Orthotopic 대동맥 이식 : 만성 Vasculopathy의 개발 연구에 생쥐 모델

본 절차의 전반적인 목표는 이식 혈관병증의 발달을 조사하기 위해 정확한 모델과 쉽게 실행 가능한 방법을 구축하는 것입니다. 이는 PVG와 CI 계통의 조합을 사용하여 달성됩니다. 본 절차의 두 번째 단계는 공여자의 대동맥을 채취하는 것입니다.

절차의 세 번째 단계는 수혜물을 준비하는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 공여자의 대동맥을 수혜자의 대동맥과 문합하는 것입니다. 최종적으로, 병리 조직학적 검사를 통해 신내막 형성을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.

안녕하세요, 저는 독일 함부르크 대학 심장 센터의 TS Eye Lab에서 이식 면역학 교수로 재직 중인 Sonya Schwefel입니다. 그리고 저는 TS Eye Lab의 Manish Duboff입니다.

저희 연구실은 이식 면역학에 관심을 두고 있습니다. 이 영상에서는 쥐에서 이식 혈관병증의 발생을 연구하기 위한 쉽고 유효한 모델인 정위 대동맥 이식 모델을 소개해 드리겠습니다. 저희 연구실에서는 심혈관 이식의 만성 거부 반응을 조사하기 위해 이 절차를 사용합니다.

정위 대동맥 이식 모델에서는 대동맥의 조직학적 평가가 용이합니다. 또한, CI 모델로의 PVG 이식은 이식 혈관병증 연구에 특히 유용합니다. 이는 급성 혈관 거부 반응이 주요 교란 요인이 아니며, 혈관병증의 진행 양상이 임상 소견과 유사하기 때문입니다.

이제 시작하겠습니다. 본 정위(ORTHOTOPIC) 대동맥 이식에 사용되는 공여체는 체중이 약 250에서 300g인 PVG 쥐입니다. 동물을 마취시킨 후, 복부와 흉부의 털을 제거하십시오.

쥐를 등 쪽이 바닥으로 가게 눕히고 코와 입에 페이스 마스크를 씌웁니다. 마취 상태를 유지하면서 Provo 아이오딘으로 복부와 흉부 부위를 넓게 소독한 후, 80% ethanol로 다시 소독합니다. 그다음, 뒷발을 꼬집어 동물의 반사 반응을 확인합니다.

마취가 충분히 되었는지 확인합니다. 복부를 절개하고 복부 대동맥에 구멍을 내어 쥐의 혈액을 제거합니다. 흉강을 조심스럽게 열어 흉부 하행 대동맥을 찾습니다.

지방, 신경 및 식도와 같은 주변 조직으로부터 흉부 대동맥을 박리합니다. 대동맥 조직이 손상되지 않도록 acuta를 사용하여 1.5 centimeter 길이의 대동맥 조각을 채취합니다. 대동맥 이식편을 차가운 식염수로 충분히 관류한 후 4 °C에서 보관합니다.

이 정위 대동맥 이식의 수혜 동물은 체중이 약 250에서 300g인 A CI 쥐입니다. 이 절차를 시작하기 위해, 마취된 쥐의 복부 부위를 제모하고 마취 중에 눈이 건조해지는 것을 방지하기 위해 안연고를 도포합니다. 쥐를 등으로 눕히고 마취 상태를 유지하기 위해 코와 입 부분에 페이스 마스크를 씌웁니다.

다음으로, 프로보 아이오다인(provo iodine)을 사용하여 복부를 소독한 후 80% ethanol로 다시 소독합니다. 뒷발을 꼬집어 쥐가 충분히 마취되었는지 확인한 후, 복부 정중선 절개를 실시하고 피부와 근육을 분리하여 복부를 개복합니다. 총 두 단계입니다.

복부를 절개한 후, 장을 식염수가 들어있는 장갑 속에 넣습니다. 수분 손실을 방지하기 위해 장갑으로 장을 감쌉니다. 복부 대동맥을 덮고 있는 지방 조직을 제거합니다.

혈관 분지들에 손상을 주지 않도록 주의하면서 신하대정맥 부위부터 분기점까지 대동맥을 박리합니다. 필요한 경우, 대동맥 박리 후 대동맥 분지들을 결찰합니다. 먼저, 혈류를 차단하기 위해 대동맥의 신하대정맥 부위에 미세수술용 클램프를 사용합니다.

다음으로 대동맥 분지점 근처에 두 번째 클램프를 고정합니다. 혈류가 차단되면 대동맥의 짧은 분절을 제거합니다. 그런 다음 얼음 위 0.9% saline에 보관해 둔 공여자 대동맥 이식편을 준비합니다.

적절한 길이로 자른 후 대동맥의 결손 부위에 배치합니다. 두개측 단단 문합부터 시작하여 8-0 prolene 봉합사로 연속 봉합함으로써 공여자 대동맥과 수혜자 대동맥을 연결합니다. 원위측 단단 문합이 완료되면 원위측 클램프를 조심스럽게 제거합니다.

다음으로, 두개골 클램프를 조심스럽게 엽니다. 대동맥의 원위단에서 맥박이 관찰되어야 합니다. 이제 장을 복강 내로 다시 밀어 넣고, 미리 데워둔 멸균 식염수로 복강을 세척합니다.

6-0 proline 봉합사로 복벽의 근육층을 연속 봉합합니다. 그 다음 쥐가 여전히 마취 상태인 동안 5-0 proline 봉합사를 사용하여 피부를 연속 봉합합니다. carprofen 4~5 mg/kg을 피하 주사합니다.

동물을 케이지로 돌려보냅니다. 통증 완화를 위해 3일 동안 식수에 methimazole을 첨가합니다. 이식 후 단계입니다.

120일 후의 조직병리학적 결과가 조직 현미경을 통해 시연될 것입니다. 사진을 통해 이식 혈관병증의 진행 과정을 명확하게 확인할 수 있습니다. 발생한 내강 협착 부위는 컴퓨터 애니메이션으로 강조하여 표시될 것입니다.

지금까지 쥐를 이용한 자가 위치 대동맥 이식법을 살펴보았습니다. 또한 조직병리학적 분석을 통해 120일 후 이식 혈관병증이 성공적으로 유도되었음을 확인했습니다. 이 방법은 만성 동종이식 혈관병증에 대한 약물의 초기 효과를 연구하는 데 유용하게 활용될 수 있습니다.