Name: Orthotopic 대동맥 이식 : 만성 Vasculopathy의 개발 연구에 생쥐 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-04T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: 배우세요 정위 대동맥 이식법으로 생쥐에서 만성 이식 혈관병증을 연구하는 방법을. PVG에서 CI 계통을 사용하여 신내막 형성을 조직학적으로 분석하고 이식 거부 반응의 기전을 규명합니다.

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저자는 그녀의 histological 일을 크리스티안 Pahrmann 감사합니다. 기금 소냐 Schrepfer는 독일 Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992 / 3 1 SCHR992/4-1)에서 연구 부여를 받았습니다.]

약 250-300그램 무게 쥐 찰스 리버 (Sandhofer 웨그 7 D - 97633 Sulzfeld)에서 구입할 수 있습니다. 이식은 기증자 PVG로 쥐, 그리고 수신자가 같은 ACI의 쥐를 사용하여 수행됩니다. 쥐는 일반 조건, 공급 표준 쥐 차우와 물 광고 libidum 아래에 위치해 있습니다. 모든 수술기구는 사용하기 전에 소독을하고 있습니다. 기증자 준비 : 유도 챔버를 사용하여 isoflurane와 쥐 (2,5-3 %)를 마취. <ol><li> 복부와 흉부 머리를 면도하고 그 뒷면에있는 쥐 장소 및 마취를 유지하기 위해 코와 입을 통해 안면을 넣으십시오. </li><li> 널리 프로보 - 요오드, 다음 사용하는 80 % 에탄올을이 단계를 세 번 반복을 사용하여 복부 및 흉부 영역을 소독. </li><li> 뒷다리가 쥐를 충분 anesthesized되어 있는지 확인하는 곤란 반사를 확인합니다. </li><li> 복부를 열고 복부 대동맥에 구멍을 절단하여 쥐 ...에게서 피를 뽑다. </li><li> 조심스럽게 하강 흉부 대동맥을 찾으려면 흉부를 엽니다. </li><li> 지방, 신경 및 식도와 같은 주변 조직에서 흉부 대동맥을 절개하다. </li><li> 대동맥의 조직 손상없이 couter를 사용하여 대동맥의 1.5cm 조각을 철회. </li><li> 감기 무균 식염수에 철저하게 대동맥 이식을 Perfuse 4에서 그래프트를 저장 ° C. </li></ol> 받는 사람 : 유도 챔버를 사용하여 isoflurane와 쥐 (2,5-3 %)를 마취. 체온은 수술하는 동안 유지됩니다. <ol><li> 복부 영역을 면도하고 마취 동안 건조에서 눈을 방지하기 위해 눈 연고를 적용합니다. </li><li> 의 뒷면에있는 쥐를 삽입하고 마취를 유지하기 위해 코와 입을 통해 안면을 넣으십시오. </li><li> 프로보 - 요오드, 다음 사용하는 80 % 에탄올을이 단계를 세 번 반복을 사용하여 복부 지역을 소독. </li><li> 뒷다리가 쥐를 충분 anesthesized되어 있는지 확인하는 곤란 반사를 확인합니다. </li><li> 복부를 열려면 두 단계의 피부와 근육을 분리 정중선 복부 절개를 수행합니다. </li><li> 예열 생리 moisturized 분말 무료로 글러브에 장내를 놓습니다. 수분의 손실을 방지하기 위해 내장 주변의 장갑을 접으십시오. </li><li> 복부 대동맥을 덮고있는 지방 조직을 제거합니다. </li><li> 대동맥은 혈관의 가지에 대한 손상을하지 않도록주의, 분기점에 infrarenal 지역을 형성 해부하다. </li><li> 경우 대동맥의 필요 ligate 지점. </li><li> 먼저 혈액 흐름을 막을 수있는 해부하는 대동맥의 infrarenal 부분에 microsurgical 클램프를 사용합니다. </li><li> 다음 대동맥의 분기점에 가까운 두 번째 클램프를 놓으십시오. </li><li> 혈액의 흐름이 중지 이제, 대동맥의 짧은 세그먼트를 제거합니다. </li><li> 적절한 길이로 단축하고 간격에 위치, 얼음 0,9 % 멸균 식염수에 보관되고있는 기증자의 대동맥 이식을 가져가라. </li><li> 8-0 prolene 봉합사를 (Ethicon, Norderstedt, 독일)를 사용하여 실행 봉합을 수행하는받는 사람 대동맥에 기증자의 대동맥을 연결합니다. 두개골 엔드 - 투 - 엔드 문합와 함께 시작합니다. </li><li> 말초 엔드 - 투 - 엔드 문합가 완료되면 조심스럽게 말초 클램프를 엽니다. </li><li> 아무 출혈은 말초 클램프를 열 후가없는 경우, 신중하게 두개골 겸자를 엽니다. 봉합에서 출혈의 경우에는, 다시 클램프를 닫습니다 출혈을 찾아 하나의 바늘을 사용하여 출혈을 중지합니다. </li><li> 대동맥의 말초 끝에 보이는 펄스가 있어야합니다. </li><li> 다음 복부에 다시​​ 장내를 이동합니다. </li><li> prewarmed 무균 식염수에 복부를 플러쉬. </li><li> 6-0 prolene 실행 봉합 (Ethicon, Norderstedt, 독일)를 사용하여 복벽의 근육 레이어를 닫습니다. </li><li> 피부를 닫습니다 봉합을 실행 5-0 prolene을 (Ethicon, Norderstedt, 독일)를 사용합니다. </li><li> 쥐가 마취 여전히 있지만, subcutaneously Carprofen을 4-5mg/kg 주입. </li><li> 절차의이 유형에 대한 충분한 진통제를 제공하기 위해 metamizol 3 일 게시물 이식을위한 진통제에 대한 식수 (100ml 당 50mg Metamizol)에 추가됩니다. </li></ol>

