Name: 플래시 동결 E12.5 마우스 브레인 Cryosectioning (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 28 min 32 s
Description: 배우세요 E12.5 마우스 배아 뇌 조직의 플래시 동결 및 크라이오섹셔닝 기법을 사용하여 신경과학 연구를 위한 고품질 조직 절편을 제작하는 방법을. 이 방법은 균열과 왜곡 없는 완전한 조직 구조를 보존합니다.

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<ol><li> 원하는 시간을 PBS에 4 % paraformaldehyde에 조직을 수정. </li><li> 자당 달이다 조직 (cryoprotection) <ol><li> 2,059 튜브 PBS W / V에서 30 % 자당 솔루션을 확인하십시오. </li><li> PBS에서 조직 배 린스 (락을 함께 ~ 5 분). </li><li> 30 % 자당 용액에 넣어 조직. 조직은 침몰하지 않습니다. </li><li> 그것이 침몰했다 ° C 야간, 또는 때까지 4 조직을 놓으십시오. </li></ol></li><li> 라벨 적절한 크기는 정보와 오리 엔테이션과 함께 cryomold. </li><li> (거품을 방지) OCT와 cryomold를 입력합니다. </li><li> OCT 목욕 및 OCT로 코팅을하는 조직을 전송 </li><li> cryomold에서 OCT하기 위해 조직을 전송합니다. </li><li> 현미경 동양의 조직. </li><li> 플라스틱 페트리 접시에 액체 질소를 부어. </li><li> 신속하고 조심스럽게 질소로 cryomold의 조직을 낮추십시오. (잠수함 cryomold의 상단을하지 않습니다.) </li><li> OCT는 흰색 고체 경우 -80 ° C 저장 냉동실에 냉동 조직을 놓으십시오. </li><li> ~ 20 ° C 이상에서 30 분 조직을 평형. 이전 sectioning 수 있습니다. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Tissue-Tek Cryomold</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27181</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>자당 용액</td><td></td><td></td><td>PBS 내 30% w/v 자당 용액</td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td></td><td></td><td>PBS 내 4% 파라포름알데히드</td></tr></tbody></table>

플래시 동결 e12.5 마우스 브레인 cryosectioning

Flash Freezing and Cryosectioning E12.5 Mouse Brain

<p class="jove_content">플래시 마우스 배아 뇌 조직을 동결 sectioning위한 방법은 다음과 같습니다이 비디오에서 보여주었다. 그라 이오 스탯를 사용하기위한 유용한 팁을은 결과 조직의 섹션 균열 및 기타 왜곡 무료로되는 것을 보장하기 위해 절단하는 동안 사용할 수있는 문제 해결 방법을 포함하여 제공됩니다.</p>

플래시 동결 E12.5 마우스 브레인 Cryosectioning

flash-freezing-and-cryosectioning-e125-mouse-brain

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오는 종양 조직에서 별개의 해부학적 영역이나 특정 세포 집단을 분리하기 위해 마우스의 뇌를 동결 보존하는 방법을 보여줍니다. 이 기술은 후속 분석을 위해 뇌 조직 형태의 최적 광학 해상도를 얻는 데 중요합니다.

스냅 냉동에 의한 쥐 뇌의 동결 보존: 조직학적 분석을 위해 전체 마우스 뇌 표본을 빠르게 동결하는 기술

이 비디오에서는 저온 유지 장치를 사용하여 얼어붙은 쥐의 뇌종양 조직을 절단하는 방법을 보여줍니다. 이렇게 얻어진 동결된 뇌 조직 절편은 추가 분석이 있을 때까지 저온에서 보관됩니다.

동결 마우스 뇌 조직 절편: 냉동 쥐 뇌 조직에서 얇은 동결 조직 절편을 얻는 절차

이 동영상은 다운스트림 분석을 위해 동결된 마우스 뇌 조직 절편을 준비하기 위한 자세한 단계별 프로토콜을 보여줍니다.

다운스트림 분석을 위한 마우스 뇌 처리

여기, 선물이 동결 하 고 처리 한 두뇌를 절약해 주는 대신 여러 동물에서 뇌 조직 섹션 프로토콜. 이 immunohistochemistry 동안 얼룩 가변성을 감소 시키고 감소 시간 cryosectioning 및 이미징.

