 세계 성인으로 하여금 장애를 유발하는 가장 주요한 원인이며, 세 번째로 높은 사망 원인입니다1. 인간의 뇌졸중에서는 매우 가변적인...

본 영상에서는 쥐의 중대뇌동맥을 혈관 내 폐쇄하여 뇌경색을 유도하는 방법을 시연하겠습니다. 이는 뇌졸중 연구에서 널리 사용되는 동물 모델로, 대뇌 피질뿐만 아니라 기저핵과 시상하부를 포함한 피질하 구조에 허혈을 유발합니다. 이 모델을 통해 영구적 또는 일시적 뇌허혈을 모두 구현할 수 있습니다.강내 봉합사를 그대로 두느냐 또는 일정 기간 후에 제거하느냐에 따라 달라집니다. 뇌허혈은 세포 사멸이 일어나는 경색 중심핵과 일부 세포 회복이 가능할 수 있는 반음영이라 불리는 허혈 주변 영역을 생성합니다. 시작하기 전에, 우리가 수행할 단계들을 잠시 설명하겠습니다.여기 쥐의 두개내 순환계의 단순화된 도식도가 있습니다. 이번 수술에서는 총경동맥(common carotid artery, CCA)이 외경동맥(external carotid artery, ECA)과 내경동맥(internal carotid artery, ICA)으로 갈라지는 분지점 근처의 왼쪽 경동맥을 노출시킬 것입니다. ECA의 두 작은 분지인 후두동맥(occipital artery)과 상갑상선동맥(superior thyroid artery)은 양극 응고법(bipolar coagulation)을 사용하여 결찰하고, ECA는 이 두 분지의 원위부에서 실크 봉합사로 묶어 폐쇄합니다. 그 후 총경동맥과 내경동맥에 미세혈관 클립을 장착합니다.그 다음, 실리콘 코팅 팁이 달린 나일론 단사 봉합사를 ECA의 절개창을 통해 삽입하여 ICA 상단으로 유도합니다. ICA에서 마이크로 클립을 제거하기 전, 이 혈관 내 봉합사를 실크 봉합사를 사용하여 ECA 주변에 가볍게 묶어 고정합니다. 그 후, 실리콘 팁이 중대뇌동맥(MCA)의 기시부를 폐쇄할 때까지 혈관 내 나일론 봉합사를 약 2 cm 전진시킵니다.두 번째 마이크로 클립을 CCA에서 제거하고 폐쇄 시간을 측정합니다. 이제 전체적인 절차에 대한 개요를 살펴보았으므로, 수술 단계로 넘어가겠습니다. 소속 기관의 동물 관리 지침에 따라 모든 수술 절차와 동일하게 쥐를 준비합니다. 유도 단계에서는 산소 1 L/min 및 아산화질소 1 L/min의 유량으로 5% isof fluorine을 사용하여 쥐를 마취시키며, 유지 단계에서는 isof fluorine 농도를 1~2%로 낮춥니다.마취 평면이 달성되면, 양쪽 눈에 인공눈물 연고를 도포하고 클리퍼로 목 부위를 제모합니다. 그다음 베타딘 용액과 70%ethanol로 해당 부위를 소독합니다. 이 과정은 베타딘과 70%ethanol 린스를 총 3회 반복하여 수행해야 합니다.붉은색 개체를 멸균된 스타킹에 넣어 온도 조절 담요 위에 놓습니다. 저체온증을 방지하기 위함입니다. 15 mL 원심 분리관을 개체의 머리 아래에 밀어 넣어 목 부분을 약간 들어 올려주면 도움이 됩니다.이는 나중에 경동맥을 노출시키는 데 도움이 됩니다. 마지막으로, 수술 현미경 하에서 예상 절개 부위를 따라 0.5% 진통액 0.2 mL를 피하 주사하여 수술 후 통증을 완화합니다. 10번 메스 날을 사용하여 정중선 절개를 실시합니다.나머지 해부는 동물의 정중선 왼쪽에서 진행합니다. 표층 근막을 통해 해부를 시작하십시오. 이는 둔성 해부와 예리한 해부를 병행하여 수행합니다.광범위한 선 조직이 외측으로 보이며, 커다란 흉골설근이 정중선 상단에 위치합니다. 면봉을 사용하여 선 조직을 외측으로, 흉골설근을 내측으로 박리하여 기관을 노출시킵니다. 선 조직 아래에는 악이복근과 흉골유돌근이 보이며, 이 근육들은 정중선의 흉골설근과 함께 정점이 원으로 표시된 미세한 삼각형 모양을 형성합니다.