Name: 의 준비 Drosophila S2 세포 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-03T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: 학습하세요 Drosophila S2 세포를 광학 현미경 관찰을 위해 준비하는 방법을. 렉틴 코팅을 통한 세포 부착 및 평탄화 기술을 활용하여 유전자 기능 연구와 세포 구조 시각화를 효과적으로 수행할 수 있습니다.

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이 작품은 국립 암 연구소 P30 CA23074, 미국 암 학회 연구 기관 그랜트 74-001-31, 그리고 대학에 의해 부분적으로 지원되었다. 애리조나 GI 스포어 (NCI / NIH CA9506O)의.

<ol><li>Schneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lines+derived+from+late+embryonic+stages+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Embryol+Exp+Morphol%22%5BJournal%5D)">Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster.</a> J Embryol Exp Morphol. 27, 353-365 (1972).</li>
<li>Rogers, S. L., Rogers, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+Drosophila+S2+cells+and+their+use+for+RNAi-mediated+loss-of-function+studies+and+immunofluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Culture of Drosophila S2 cells and their use for RNAi-mediated loss-of-function studies and immunofluorescence microscopy.</a> Nat Protoc. 3, 606-611 (2008).</li>
<li>Rogers, S. L., Rogers, G. C., Sharp, D. J., Vale, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+EB1+is+important+for+proper+assembly%2C+dynamics%2C+and+positioning+of+the+mitotic+spindle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Drosophila EB1 is important for proper assembly, dynamics, and positioning of the mitotic spindle.</a> J Cell Biol. 158, 873-884 (2002).</li>
<li>Goshima, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+required+for+mitotic+spindle+assembly+in+Drosophila+S2+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Genes required for mitotic spindle assembly in Drosophila S2 cells.</a> Science. 316, 417-421 (2007).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

세포 생물학 분야의 경우, 이상적인 시스템은 조작하기 쉬운 유지하기 위해 저렴한 것이고, 기술의 다양한 의무. Drosophila S2 세포는 이러한 요구 사항을 만족하고, 그래서 그들은 빠르게 세포의 증가에 대한 선택의 시스템이되었습니다 생물학 실험실. 우리는 현미경에 대한 S2 세포를 준비하는 방법에 대한 간략한 개요를 제시했습니다. S2 세포의 주목할만한 미덕들은 정상적인 분위기와 실내 온도에서 잘 성장한다는 사실이다, 그러므로, 그들은 특별한 유지 보수 요구하지 않고 오랜 시간 동안 현미경에 남아 있습니다. 그들이 일반적으로 다소 반올림 및 일반 culturing 조건에서 느슨하게 자기편에도 불구하고, S2 세포가 광범위하게 이미징을위한 버리고 유도하실 수 있습니다. S2 세포는 그들이 뛰어난 현미경 표본 제작, 표지 용지에 첨부하여 얇게 퍼져 것입니다 concanavalin 사전 코팅되었습니다 유리 바닥 요리에 대한 교양.

<table><tbody><tr><td>S2 세포</td><td>ATCC</td><td>CRL-1963</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.atcc.org/">http://www.atcc.org/&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>S2 세포</td><td>DGRC</td><td>stock number 6</td><td>&lt;a href=&quot;https://dgrc.cgb.indiana.edu/">https://dgrc.cgb.indiana.edu/&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>S2 세포</td><td>Invitrogen</td><td>R690-07</td><td></td></tr><tr><td>Sf900 II</td><td>Invitrogen</td><td>10902-096</td><td>무혈청 배지</td></tr><tr><td>HyClone SFX-Insect</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>SH30278</td><td>무혈청 배지</td></tr><tr><td>Insect-Xpress</td><td>BioWhittaker</td><td>12-730</td><td>무혈청 배지</td></tr><tr><td>Schneider&amp;rsquo;s S2 배지</td><td>Invitrogen</td><td>11720-034</td><td>완전 배지를 만들기 위해 열불활성화 FBS를 10% (최종 농도) 첨가한다.</td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>Invitrogen</td><td>10438026</td><td>열불활성화</td></tr><tr><td>100x 항생제 용액</td><td>MP Biomedicals</td><td>91674049</td><td>penicillin (10000 U/mL),&lt;br/&gt;streptomycin (10000 &amp;#x03BC;g/mL), 및&lt;br/&gt;amphotericin B (25 &amp;#x03BC;g/mL) 포함</td></tr><tr><td>Concanavalin A</td><td>MP Biomedicals</td><td>195283</td><td></td></tr><tr><td>포름알데히드</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15714</td><td>32% 용액</td></tr><tr><td>메탄올</td><td>Mallinckrodt Baker Inc.</td><td>9049</td><td>무수, ACS 등급</td></tr><tr><td>분자체</td><td>Acros Organics</td><td>19724</td><td>type 3A</td></tr></tbody></table>