여러 설치류 두뇌의 동시 Cryosectioning

이 절차는 저렴하고 일반적으로 사용할 수있는 도구를 사용하여 고품질의 단백질과 RNA를 얻기 위해 이산 냉동 뇌 영역의 수집을 설명합니다.

다운스트림 분석을 위한 냉동 설치류 뇌 영역 모음

이 프로토콜은 다중 표지 FISH 및 형광 IHC 신호를 달성하는 것을 목표로 신선 냉동 및 고정 마우스 뇌 절편 모두에서 형광 in situ hybridization(FISH)과 형광 면역조직화학(IHC)을 결합하는 방법을 설명합니다. IHC는 세포질 및 막 부착 단백질을 표적으로 삼았습니다.

Multiplex Fluorescence In Situ Hybridization with Fluorescent Immunohistochemistry on Fresh Frozen or Fixed Mouse Brain Section(신선 냉동 또는 고정 마우스 뇌 절편에서 Multiplex Fluorescence <em>In Situ</em> Hybridization과 형광 면역조직화학의 결합)

마우스 중추 신경계의 조직학적 분석을 위한 편리한 중력 공급 관류 방법이 제시된다. 인산화된 α시누클레인의 면역형광 검출은 파킨슨병의 마우스 모델에서 입증된다. 이 연구는 또한 심질 관류, 해부, 조직 동결 / 임베딩 및 냉동 절개 단계를 포괄적으로 설명합니다.

마우스 중추 신경계의 조직학적 분석을 위한 중력 공급 심질 관류 방법

본 프로토콜은 염료 및 동결 절편을 사용하여 바이러스 추적을 수행하기 전에 입체탁 주입 좌표의 검증 단계를 신속하게 처리하기 위한 실용적인 전략을 설명합니다.

Preliminary Validation of Stereotaxic Injection Coordinates via Cryosectioning

이 연구는 참수, 고정, 동결 절제, 형광 염색, 면역 염색 및 이미징을 포함하는 조직 처리를 위한 단순화된 프로토콜을 제시하며, 이는 공초점 및 다광자 이미징으로 확장될 수 있습니다. 이 방법은 복잡한 해부에 필적하는 효능을 유지하며 고급 운동 기술의 필요성을 우회합니다. 정량적 이미지 분석은 광범위한 조사 잠재력을 제공합니다.

향상된 뇌 형광 염색 및 면역 염색을 위한 <em>초파리</em> 머리의 직접 동결 절편

망막은 층류 구조 전반에 걸쳐 복잡한 공간 조직을 나타냅니다. 현대의 공간 전사체학 및 염기서열분석 기술에는 20μm 두께&lt; 조직 절편이 필요하기 때문에 망막 연구 적용이 제한됩니다. 이 신선 냉동 냉동 절편 방법은 평면 공간 관계를 유지하면서 마우스 망막의 얇은 표면 부분을 생성하여 층판 전반에 걸쳐 포괄적인 분자 매핑을 가능하게 합니다.

<em>En 얼굴</em> High-dimensional Spatial Molecular Analysis (고차원 공간 분자 분석을 위한 마우스 망막의 동결 절편)

이 프로토콜은 고압 냉동(HPF)과 와플 방법, 극저온 집중 이온 빔(cryo-FIB) 리프트아웃, 선량 대칭 병렬 채취를 통합하여 두꺼운 조직에 대한 냉동 전자 단층촬영(cryo-ET)을 표준화하여, 쥐 해마에서 재 현 가능한 현장 분석을 위한 균일하게 얇은 층상과 유리화 표본을 제공합니다.

쥐 해마에서 입증된 두꺼운 조직을 위한 냉동 전자 단층촬영 워크플로우

배우세요 E12.5 마우스 배아 뇌 조직의 플래시 동결 및 크라이오섹셔닝 기법을 사용하여 신경과학 연구를 위한 고품질 조직 절편을 제작하는 방법을. 이 방법은 균열과 왜곡 없는 완전한 조직 구조를 보존합니다.

플래시 동결 E12.5 마우스 브레인 Cryosectioning

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