이 삼각형 영역 내에서 경동맥까지 박리를 계속합니다. 미세 가위(micro scissors)를 사용하여 근육을 덮고 있는 근막을 절개합니다. 이렇게 하면 근육을 견인하여 하부의 혈관들을 노출시킬 수 있습니다.면봉을 사용하여 근육을 견인하고 공통 외경동맥, 외경동맥 및 내경동맥이 보이도록 합니다. 외경동맥(ECA)의 분지들이 노출될 때까지 작업을 계속합니다. 이때 혈관들을 세밀하게 예리한 박리로 분리해야 합니다.이 단계들의 목적은 하부의 결합 조직으로부터 ECA와 ICA를 분리하는 것입니다. ECA를 계속해서 박리하십시오. 이때 설골(hyoid bone)이 나타날 수 있으며, 이로 인해 주둥이 쪽(rostral)으로의 박리 범위가 제한될 수 있음에 유의하십시오.흰색으로 보이는 미주신경이 총경동맥과 내경동맥의 외측을 따라 주행하는 것이 확인되며, 총경동맥과 내경동맥을 예리하게 박리하였습니다. 외경동맥에서 분지되는 두 개의 가지 또한 예리하게 박리합니다. 가쪽으로 향하는 첫 번째 분지는 후두동맥이며, 안쪽으로 향하는 두 번째 분지는 상갑상선동맥입니다.ECA에서 분지되는 첫 번째와 두 번째 분지를 모두 소작한 후 절단합니다. 이 분지들을 절단하면 혈관을 이동시키기가 훨씬 수월해집니다. 이후 시술 과정에서 실크 봉합사를 사용하여 ECA를 가능한 한 원위부에서 단단히 묶어줍니다.총경동맥 분지점의 근위측 외경동맥(ECA) 주변에 실크 봉합사를 느슨하게 묶습니다. 중대뇌동맥 폐쇄에 사용되는 혈관 내 봉합사와 달리, 이 결찰선으로는 혈관을 폐쇄하지 않도록 주의하십시오. 외경동맥의 이 부분을 통해 진입하여 총경동맥과 내경동맥 모두에 미세혈관 클립을 장착할 예정입니다.해당 위치는 ECA의 기시부에서 어느 정도 떨어진 곳입니다. 다음으로, ECA의 두 실크 봉합사 결찰 사이의 동맥을 부분 절개합니다. 소량의 잔류 혈액이 배출될 수 있으나, 과도한 출혈이 발생한다면 미세혈관 클립을 이용한 클램핑이 제대로 이루어지지 않았을 가능성이 큽니다.이 경우, 클립 날에 하부 조직이 끼어 완전히 닫히지 않는 일이 없도록 주의하십시오. 다음 단계는 3cm 길이의 단사 나일론 봉합사를 ECA에 삽입하는 것입니다. 실리콘 코팅된 팁에서 2cm 떨어진 지점에 봉합사를 표시해 두면 유용합니다.이 봉합사는 시판 제품이며, 사용할 쥐의 연령과 체중에 따라 팁 직경과 실리콘 코팅 길이를 원하는 사양으로 맞춤 설계할 수 있습니다. 300 g 쥐의 경우, 4-0 나일론 봉합사에 0.39 mm의 팁 직경과 2~3 mm의 실리콘 코팅 길이를 사용합니다. 폐쇄용 나일론 봉합사를 ECA 내강을 통해 총경동맥 방향으로 삽입하십시오.내강 나일론 봉합사를 고정하고 출혈을 방지하기 위해 외경동맥(ECA) 단단 주위의 실크 봉합사를 조입니다. ECA의 남은 부분을 절단하여 단단을 분리하고, ECA 단단을 내경동맥(ICA)과 대략 일직선이 되도록 분지점 아래에 배치합니다. 이렇게 하면 내강 봉합사가 내경동맥 내부로 더 쉽게 미끄러져 들어갈 수 있습니다.ICA에서 미세혈관 클립을 제거합니다. 완전히 제거하기 전에 출혈 여부를 확인하기 위해 클립을 천천히 여는 것을 잊지 마십시오. 나일론 봉합사가 중대뇌동맥에 도달할 때까지 ICA 내강 안으로 계속 전진시킵니다.이 길이는 보통 약 2cm 정도이며, 이 때문에 삽입 전 봉합사에 표시를 해두는 것입니다. 가변적인 길이의 나일론 봉합사를 삽입한 후 저항이 느껴질 수 있는데, 만약 나일론 봉합사의 상당 부분이 여전히 혈관 외부에 있는 상태에서 저항이 발생한다면, 이는 봉합사가 구개동맥(tego palatine artery)으로 진입하고 있음을 나타낼 가능성이 높습니다. 