초파리 유충 상상 디스크 해부: 상피 발달을 관찰하는 방법

0 조회수3:12 • April 30th, 2023

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- 해부를 시작하려면 한 쌍의 집게를 사용하여 가운데에 있는 유충 시체를 잡고 두 번째 쌍을 사용하여 유충을 반으로 찢습니다. 그런 다음 몸체를 뒤쪽으로 잡고 앞쪽 끝에서 입 고리를 꼬집습니다. 그런 다음 입을 잡고 있는 집게를 몸 안쪽으로 밀어 넣습니다. 후방 겸자를 사용하여 신체 벽을 뒤집어 접습니다.

이 준비에서 침샘과 장을 쉽게 식별하고 제거하여 뇌와 상상 디스크를 드러낼 수 있습니다. 더듬이, 눈, 다리, 날개 및 고삐 디스크를 볼 수 있습니다. 고정되면 디스크를 추가로 해부할 수 있는 장착 매체가 있는 슬라이드로 유충 제제를 옮깁니다. 예제 프로토콜에서는 이 유충 제제를 사용하여 날개 상상 디스크를 해부하는 방법을 볼 것입니다.

- 시작하려면 나무 막대기나 뭉툭한 집게를 사용하여 떠도는 세 번째 인스타 유충을 PBS가 있는 페트리 접시로 옮깁니다. 그런 다음 형광등 아래에서 유전형 분석을 하여 모자이크 유충에 적합한 형광 마커를 식별합니다. 계속하기 전에 PBS로 유충을 씻으십시오. 그런 다음 해부 현미경으로 두 쌍의 집게를 사용하여 유충의 중심을 꼬집고 몸을 반으로 찢습니다. 다음으로 입 고리를 꼬집으면서 입을 몸 쪽으로 밀어 몸을 뒤집습니다. 그런 다음 침샘과 지방체와 같은 불필요한 물질을 제거하십시오. 유충은 이제 고정 및 항체 염색을 위해 준비되었으며, 이는 텍스트 프로토콜에 자세히 설명되어 있습니다.

2ml 플라스틱 전사 피펫을 사용하여 염색된 조직 제제를 현미경 슬라이드로 옮깁니다. 그런 다음 집게를 사용하여 개별 유충을 현미경 슬라이드의 장착 매체 방울로 이동합니다. 이제 집게를 사용하여 상상의 디스크를 분리합니다. 절개된 조직의 끝을 잡고 다른 집게로 뇌와 눈 더듬이 디스크를 잡아당기는 것으로 시작합니다. 뇌를 사용할 수 있도록 준비하십시오.

이제 날개 가상 디스크를 찾습니다. 날개 상상 디스크는 절개 된 조직의 측면에 붙어 있습니다. 그런 다음 한 집게로 조직을 고정하고 날개 디스크를 부드럽게 긁어냅니다. 그런 다음 뇌를 날개 디스크 근처에 배치하여 커버슬립에 의해 부서지지 않도록 보호하십시오. 이제 커버 슬립으로 구조물을 부드럽게 덮고 매니큐어로 커버 슬립을 밀봉하십시오. 슬라이드는 섭씨 4도에서 보관하십시오.

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