<ol><li>Deuse, T., Hoyt, G., Koyanagi, T., Robbins, R. C., Schrepfer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+and+Inhibition+But+Not+Reversion+of+Chronic+Allograft+Vasculopathy+by+FK778%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Prevention and Inhibition But Not Reversion of Chronic Allograft Vasculopathy by FK778.</a> Transplantation. 85, 870-877 (2008).</li>
<li>Mennander, A., Tiisala, S., Halttunen, J., Yilmaz, S., Paavonen, T., Hayry, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection+in+rat+allografts.+An+experimental+model+for+transplant+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection in rat allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 11, 671-680 (1991).</li>
<li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 57, 225-225 (1969).</li>
<li>Poston, R. S., Billingham, M., Hoyt, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+reverses+chronic+graft+vascular+disease+in+a+novel+cardiac+allograft+model%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Rapamycin reverses chronic graft vascular disease in a novel cardiac allograft model.</a> Circulation. 100, 67-100 (1999).</li>
<li>Schrepfer, S., Deuse, T., Koch-Nolte, F., Krieger, T., Haddad, M., Schäfer, H., Pelletier, M. P., Robbins, R. C., Reichenspurner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FK778+in+Experimental+Xenotransplantation%3A+A+Detailed+Analysis+of+Drug+Efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">FK778 in Experimental Xenotransplantation: A Detailed Analysis of Drug Efficacy.</a> J Heart Lung Transplant. 26, 70-77 (2007).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

여러 가지 이유로 우리는 orthotopic 대동맥 이식 모델에게 heterotopic 심장 이식 모델에 비해 TVP의 발전을 조사하는 더 정확한 방법을 발견 : heterotopic 심장 이식 모델은 외과 의사의 능력을 좀 더 복잡하고 오류가 발생하기 쉬운 도전적일 수있는 반면, 수술 기법에 대해서, 대동맥 이식 모델은 엔드 - 투 - 엔드 - 문합의 단독 달성을 필요로하는, 쉽게 가능한 방법을 구체화 두 주요 혈관에 대한 엔드 - 투 - 사이드 문합을 필요로하는. histological 표본의 분석 및 측정 크게 이식 vasculopathy 대신 목표를 확보에서 탐정을 핸디캡 수있는 크기와 헌법에 거대한 다양성을 보여주는 다수의 작은 심장 혈관의 탐험의 단독 정의된 직경 하나의 용기에 심사 수 있기 때문에 용이 있으며 신뢰할 수있는 결과입니다. heterotopic 심장 이식 모델에서 좋은 interindividual 다양성을 기본 페리 또는 심근 혈관을 비교...