이 경우, 봉합사를 뒤로 뺀 다음 약간 곡선 형태로 굽혀 더 즉각적으로 주행하는 ICA를 따라 계속 진행하십시오.이 두 비교 사진에서 ICA 내강 내 봉합사의 위치 변화를 확인하십시오. 봉합사의 대부분이 삽입되고 다시 저항이 느껴질 때까지 ICA를 통해 봉합사를 계속 전진시킵니다. 내강 내 봉합사가 MCA의 기시부를 차단하였습니다.타이머를 시작하고 폐쇄 상태를 기록하십시오. 시작 시간입니다. CCA에서 다른 미세혈관 클립을 제거하고, 절개 부위를 빠르고 조심스럽게 봉합하십시오.붉은색 표시 쥐를 회복 케이지에 넣습니다. 폐쇄 기간이 끝나기 직전에 코와 입 주변의 케이지 바닥에 깔짚이 없는지 확인합니다. 쥐를 마취시키고 봉합사를 제거하여 절개 부위를 다시 엽니다. 이전과 동일하게 CCA에 마이크로 클립을 장착합니다.봉합사 끝이 ICA를 통해 보일 때까지 ICA에서 폐쇄 봉합사를 부분적으로 끌어냅니다. 아직 봉합사를 완전히 제거하지 마십시오. 그 다음, 혈관 내 봉합사 위치 위쪽의 ICA에 또 다른 마이크로 클립을 배치하고 폐쇄 봉합사를 완전히 제거한 뒤 ECA 그루터기를 묶어 마무리합니다.재관류 시작 시간을 기록합니다. ICA와 CCA에서 마이크로 클립을 제거하고, 해당 부위를 멸균 식염수 몇 방울로 적신 후 봉합사로 절개 부위를 폐쇄합니다. 수술 후 추가 진통을 위해 체중 kg당 0.05 mg의 용량으로 buprenorphine을 투여합니다.또한 회복 단계 동안 수분을 공급하기 위해 생리식염수 5 mL를 복강 내 투여합니다. 쥐가 마취에서 회복되면, 꼬리를 잡고 쥐가 양쪽으로 모두 회복할 수 있는지 관찰하는 거상 신체 스윙 테스트(elevated body swing test)를 통해 뇌경색의 행동학적 징후를 확인하며, 이때 예상대로 한쪽으로만 몸을 웅크리는지 관찰합니다. 뇌졸중 증상을 보이는 쥐는 오픈 필드(open field) 이동 시에도 한쪽 방향으로만 원을 그리며 돌 수 있습니다.여기에서는 자발적 고혈압 쥐에서 60분 동안 MCA 폐쇄를 유도한 결과를 보여줍니다. MCAO 24시간 후에 자기공명영상을 촬영하였으며, 두 가지 가중치 영상이 제시되어 있습니다. 이 쥐는 피질과 선조체 영역 모두를 포함하는 광범위한 경색이 발생했습니다.MRI 상의 고신호 강도 영역은 노란색으로 강조 표시되었으나, 여기서는 그 결과를 보여주지 않습니다. MRI로 시각화된 경색 부위는 확산 강조 영상 및 겉보기 확산 계수 지도를 통해 추가로 분석할 수 있습니다. 경색 부위는 신선하게 분리된 뇌 절편을 trien tetra allium chloride 또는 TTC로 조직학적 염색을 하여 확인하며, 살아있는 조직의 dehydrogenase는 기질을 불용성 적색 염료로 전환시킵니다.따라서 경색 부위는 염색되지 않은 상태로 남아 흰색으로 나타납니다. 경색 크기는 랫드 계통 및 동물 크기를 포함한 여러 요인에 의해 영향을 받을 수 있음에 유의하십시오. 당사는 frogg, dolly 또는 wistar 랫드와 같이 일반적으로 사용되는 다른 계통보다 더 일관된 경색 크기를 나타내는 자발성 고혈압 랫드를 사용합니다.혈관 직경의 편차를 줄여 MCAA 폐쇄의 효율성을 일정하게 유지하기 위해서는 표적 쥐 무게를 표준화하는 것이 중요합니다. 이 영상이 귀하의 실험실에서 MCA 폐쇄 기술을 수행하는 데 도움이 되었기를 바랍니다. 시청해 주셔서 감사하며, 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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연구

