Name: 플래시 동결 E12.5 마우스 브레인 Cryosectioning (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 28 min 32 s
Description: 배우세요 E12.5 마우스 배아 뇌 조직의 플래시 동결 및 크라이오섹셔닝 기법을 사용하여 신경과학 연구를 위한 고품질 조직 절편을 제작하는 방법을. 이 방법은 균열과 왜곡 없는 완전한 조직 구조를 보존합니다.

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<ol><li> 원하는 시간을 PBS에 4 % paraformaldehyde에 조직을 수정. </li><li> 자당 달이다 조직 (cryoprotection) <ol><li> 2,059 튜브 PBS W / V에서 30 % 자당 솔루션을 확인하십시오. </li><li> PBS에서 조직 배 린스 (락을 함께 ~ 5 분). </li><li> 30 % 자당 용액에 넣어 조직. 조직은 침몰하지 않습니다. </li><li> 그것이 침몰했다 ° C 야간, 또는 때까지 4 조직을 놓으십시오. </li></ol></li><li> 라벨 적절한 크기는 정보와 오리 엔테이션과 함께 cryomold. </li><li> (거품을 방지) OCT와 cryomold를 입력합니다. </li><li> OCT 목욕 및 OCT로 코팅을하는 조직을 전송 </li><li> cryomold에서 OCT하기 위해 조직을 전송합니다. </li><li> 현미경 동양의 조직. </li><li> 플라스틱 페트리 접시에 액체 질소를 부어. </li><li> 신속하고 조심스럽게 질소로 cryomold의 조직을 낮추십시오. (잠수함 cryomold의 상단을하지 않습니다.) </li><li> OCT는 흰색 고체 경우 -80 ° C 저장 냉동실에 냉동 조직을 놓으십시오. </li><li> ~ 20 ° C 이상에서 30 분 조직을 평형. 이전 sectioning 수 있습니다. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Tissue-Tek Cryomold</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27181</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>자당 용액</td><td></td><td></td><td>PBS 내 30% w/v 자당 용액</td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td></td><td></td><td>PBS 내 4% 파라포름알데히드</td></tr></tbody></table>

플래시 동결 e12.5 마우스 브레인 cryosectioning

Flash Freezing and Cryosectioning E12.5 Mouse Brain

플래시 마우스 배아 뇌 조직을 동결 sectioning위한 방법은 다음과 같습니다이 비디오에서 보여주었다. 그라 이오 스탯를 사용하기위한 유용한 팁을은 결과 조직의 섹션 균열 및 기타 왜곡 무료로되는 것을 보장하기 위해 절단하는 동안 사용할 수있는 문제 해결 방법을 포함하여 제공됩니다.

플래시 동결 E12.5 마우스 브레인 Cryosectioning

안녕하세요, 저는 캘리포니아 대학교 어바인 캠퍼스의 Ed Maki 연구실 소속 Spencer Curley이며, 냉동 절편 제작 방법을 시연하겠습니다. 이를 위해 먼저 일반적으로 사용되는 시약들을 사용합니다. 제가 사용하는 임베딩 화합물 또는 임베딩 매질은 최적 절단 온도라는 의미의 OCT입니다.이 용액은 투명하고 매우 걸쭉하며 점성이 있어, 조직의 방향을 잡는 동안 조직을 잘 고정해주며 이후에는 동결됩니다. 또한 최종적으로 수용성이므로 모든 종류의 염색 과정 중에 제거할 수 있습니다. 저는 몰드에 조직을 매립합니다. 이러한 cryo mold 생검 용기는 다양한 크기로 제공됩니다.마우스의 배아 조직을 사용하기 때문에 여기 있는 더 작은 몰드를 사용하겠습니다. 저희는 조직을 액체 질소로 급속 냉동합니다. 먼저, 여기 있는 탱크에서 액체 질소를 가져와 이 보호 진공 플라스크를 채우겠습니다.조직을 급속 냉동하기 전에 소위 동결 보호(cryo protect)라고 하는 과정을 거쳐야 하며, 그렇지 않으면 냉동 과정 자체가 조직을 파괴하게 됩니다. 따라서 조직을 30% sucrose 용액에 담가 하룻밤 동안 둡니다. 시간이 더 걸리더라도 조직이 바닥으로 가라앉기만 한다면 괜찮습니다.보시는 바와 같이, 배아 12.5일차 마우스 머리가 설탕 용액 속으로 가라앉았으므로 동결 준비가 되었습니다. 이제 조직을 더 쉽게 다루기 위해 설탕 용액에 담긴 조직을 더 큰 접시에 붓겠습니다. OCT를 적당량 취해 뚜껑 위에 올려 각도를 조절한 35mm 접시에 붓겠습니다.OCT가 깊이 조절을 위해 가장자리를 따라 고이게 됩니다. 여기서는 끝이 뭉툭한 오래된 핀셋 한 쌍을 사용하는데, 날카로울 필요가 없을 뿐더러 다른 핀셋을 망가뜨리고 싶지 않기 때문입니다. 핀셋으로 이 머리 표본 중 하나를 매우 조심스럽게 들어 올려 첫 번째 OCT 용액에 넣습니다.배아를 OCT로 코팅하기만 하면 됩니다. 이렇게 하면 조직을 더 효과적이고 균일하게 동결할 수 있습니다. 조직 주변에 잔류 sucrose가 남거나 기포가 생기지 않도록 해야 합니다.기포가 생기지 않도록 주의하십시오. OCT를 머리 주변과 아래쪽으로 부드럽게 저어주며, 머리를 OCT 속에서 움직여 줍니다. 그 상태로 몇 초간 둔 다음 크라이오 몰드(cryo mold)를 채웁니다. 이제 다시 기포가 생기지 않도록 주의하며 크라이오 몰드에 OCT를 채우겠습니다.그리고 몰드의 맨 윗부분까지 가득 채우겠습니다

flash-freezing-and-cryosectioning-e125-mouse-brain

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오는 종양 조직에서 별개의 해부학적 영역이나 특정 세포 집단을 분리하기 위해 마우스의 뇌를 동결 보존하는 방법을 보여줍니다. 이 기술은 후속 분석을 위해 뇌 조직 형태의 최적 광학 해상도를 얻는 데 중요합니다.