의 준비 drosophila</em라이트 현미경을 위해> s2 세포

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

이상적인 실험 시스템은 기술의 다양한 의무 유지하기 위해 저렴하고 쉽게 될, 그리고 광범위한 문학 게놈 시퀀스 데이터베이스에 의해 지원됩니다. 교양 Drosophila S2 세포, 정신을 20-24시간 오래된 태아 1의 제품은 이러한 모든 속성을 보유하고 있습니다. 따라서, S2 세포는 매우 분자 과정의 구성 요소 또는 관심 메커니즘을 인코딩 유전자의 발견을 포함하여 세포 프로세스의 분석에 적합합니다. 그들의 유틸리티에 대한 대부분의 책임이 S2 세포의 기능은 라이브 또는 고정 형식으로 그들이 유지하고있는 용이성을 두 번 좌초 (DS) RNA - 중재 간섭 (RNAi)들의 아름다운 감성과 형광 현미경 자신 tractability 아르 세포. S2 세포는 저렴한, 상용 - 가능, 완벽한 정의, 혈청 프리 미디어 2의 숫자를 포함하여, 다양한 미디어로 성장하실 수 있습니다. 또한, 그들은 21-24 ° C에서 최적으로 빠르게 성장하고 컨테이너의 다양한 교양 수 있습니다. 포유 동물 세포와는 달리, S2 전지는 규제 분위기를 필요로하지 않지만, 대신에 일반 공기와 잘 심지어 밀폐 flasks 유지하실 수 있습니다. S2 세포에서 RNAi의 용이성을 보완하는 것은 쉽게 위상 또는 고정 또는 라이브 세포의 형광 현미경에 의해 실험적으로 유도된 phenotypes을 분석하는 능력입니다. S2 세포는 단일 monolayer로 문화의 성장하지만, 연락처 억제를 표시하지 않습니다. 대신, 세포는 짙은 문화의 식민지에서 성장하는 경향이있다. 저밀도에서 S2 문화 원형과 느슨하게 연결된 아르 유리 또는 조직 문화 처리 플라스틱에서 성장. 그러나, S2 세포의 세포학은 크게 렉틴, concanavalin A (코나) 3 코팅 표면에 간단히 culturing 그들에 의해 광범위하게 버리고 그들을 유도하여 향상시킬 수 있습니다. S2 세포도 안정 레이블 구조 또는 거주 또는 고정 세포에 대한 관심의 organelles에 찬란 - 태그 마커와 transfected 수 있습니다. 따라서, 세포의 미세한 분석을위한 일반적인 시나리오는 이것입니다 : 우선, S2 전지 (태그 마커를 표현하는 transgenes을 가지고 수) 대상 단백질 (들)를 제거하는 RNAi에 의해 처리됩니다. RNAi 치료 시간은 단백질의 차이 수 있도록 조정할 수 있습니다 대상 단백질은 생존에 중요한 경우 속도론을 넘겨주 및 세포 외상 / 죽음을 최소화하기 위해. 다음 치료 세포가 확산 세포를 유도하고 단단히 유리에 준수하는 코나 사전 코팅 coverslip을 포함하는 음식으로 전송됩니다. 마지막으로, 세포는 현미경 모드의 연구자의 선택과 몇 군데 있습니다. 이러한 세포가 실내 온도와 정상적인 분위기에서 건강을 유지 이후 S2 세포 사는 세포의 확장 시각화를 필요로하는 연구에 특히 좋다.