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Neuroscience

신경과학

우리는 비디오 intraluminal monofilament를 사용하여 성인 마우스의 중간 대뇌 동맥 폐색을 생산하는 방법을 보여줍니다. 또한 2,3,5 - triphenyltetrazolium 염화물 (TTC) 염색법에 의해 대뇌 경색의 범위를 평가하는 방법을 보여줍니다.

중간 대뇌 동맥 폐색의 마우스 모델

이 비디오는 허혈성 뇌졸중을 모델링하기 위해 노화된 쥐에서 총경동맥 또는 CCA 결찰술을 사용하여 영구 원위 중대뇌동맥 폐색(MCAO)을 수행하는 절차를 보여줍니다. 이는 뇌로 가는 혈류를 차단하여 신경 세포의 사멸로 이어지며 뇌졸중 메커니즘과 잠재적 치료법을 연구하기 위한 모델을 생성합니다.

쥐 모델에서 중추 및 일반 경동맥 폐색을 통한 허혈 유도

출처: Larpthaveesarp, A., et. al입니다. P10 쥐에서 신생아 뇌졸중의 일시적인 중간 대뇌 동맥 폐색 모델. J. Vis. 특급. (2017)이 비디오는 새끼 쥐에서 Middle Cerebral Artery Occlusion 모델을 설정하는 방법을 보여줍니다. 내부 경동맥(ICA)이 노출되고 결찰자가 고정되어 혈액 범람을 제한합니다. 폐색은 ICA를 통해 삽입되어 중대뇌동맥에 도달합니다. 그런 다음 추가 분석 전에 강아지가 회복할 수 있습니다.

국소 뇌허혈을 유발하기 위해 새끼 쥐에서 중대뇌동맥 폐색을 생성하는 것

우리는 설치류의 주요 뇌 혈관의 영구 폐색에 대한 높은 재현성 방법을 설명합니다. 이 기술은 거의 주변의 손상을 최소화 혈액 손실, 장기 생존의 높은 속도, 인간의 임상 인구에 상응하는 일관된 경색 볼륨을 수행 할 수 있습니다.

영구적 인 뇌 혈관 폐색<em&gt;를 통해</em&gt; 더블 합자 및 절개

여기에서 우리는 큰 대뇌 피질 경색과 지속적인 적자를 생성하는 경동맥의 동시 폐쇄와 함께 노인 여성 쥐 영구 원심 중간 대뇌 동맥 폐쇄를 생산하는 프로토콜을 제시한다. 우리는 24 시간 뇌졸중 후 팔주에서 구조 MRI를 사용하여 병변 크기의 확인을 보여줍니다.

세 쥐의 경동맥 폐색으로 영구 말초 중간 대뇌을 수행하면 두피 허혈 지속적인 장애를 연구하는

우리는 실리콘으로 코팅된 봉합사를 사용하여 중대뇌동맥의 폐색에 의해 유도된 뇌졸중의 마우스 모델을 설명합니다. 이 프로토콜은 영구적인 폐색 또는 일시적인 허혈을 유도한 후 재관류를 유도하는 데 적용할 수 있습니다.

경색 지역의 중간 동맥 폐색 기술 및 시각화를 사용하여 마우스의 허혈성 뇌졸중 및 허혈 - 재관류 유도

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 마우스 모델 선의 이상 조사를 설립 하다. 우리는 distally 오른쪽 중간 대뇌 동맥과 바로 일반적인 경 동맥 선 하 고 국 소 빈 혈의 10 또는 40 분 후 혈액 흐름을 복원.

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 2 배 폐색 마우스 모델

이 프로토콜은 중뇌동맥의 내강 내 폐색을 통한 마우스의 일시적인 국소 대뇌 허혈 모델을 설명합니다. 또한 자기 공명 영상 및 행동 테스트를 사용하여 결과 평가의 예를 보여줍니다.

뇌졸중의 일시적인 중뇌동맥 폐색 모델

현재 프로토콜은 손상을 입히지 않고 뇌 혈관의 해부학적 구조를 보존하는 중대뇌 동맥 폐색/재관류의 쥐 모델을 설명합니다.

대뇌 혈관의 해부학적 구조를 손상시키지 않고 중간 대뇌 동맥 폐색/재관류의 쥐 모델

쥐 생체 내 모델은 허혈성 뇌졸중의 병리학적 메커니즘과 치료 표적을 조사하는 데 필수적인 도구입니다. 이 연구는 쥐의 중대뇌동맥 폐색(MCAO) 후 경색된 뇌 절편에서 면역형광 염색을 수행하는 방법을 설명합니다.

허혈성 뇌졸중의 쥐 모델에서 면역형광에 의한 세포 사멸 신호 평가

본 연구의 목적은 쥐에서 두개골 절제술 후 영구적이고 선택적인 중뇌동맥 폐색을 수행하는 재현 가능한 방법을 확립하여 운동 및 공간 기억 결손에 대한 실험 연구에 적용하는 것이었습니다.

쥐의 중뇌동맥 선택적 및 영구 폐색: 운동 및 공간 기억 결손 연구를 위한 실험적 접근법

배우세요 쥐 중대뇌동맥 내혈관 폐색을 통한 국소 뇌허혈 모델 제작 방법을. 이 기법은 뇌졸중 연구 및 허혈성 뇌손상 메커니즘 규명에 활용됩니다.

쥐 중간 대뇌 동맥의 폐색의 Endovascular 봉합사에 의해 초점 대뇌 국소 빈혈 모델

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