Orthotopic 대동맥 이식 : 만성 Vasculopathy의 개발 연구에 생쥐 모델

이 절차의 전반적인 목표는 이식 혈관병증의 진행을 조사하기 위한 정확한 모델과 쉽게 실현 가능한 방법을 확립하는 것입니다. 이는 PVG를 CI 균주 조합에 사용하여 수행됩니다. 절차의 두 번째 단계는 공여자 대동맥을 적출하는 것입니다.

절차의 세 번째 단계는 수혜자를 준비하는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 기증자의 대동맥을 수혜자의 대동맥으로 문합하는 것입니다. 궁극적으로 병리 조직학을 사용하여 신인막 형성을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.

안녕하세요, 저는 독일 함부르크에 있는 대학 심장 센터의 Thet Eye Lab의 이식 면역학 교수인 Sonya Schwefel입니다. 그리고 저는 매니시 듀보프입니다. 또한 TS Eye Lab에서.

제 연구실은 이식 면역학에 관심이 있습니다. 이 비디오에서는 Wes에서 이식 혈관병증의 발달을 연구하기 위한 쉽고 유효한 모델인 Orthotopic 대동맥 이식 모델을 소개합니다. 우리는 심혈관 검사에서 만성 거부 반응을 조사하기 위해 실험실에서 이 절차를 사용합니다.

정소성 대동맥 이식 모델에서는 대동맥을 조직학적으로 쉽게 평가할 수 있습니다. 또한 PVG에서 CI 모델은 이식 혈관병증 연구에 특히 유용합니다. 급성 혈관 거부 반응은 주요 교란 요인이 아니며 혈관 병증의 발병은 임상에서 발견 한 것과 유사하기 때문입니다.

시작하겠습니다. 이 정소성 대동맥 이식에 사용된 기증자는 체중이 약 250-300g인 PVG 랫트입니다. 동물을 마취한 후 복부와 흉부 털을 면도합니다.

쥐를 등에 눕히고 코와 입에 안면 마스크를 씌웁니다. 마취를 유지하려면 Provo 요오드를 사용하여 복부와 흉부 부위를 널리 소독한 다음 80%에탄올을 소독하십시오. 다음으로, 뒷발을 꼬집어 동물의 반사 신경을 확인하십시오.

충분히 마취되었는지 확인합니다. 복부를 열고 복부 대동맥에 구멍을 뚫어 쥐를 수혈합니다. 하강하는 흉부 대동맥을 찾기 위해 흉부를 조심스럽게 엽니다.

흉부 대동맥을 지방 신경 및 식도와 같은 주변 조직에서 해부합니다. 대동맥의 조직 손상 없이 아쿠타를 사용하여 대동맥의 1.5cm 조각을 빼냅니다. 대동맥 이식편에 차가운 식염수를 철저히 관류하고 이식편을 섭씨 4도에서 보관하십시오.

이 정소성 대동맥 이식의 수혜자는 체중이 약 250-300g인 A CI 쥐입니다. 이 절차를 시작하려면 마취된 쥐의 복부 부위를 면도하고 안연고를 바르면 마취 중에 눈이 건조해지는 것을 방지합니다. 쥐를 등에 눕히고 코와 입에 안면 마스크를 씌워 마취를 유지합니다.

다음으로, 프로보 요오드를 사용하여 복부를 소독한 다음 80%의 에탄올을 소독합니다. 뒷발을 꼬집어 쥐가 충분히 마취되었는지 확인한 후 복부 정중선 절개를 하고 피부와 근육을 분리하여 복부를 엽니다. 두 단계.

복부가 열리면 식염수 장갑에 장을 넣습니다. 수분 손실을 방지하기 위해 장 주위를 장갑으로 접습니다. 복부 대동맥을 덮고 있는 지방 조직을 제거합니다.

대동맥을 infrarenal 영역에서 분기점까지 절개하고 혈관의 가지에 손상을 주지 않도록 주의하십시오. 필요한 경우 대동맥을 절개한 후 대동맥의 가지를 접합합니다. 먼저 대동맥의 하부 부분에 미세 수술 클램프를 사용하여 혈류를 멈춥니다.

다음으로 대동맥의 분기점 가까이에 두 번째 클램프를 놓습니다. 이제 혈류가 멈췄으니 대동맥의 짧은 부분을 제거한다. 그런 다음 얼음 위에 0.9% 식염수에 보관된 기증자 대동맥 이식편을 복용합니다.

적절한 길이로 줄이고 대동맥의 틈새에 위치시킵니다. 두개골 종단 간 문합을 시작으로 8개의 제로 프롤렌 봉합사를 수행하여 기증자 대동맥을 수혜자 대동맥에 연결합니다. 원위 종단 간 문합이 끝나면 원위 클램프를 조심스럽게 엽니다.

다음으로, 두개골 클램프를 조심스럽게 엽니다. 대동맥의 원위 끝에 눈에 보이는 맥박이 있어야 합니다. 이제 장을 다시 복부로 옮기고 예열 된 멸균 식염수로 복부를 씻어냅니다.

6개의 제로 프롤린 봉합사를 사용하여 복벽의 근육층을 닫습니다. 그런 다음 쥐가 아직 마취 상태에있는 동안 피부를 봉합하기 위해 5 개의 제로 프롤린 봉합사를 사용하십시오. 카프로펜 1kg당 4-5mg을 피하로 주사합니다.

동물을 우리로 되돌립니다. 3일 동안 진통제를 복용하기 위해 식수에 메티마졸을 첨가하십시오. 이식 후.

120일 후의 조직병리학 결과는 당사의 조직학 현미경에서 입증될 것입니다. 사진은 이식 혈관병증의 발병을 명확하게 보여줄 것입니다. 개발된 내강 축소는 컴퓨터 애니메이션으로 강조될 것입니다.

우리는 방금 쥐에서 자동 주제 대동맥 이식을 수행하는 방법을 보여 드렸습니다. 우리는 또한 조직병리학을 사용하여 120일 후 이식 혈관병증의 성공적인 진행을 입증했습니다. 이 방법을 사용하면 만성 동종이식 혈관병증에 대한 약물의 초기 효과를 조사할 수 있습니다.