Drosophila 슈나이더 (S2) 세포가 유전자의 발견과 기능 분석을위한 점점 인기있는 시스템입니다. 우리의 목표는 점점 더 중요한 실험 시스템 S2 세포를 만드는 미세한 기법 중 일부를 설명하는 것입니다.

의 준비 Drosophila</em라이트 현미경을 위해> S2 세포

이상적인 실험 시스템은 비용이 저렴하고 유지관리가 용이하며, 다양한 기법을 적용할 수 있고, 방대한 문헌의 뒷받침을 받는 시스템일 것입니다...

본 절차의 전반적인 목표는 광학 현미경 관찰을 위한 Drosophila S2 세포의 준비 과정을 설명하는 것입니다. 이는 먼저 유리 바닥 배양 접시를 준비함으로써 수행됩니다. 절차의 두 번째 단계는 유리 바닥을 lectin conval로 코팅하는 것입니다.S two 세포의 부착과 평탄화를 촉진하기 위한 과정입니다. 절차의 세 번째 단계는 배양 접시에 배양액과 S two 세포를 첨가하는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 배양 접시 내의 S two 세포를 고정하고 면역 염색하는 것입니다.최종적으로, 각각 살아있거나 고정된 S two 세포의 형광 현미경 관찰을 통해 fluoro four가 태그되었거나 면역 표지된 표적 단백질의 국소화를 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다. 안녕하세요, 저는 애리조나 대학교 세포생물학 해부학과의 Greg Rogers 연구실 소속 Joey Club입니다. 저는 역시 Rogers 연구실 소속인 John Nye입니다.그리고 저는 Dan Buster입니다. Greg Rogers 연구실 소속입니다. 오늘은 광학 현미경 관찰을 위한 Drosophila S2 세포 준비 과정을 보여드리겠습니다.당사 연구실에서는 주요 조절 단백질의 제거 또는 과발현 이후 중심체 수와 구조의 변화를 관찰함으로써, Drosophila의 중심체 복제 조절을 연구하기 위해 이 절차를 사용합니다. 그럼 시작해 보겠습니다. 유리 바닥 접시를 제작하기 위해 표준 35 밀리미터 페트리 접시를 사용합니다.이 유리 바닥 디시는 세포를 일반적인 배양 조건과 매우 유사한 상태로 유지하며, 현미경용 등급의 유리를 통해 살아있는 세포를 관찰할 수 있게 해줍니다. 유리 바닥 디시를 조립하기 위해, 두꺼운 벽을 가진 스티로폼 박스의 테이프 처리된 표면을 천공 작업대로 사용합니다. 35mm 페트리 디시의 하단부를 천공 작업대 위에 놓고, 디시의 바닥면이 스티로폼 박스에 닿게 한 상태에서 디시의 측면을 단단히 잡고 3/4인치 스페이드 드릴 비트가 장착된 핸드 드릴을 사용하여 디시에 구멍을 뚫습니다.모든 플레이트에 구멍을 뚫은 후, 거친 입자를 가진 원뿔 모양의 그라인딩 드릴 비트를 사용하여 구멍의 바깥쪽 테두리를 매끄럽게 다듬습니다. 이때 비트의 직경은 스페이드 비트와 거의 동일한 것을 사용하십시오. 전동 드릴을 옆으로 눕혀 비트가 카운터 가장자리 밖으로 돌출되게 놓습니다. 10 kilograms의 모래가 담긴 고강도 플라스틱 백과 같이 무거우면서도

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Biology

생물학

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의 준비 Drosophila S2 세포

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