<table><tbody><tr><td>수술용 현미경 (배율 25x)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>셰이버</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>포비돈-요오드</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>빙냉 0.9% 식염수</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>예열된 0.9% 멸균 식염수</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>안연고</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>장갑</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>미세수술용 가위</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>포셉</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>클램프</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>8-0 봉합사 (prolene)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>6-0 봉합사 (prolene)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5-0 봉합사 (prolene)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metamizol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>면봉</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

orthotopic 대동맥 이식 : 만성 vasculopathy의 개발 연구에 생쥐 모델

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

만성 거부 연구 모델은 이식 vasculopathy (TVP)의 개발 기간 동안 pathobiological 및 pathophysiological 프로세스를 조사하기 위해 필수적입니다. 심장 혈관 만성 거부 연구에 대한 일반적으로 사용되는 동물 모델은 실험실 설치류에서 수행한 heterotopic 심장 이식 모델입니다. 오노와 린지 (3) 자신의 기술을 출판 이후이 모델은 실험에 널리 사용됩니다. 혈관의 연구 결과를 분석하기 위해 심장은 sectioned되어야 모든 선박 측정해야합니다. 심혈관 questionings에서 만성 거부를 조사하기 위해 또 다른 방법은 대동맥 이식 모델 (1, 2)입니다. orthotopic 대동맥 이식 모델에서 대동맥 쉽게 histologically (2) 평가하실 수 있습니다. 급성 혈관 거절 우리가 임상 설정에서 찾을 것과 유사한 CAV의 개발을 방지하지 않는 주요 혼란함을 주죠 요인과 시클 로스 포린 A (CSA) 치료 (4 아니므로 PVG - 투 - ACI 모델, CAV 연구에 특히 유용합니다 ). CSA의 A7 일 기간은 급성 거부를 방지하고 TVP​​의 개발과 함께 장기적인 생존을 달성하기 위해이 모델이 필요합니다. 이 모델은 또한 xenogeneic 모델 (5)에서 급성 세포 거부와 미디어 괴사를 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

이 동영상은 쥐에 이식 vasculopathy (TVP)의 개발을 연구하기위한 간단한 모델로 orthotopic 대동맥 이식 모델을 보여줍니다.

Orthotopic 대동맥 이식 : 만성 Vasculopathy의 개발 연구에 생쥐 모델

만성 거부반응의 연구 모델은 이식물 발달 과정 중의 병리생물학적 및 병태생리학적 과정을 조사하는 데 필수적입니다...

