초파리 구애 조건화: 파리의 학습과 기억을 테스트하는 방법

-먼저, 순진하거나 짝짓기하지 않은 단일 Drosophila melanogastor 수컷을 격리합니다. 그런 다음 수컷을 조건화하기 위해 이미 짝짓기를 했기 때문에 구애를 받아들이지 않는 암컷을 추가합니다. 수컷은 암컷을 향해 방향을 잡고, 그녀를 따라다니고, 앞다리로 그녀를 두드리고, 날개를 펴고 진동시켜 구애 노래를 부르는 것과 같은 전형적인 구애 행동을 보입니다. 그는 또한 핥거나 짝짓기를 시도 할 수 있습니다. 아무리 노력해도 암컷은 받아들이지 않고 수컷은 거부를 경험합니다. 그래서 그는 이전에 짝짓기를 한 암컷에게 구애하지 않는 법을 배운다.

수컷의 기억력을 테스트하기 위해 수컷을 쉬게 한 다음 짝짓기를 한 다른 암컷에게 노출시킵니다. 훈련된 수컷은 과거에 거절당한 기억을 간직하고 있기 때문에 이 파리에게 구애하려고 시도하지 않습니다. 예시 프로토콜에서는 단기 및 장기 기억 평가를 위한 구애 조절 분석의 훈련 및 테스트 단계에서 파리가 어떻게 처리되는지 볼 것입니다.

- 4일 된 짝짓기 파일에서 모든 성체를 마취하는 것으로 시작합니다. 암수를 분리하고, 미숙한 단일 암컷을 주택 블록의 한 줄에 있는 12개의 우물 각각으로 옮깁니다. 그런 다음 마취 없이 흡인기와 흡인을 사용하여 순진한 수컷을 집 우물에서 꺼내 조산한 암컷이 있는 우물로 옮깁니다. 두 번째 행에서 이 과정을 반복하여 12쌍을 더 설정합니다.

학습 또는 단기 기억을 테스트하려면 새벽에 이 설정을 수행하고 훈련 기간을 1시간 동안 둡니다. 장기 기억력을 테스트하기 위해, 주관적인 새벽 4시간 전에 짝을 세우고 8시간 동안 훈련을 계속하십시오.

- 학습과 기억이 확립되기 위해서는 수컷이 교미에 실패하는 것이 중요하므로 훈련 기간 동안 주기적으로 쌍을 확인하여 수컷이 거부되고 있는지 확인하십시오.

훈련 기간이 끝나면 이산화탄소 마취가 아닌 흡입기를 사용하여 우물에서 수컷을 부드럽게 꺼냅니다. 수컷을 새 하우징 블록에 적재합니다. 학습 실험의 경우 휴식 시간없이 훈련 후 즉시 수컷을 테스트하십시오. 단기 기억 실험의 경우, 수컷이 테스트 단계를 시작하기 전에 한 시간 동안 휴식을 취하도록 합니다. 장기 기억 실험을 위해 다음 주관적인 새벽까지 수컷을 쉬게 합니다.

실험의 테스트 단계를 준비하기 위해 조산된 암컷을 마취하고 새로운 일반 식품 사악병으로 옮깁니다. 파리가 마취에서 회복될 때까지 최소 한 시간 동안 기다립니다. 다음으로 테스트 설정을 준비합니다. 구혼 경기장에서의 활동을 기록할 수 있도록 비디오 레코더를 준비하십시오.

테스트를 시작하려면 부드러운 흡인을 사용하여 테스트 남성을 하우징 블록에서 칸막이를 닫은 구애 경기장으로 옮깁니다. 18개의 경기장이 모두 독신 남성으로 채워질 때까지 경기장 사이의 입구 구멍을 이동합니다. 그런 다음 동일한 기술을 사용하여 개별 미숙 암컷을 18 개의 경기장 각각으로 이동하지만 칸막이의 반대쪽으로 옮깁니다. 이제 구애 경기장을 조심스럽게 뒤집고 우물 구멍이 흰색 벤치 표면을 향해 아래로 내려가도록 비디오 카메라 아래에 놓습니다. 그런 다음 칸막이를 제거하고 비디오 녹화를 시작합니다. 최소 10분의 활동을 기록하십시오. 실험이 끝나면 진공 청소기를 사용하여 경기장에서 파리를 제거하고 구혼실을 재사용하기 전에 최소 10분 동안 구애실을 환기시킵니다.