제브라피시 심전도(ECG): 심장 기능을 평가하기 위한 최소 침습 분석

- 시작하려면 마취된 물고기 복부 쪽을 젖은 스펀지의 슬릿에 놓습니다. 양극을 구근 동맥 수준에서 물고기의 정중선에 삽입합니다. 다음으로, 심실 아래에 음극을 삽입하고 정중선 왼쪽으로 0.5-1mm 떨어진 곳에 삽입하여 전위의 차이를 측정할 수 있는 양극 리드를 만듭니다. 마지막으로 항문 부위 근처에 참조 전극을 삽입하여 전기 신호를 접지합니다.

기록을 시작하고 잠시 후 추적을 검토하여 네 가지 조건이 충족되는지 확인합니다. 모든 파형은 볼 수 있어야 하고 서로 구별되어야 합니다. 심방 탈분극을 나타내는 P파는 양수여야 합니다. 심실 탈분극을 나타내는 Q, R, S파의 순합은 양수여야 합니다. 마지막으로, 심방 재분극을 나타내는 T파는 양수여야 합니다. 기준이 충족되지 않으면 적절한 트레이스가 기록될 때까지 전극을 조정하십시오.

녹음 후 아가미나 물고기가 규칙적으로 움직이기 시작할 때까지 산소가 함유된 물에 물고기를 담그고 아가미 위로 물을 뿌려 물고기를 깨웁니다. 이 예에서는 성인 제브라피쉬에 대해 표면 심전도를 수행합니다.

- 실험 당일, 수족관에서 제브라피시를 실험실로 운반하세요. 생체 내 ECG 기록 시스템을 설정하려면 필수 장비를 연결하고 ECG 리드의 3가지 색상으로 구분된 스테인리스 스틸 전극을 ampliifier의 3가지 색상이 일치하는 액세스 포털. 레벨 4 마취를 유도하기 위해, 성인 제브라피시를 기관 동물 관리 및 사용 위원회(Institutional Animal Care and Use Committee)에서 승인한 가장 낮은 사전 결정 농도의 마취제 용액이 들어 있는 접시에 담그십시오.

제브라피쉬가 3초 동안 마취 수준을 유지하면 한 쌍의 뭉툭한 집게를 사용하여 3개의 ECG 전극을 배치하기 위해 슬릿 복부 표면이 위로 향하게 한 젖은 스펀지로 물고기를 즉시 옮깁니다. 수술실의 두 아래쪽 가장자리를 연결하는 가상의 선에서 1-2mm 위의 구근 동맥 수준에서 복부 정중선에 양극을 부드럽게 삽입합니다.

음극을 꼬리 방향으로 놓고 성체 제브라피시 심실의 최대 정점-기저 길이보다 큰 거리에서 양극에 측면으로 0.5-1mm 왼쪽에 배치합니다. 그런 다음 기준 전극을 항문 부위 근처에 꼬리 방향으로 배치합니다. ECG 기록을 위해 시스템을 시작하고 ECG 데이터 수집 프로그램을 엽니다. 드롭다운 메뉴에서 Range(범위), Low Pass(저역 통과) 및 High Pass(고역 통과)에 대한 원하는 설정을 선택합니다.

시작을 눌러 1킬로헤르츠의 샘플링 속도에서 연속적인 갭 없는 ECG 기록을 시작합니다. 최대 신호 대 잡음비를 위해 리드 위치를 최적화하려면 중지를 눌러 녹음을 중지하고 각 심장에 대한 첫 번째 녹음 시도 직후 추적을 검토하십시오. 심전도가 정상일 것으로 예상되는 경우, 모든 심전도 파형이 뚜렷하고 쉽게 볼 수 있는지, P파, 순 QRS 복합파 및 T파가 모두 양수인지 확인합니다.

- 가장 중요한 단일 단계는 신호 대 잡음비를 최대화하기 위한 리드 포지셔닝입니다. 올바른 피드백을 얻기 위해 각 물고기에 대해 첫 번째 ECG 기록 시도 후 네 가지 검증 기준을 모두 적용하십시오.

- 정상 ECG가 예상되는 경우 이 네 가지 검증 기준이 모두 충족될 때까지 필요에 따라 전극을 재배치합니다. 정상적인 T파가 예상되지만 T파가 너무 작으면 전극을 재배치하여 T파 진폭을 최대화합니다. 리드 포지셔닝을 최적화한 후 ECG 기록을 재개하고 후속 분석을 위해 ECG 스윕을 저장합니다.

ECG 기록 세션이 끝나면 물고기를 다치게 하지 않고 전극을 조심스럽게 제거하십시오. 생존 연구에서는 물고기를 트리카인이 없는 산소가 공급된 신선한 생선 물로 옮깁니다. 이 비디오에서는 독자들이 마취에서 회복된 물고기를 쉽게 볼 수 있도록 산소 공급이 중단되었습니다.

생존 연구에서 마취 후 회복을 용이하게 하려면 파스퇴르 피펫을 사용하여 물고기가 규칙적인 아가미 움직임이나 수영을 재개할 때까지 아가미에 물을 세게 분출합니다. 그런 다음 물고기를 수족관으로 되돌리기 전에 마취에서 완전히 회복되었는지 물고기를 모니터링합니다. 물고기는 최소 5초 동안 똑바로 서서 수영할 수 있을 때 마취에서 완전히 회복된 것으로 간주됩니다.