스냅 냉동에 의한 쥐 뇌의 동결 보존: 조직학적 분석을 위해 전체 마우스 뇌 표본을 빠르게 동결하는 기술

이 비디오에서는 저온 유지 장치를 사용하여 얼어붙은 쥐의 뇌종양 조직을 절단하는 방법을 보여줍니다. 이렇게 얻어진 동결된 뇌 조직 절편은 추가 분석이 있을 때까지 저온에서 보관됩니다.

동결 마우스 뇌 조직 절편: 냉동 쥐 뇌 조직에서 얇은 동결 조직 절편을 얻는 절차

이 동영상은 다운스트림 분석을 위해 동결된 마우스 뇌 조직 절편을 준비하기 위한 자세한 단계별 프로토콜을 보여줍니다.

다운스트림 분석을 위한 마우스 뇌 처리

여기, 선물이 동결 하 고 처리 한 두뇌를 절약해 주는 대신 여러 동물에서 뇌 조직 섹션 프로토콜. 이 immunohistochemistry 동안 얼룩 가변성을 감소 시키고 감소 시간 cryosectioning 및 이미징.

여러 설치류 두뇌의 동시 Cryosectioning

이 절차는 저렴하고 일반적으로 사용할 수있는 도구를 사용하여 고품질의 단백질과 RNA를 얻기 위해 이산 냉동 뇌 영역의 수집을 설명합니다.

다운스트림 분석을 위한 냉동 설치류 뇌 영역 모음

이 프로토콜은 다중 표지 FISH 및 형광 IHC 신호를 달성하는 것을 목표로 신선 냉동 및 고정 마우스 뇌 절편 모두에서 형광 in situ hybridization(FISH)과 형광 면역조직화학(IHC)을 결합하는 방법을 설명합니다. IHC는 세포질 및 막 부착 단백질을 표적으로 삼았습니다.

Multiplex Fluorescence In Situ Hybridization with Fluorescent Immunohistochemistry on Fresh Frozen or Fixed Mouse Brain Section(신선 냉동 또는 고정 마우스 뇌 절편에서 Multiplex Fluorescence In Situ Hybridization과 형광 면역조직화학의 결합)

마우스 중추 신경계의 조직학적 분석을 위한 편리한 중력 공급 관류 방법이 제시된다. 인산화된 α시누클레인의 면역형광 검출은 파킨슨병의 마우스 모델에서 입증된다. 이 연구는 또한 심질 관류, 해부, 조직 동결 / 임베딩 및 냉동 절개 단계를 포괄적으로 설명합니다.

마우스 중추 신경계의 조직학적 분석을 위한 중력 공급 심질 관류 방법

본 프로토콜은 염료 및 동결 절편을 사용하여 바이러스 추적을 수행하기 전에 입체탁 주입 좌표의 검증 단계를 신속하게 처리하기 위한 실용적인 전략을 설명합니다.

Preliminary Validation of Stereotaxic Injection Coordinates via Cryosectioning

이 연구는 참수, 고정, 동결 절제, 형광 염색, 면역 염색 및 이미징을 포함하는 조직 처리를 위한 단순화된 프로토콜을 제시하며, 이는 공초점 및 다광자 이미징으로 확장될 수 있습니다. 이 방법은 복잡한 해부에 필적하는 효능을 유지하며 고급 운동 기술의 필요성을 우회합니다. 정량적 이미지 분석은 광범위한 조사 잠재력을 제공합니다.

향상된 뇌 형광 염색 및 면역 염색을 위한 초파리 머리의 직접 동결 절편

망막은 층류 구조 전반에 걸쳐 복잡한 공간 조직을 나타냅니다. 현대의 공간 전사체학 및 염기서열분석 기술에는 20μm 두께&lt; 조직 절편이 필요하기 때문에 망막 연구 적용이 제한됩니다. 이 신선 냉동 냉동 절편 방법은 평면 공간 관계를 유지하면서 마우스 망막의 얇은 표면 부분을 생성하여 층판 전반에 걸쳐 포괄적인 분자 매핑을 가능하게 합니다.

En 얼굴 High-dimensional Spatial Molecular Analysis (고차원 공간 분자 분석을 위한 마우스 망막의 동결 절편)

이 프로토콜은 고압 냉동(HPF)과 와플 방법, 극저온 집중 이온 빔(cryo-FIB) 리프트아웃, 선량 대칭 병렬 채취를 통합하여 두꺼운 조직에 대한 냉동 전자 단층촬영(cryo-ET)을 표준화하여, 쥐 해마에서 재 현 가능한 현장 분석을 위한 균일하게 얇은 층상과 유리화 표본을 제공합니다.

쥐 해마에서 입증된 두꺼운 조직을 위한 냉동 전자 단층촬영 워크플로우

배우세요 E12.5 마우스 배아 뇌 조직의 플래시 동결 및 크라이오섹셔닝 기법을 사용하여 신경과학 연구를 위한 고품질 조직 절편을 제작하는 방법을. 이 방법은 균열과 왜곡 없는 완전한 조직 구조를 보존합니다.

플래시 동결 E12.5 마우스 브레인 Cryosectioning

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