이 절차의 전반적인 목표는 이식 혈관병증의 발달을 조사하기 위해 정확한 모델과 쉽게 실행 가능한 방법을 구축하는 것입니다. 이는 PVG와 CI 계통의 조합을 사용하여 달성됩니다. 이 절차의 두 번째 단계는 공여자의 대동맥을 채취하는 것입니다.절차의 세 번째 단계는 수혜물을 준비하는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 공여자의 대동맥과 수혜자의 대동맥을 문합하는 것입니다. 최종적으로, 병리 조직학을 통해 신내막 형성을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.안녕하세요, 저는 독일 함부르크 대학교 심장 센터(University Heart Center)의 T S Eye Lab에서 이식 면역학 교수로 재직 중인 Sonya Schwefel입니다. 그리고 저는 같은 T S Eye Lab의 Manish Duboff입니다.저희 연구실은 이식 면역학에 관심을 두고 있습니다. 이 영상에서는 쥐(Wes)에서 이식 혈관병증의 발달을 연구하기 위한 쉽고 유효한 모델인 정위 대동맥 이식 모델을 소개하겠습니다. 저희 연구실에서는 심혈관 이식의 만성 거부 반응을 조사하기 위해 이 절차를 사용합니다.동소성 대동맥 이식 모델에서는 대동맥을 조직학적으로 쉽게 평가할 수 있습니다. 또한, CI 모델로의 PVG 이식은 이식 혈관병증 연구에 특히 유용합니다. 급성 혈관 거부 반응이 주요 혼란 변수가 아니며, 혈관병증의 발생 양상이 임상 결과와 유사하기 때문입니다.그럼 시작하겠습니다. 이번 정위(ORTHOTOPIC) 대동맥 이식에 사용되는 공여체는 무게가 약 250에서 300g인 PVG 랫입니다. 동물을 마취시킨 후 복부와 흉부의 털을 제거하십시오.쥐를 등 쪽으로 눕히고 코와 입 부분에 페이스 마스크를 씌웁니다. 마취 상태를 유지하면서, Provo 아이오딘을 사용하여 복부와 흉부 영역을 넓게 소독한 후 80% ethanol로 다시 소독합니다. 그다음, 쥐의 뒷발을 꼬집어 동물의 반사 반응을 확인합니다.충분히 마취되었는지 확인합니다. 복부를 절개하고 복부 대동맥에 구멍을 내어 쥐의 혈액을 제거합니다. 흉강을 조심스럽게 열어 하행 흉부 대동맥을 찾습니다.지방, 신경 및 식도와 같은 주변 조직으로부터 흉대동맥을 박리합니다. 대동맥 조직에 손상이 없도록 acuta를 사용하여 1.5 centimeter 길이의 대동맥 조각을 채취합니다. 대동맥 이식편을 차가운 식염수로 충분히 세척한 후, 4 °C에서 보관합니다.본 정위 대동맥 이식의 수혜 동물은 체중 약 250~300g의 A CI 쥐입니다. 이 절차를 시작하려면 마취된 쥐의 복부 부위를 제모하고, 마취 중에 눈이 건조해지는 것을 방지하기 위해 안연고를 도포합니다. 쥐를 등 쪽이 바닥에 닿게 눕히고 코와 입 위에 페이스 마스크를 씌워 마취 상태를 유지합니다.다음으로, 포비돈 아이오딘을 사용하여 복부 영역을 소독한 후 80% ethanol로 다시 소독합니다. 뒷발을 집어 쥐어 쥐가 충분히 마취되었는지 확인한 다음, 복부 정중선 절개를 수행하고 피부와 근육을 분리하여 복부를 엽니다. 두 단계입니다.복부를 절개한 후, 장을 식염수가 담긴 장갑 안에 넣습니다. 수분 손실을 방지하기 위해 장갑을 장 주변으로 감쌉니다. 복부 대동맥을 덮고 있는 지방 조직을 제거합니다.신장 하부 영역부터 분지점까지 대동맥을 박리하되, 혈관 분지들이 손상되지 않도록 주의하십시오. 필요한 경우, 대동맥 박리 후 대동맥 분지들을 결찰하십시오. 먼저, 대동맥의 신장 하부 부위에 미세수술용 클램프를 사용하여 혈류를 차단하십시오.다음으로 대동맥 분지점 근처에 두 번째 클램프를 설치합니다. 혈류가 차단되면 대동맥의 짧은 분절을 제거합니다. 그런 다음 얼음 위 0.9% saline에 보관해 둔 공여 대동맥 이식편을 준비합니다.적절한 길이로 자른 후 대동맥의 결손 부위에 위치시킵니다. 두경측 단단 문합부터 시작하여 8-0 prolene 봉합사로 연속 봉합함으로써 공여 대동맥과 수혜 대동맥을 연결합니다. 원위측 단단 문합이 완료되면 원위측 클램프를 조심스럽게 제거합니다.다음으로, 두개골 클램프를 조심스럽게 엽니다. 대동맥의 원위단에서 맥박이 확인되어야 합니다. 이제 장을 다시 복강 내로 옮기고, 미리 데워둔 멸균 생리식염수로 복강을 세척합니다.6-0 proline 봉합사로 연속 봉합하여 복벽의 근육층을 닫습니다. 그 후 쥐가 여전히 마취 상태일 때 5-0 proline 봉합사를 사용하여 피부를 연속 봉합합니다. carprofen 4~5 mg/kg을 피하 주사합니다.동물을 케이지로 돌려보냅니다. 통증 완화를 위해 3일 동안 음용수에 메티마졸(methimazole)을 첨가합니다. 이식 후 단계입니다.120일 후의 조직병리 결과는 조직 현미경을 통해 보여드릴 것입니다. 사진을 통해 이식 혈관병증의 진행 과정을 명확하게 확인할 수 있습니다. 발생한 내강 협착 부위는 컴퓨터 애니메이션으로 강조하여 표시됩니다.지금까지 쥐를 이용한 자가 부위 대동맥 이식 수행 방법을 살펴보았습니다. 또한 조직 병리 검사를 통해 120일 후 이식 혈관병증이 성공적으로 유발되었음을 입증하였습니다. 이 방법은 만성 동종이식 혈관병증에 대한 약물의 초기 효과를 연구하는 데 유용합니다.

orthotopic-aortic-transplantation-rat-model-to-study-development

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 마우스의 복부 대동맥의 한 부분이 단지 allogeneic 또는 syngeneic받는 사람의 신장 동맥 아래에 orthotopically 이식되는 기술을 설명합니다. 이 기술은 균일 한 크기의 큰 동맥의 이식이 유리한 것으로 간주되는 연구에 유용 할 수 있습니다.

혈관 질병의 연구에 대한 마우스의 Orthotopic 대동맥 이식

우리는 마우스의 대동맥 삽입 이식을 위한 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜의 목표는 동맥의 동종면역 반응 및 그에 따른 장기 이식 실패에 기여하는 동맥 변화와 관련된 병리학적 과정 및 치료 전략을 연구할 수 있는 모델을 제공하는 것입니다.

동종 유도 혈관 거부 및 이식 동맥 경화 마우스 모델

루멘 대동맥 및 대동맥의 봉합 결 찰에 폴리우레탄 카 테 터 삽입 adventitial 바사 vasorum hypoperfusion 인해 만성 저 산소 증 유발. 이 문서에서는 AAA의 인 간에 있는 유사한 특성을 가진 복 부 대동맥 동맥 류 (AAA)의 소설 동물 모델을 설명합니다.

Adventitial 바사 Vasorum 관류를 차단 하 여 복 부 대동맥 동맥 류의 설치류 모델의 생성

여기서, 우리는 자궁 경부 뮤린 모델에서 비 봉합술 커프 기술을 사용하여 마우스에서 이종성 대동맥 이식의 프로토콜을 제시한다. 이 모형은 만성 동종 이식 혈관병증 (CAV)의 근본적인 병리를 공부하기 위하여 이용될 수 있고 그것의 대형을 방지하기 위하여 새로운 치료에이전트를 평가하는 것을 도울 수 있습니다.

수정된 비봉합사 커프 기술을 사용한 뮤린 자궁 경부 대동맥 이식 모델

우리는 쥐에 있는 이종 성 복부 심혼 이식의 모형을 기술합니다, 현재 전략의 수정을 암시하는, 이는 단순화한 외과 접근으로 이끌어 내는. 추가적으로, 우리는 쥐에 있는 추가 이식 면역학 분석을 허용하는 중요한 심장 근육 세포의 귀 주입에 의하여 새로운 거부 모델을 기술합니다.

쥐에 있는 이종 심혼 및 심장 근육 세포 이식을 위한 면역학 모형

이 논문은 쥐에 있는 부분이성 골균 플랩 이식 프로토콜 및 중간 후속에 있는 그것의 잠재적인 결과를 제시합니다.

쥐의 부분 이종화 힌드래그 이식 모델

이 프로토콜은 심장 판막의 동종 활성에 대한 연구를 허용하기 위해 신장 캡슐 아래에 대동맥 판막 전단지를 이식하는 간단하고 효율적인 방법을 설명합니다.

설치류의 이종 주제 심장 판막 이식을위한 단순화 된 모델

우리는 로스 절차를 시뮬레이션하기 위해 내림차순 대동맥에 폐 뿌리 이식의 뮤린 모델을 설정하는 방법을 보여줍니다. 이 모델은 전신 위치에서 폐 자동 이식 리모델링의 중장기 평가를 가능하게 하며, 이는 적응을 촉진하기 위한 치료 전략 개발의 기초를 나타냅니다.

로스 수술의 설치류 모델: 전신 위치에 있는 합성 폐 동맥 이식 이식

쥐 동위원소 신장 이식 모델은 신장 동종이식편 거부의 메카니즘을 조사하는 데 기여한다. 현재의 모델은 신장 이식의 종단 간 해부학과 요관 방광 문합술의 종단 간 "터널"방법을 사용하여 혈액 공급 및 정맥 역류에 간섭하지 않고 수혜자의 생존을 증가시킵니다.

신장 동종이식편 거부반응을 위한 쥐 동위원소 신장 이식 모델

이 연구는 초보자가 배우고 수행할 수 있는 쥐의 재현 가능한 이종 복부 심장 이식 기술을 보여줍니다. 또한, 쥐의 새로운 대동맥 역류 모델은 이종 복부 심장 이식을 수행하고 수확 후 가이드와이어를 사용하여 기증자의 대동맥 판막을 손상시킴으로써 생성됩니다.

쥐의 수정된 이종 복부 심장 이식 및 새로운 대동맥 역류 모델

이 연구는 중증 대동맥 협착증 또는 저형성 좌심 증후군과 같은 선천성 심장 결함에서 볼 수 있는 내피에서 중간엽으로의 전이 유도 섬유증의 동물 모델을 제시하여 상세한 조직학적 조직 평가, 조절 신호 경로 식별 및 치료 옵션 테스트를 가능하게 합니다.

내피에서 중간엽으로의 전환 연구를 위한 신생아 이종성 쥐 심장 이식 모델

배우세요 정위 대동맥 이식법으로 생쥐에서 만성 이식 혈관병증을 연구하는 방법을. PVG에서 CI 계통을 사용하여 신내막 형성을 조직학적으로 분석하고 이식 거부 반응의 기전을 규명합니다.

Orthotopic 대동맥 이식 : 만성 Vasculopathy의 개발 연구에 생쥐 모델

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