0 조회수 • 4:21 분 • April 30th, 2023
- 섬 분석은 비눗물이 담긴 트레이에 있는 융기된 흰색 플랫폼으로 구성되며, 한쪽 면이 열린 투명 상자로 덮여 있습니다. 상자 위에 있는 카메라는 플랫폼의 오버헤드 이미지를 기록하고 해당 지역의 균일한 조명을 보장하기 위해 조명을 배치합니다.
투기장에 파리를 싣고 가려면 유리병을 평평한 표면에 두드려 모든 파리를 바닥으로 가져옵니다. 빠르게 연속적으로 바이알 플러그를 제거하고 바이알을 뒤집은 다음 바이알의 열린 끝을 플랫폼에 두드려 모든 파리를 동시에 쓰러뜨립니다. 플랫폼에 착륙하면 탈출 응답이 트리거됩니다. 일반적인 이동성을 가진 파리는 운동 결함이 있는 파리와 달리 몇 초 안에 플랫폼을 청소할 수 있습니다.
피험자들은 상자 안에 갇혀 있으며, 비눗물에 닿은 피험자들은 비누가 물의 표면 장력을 감소시키기 때문에 빠르게 가라앉는다. 다양한 조건에서 운동 행동을 평가하려면 설정된 시간 후에 플랫폼에 남아 있는 파리의 수를 세십시오.
이 예시 프로토콜에서는 반자동 이미지 분석과 호환되는 아일랜드 분석의 설정을 볼 수 있습니다.
- 먼저, 실험 조건당 최소 3개의 바이알을 생물학적 복제물로 준비합니다. 각 바이알에는 같은 성별과 비슷한 나이의 파리가 약 15마리 들어 있어야 합니다. 중요한 것은 파리의 날개가 손상되지 않은 것이어야 한다는 것입니다.
실험을 저장할 폴더를 만듭니다. conditions 및 replicates에 의해 정의된 디렉토리 구조에서 이를 생성합니다. 예를 들어, 실험에 각각 5개의 반복실험이 있는 두 개의 유전자형이 있는 경우 실험 날짜가 포함된 기본 폴더를 만들고 해당 폴더 안에 각 유전자형에 대해 하나의 하위 폴더를 만듭니다. 그런 다음 유전자형 폴더 내에서 각 복제에 대한 하위 폴더를 만듭니다.
다음으로 테스트 장치를 설정합니다. 목욕 트레이에 소량의 비누를 푼 찬물을 넣고 욕조에 이미 고정되지 않은 경우 플랫폼을 욕조 중앙에 놓습니다. 트레이와 플랫폼을 투명 상자로 덮습니다.
플랫폼을 비추려면 일반 12볼트 LED와 같은 시원한 램프를 그 위에 배치하십시오. 또한 컴퓨터에 연결된 웹캠을 플랫폼 바로 위에 배치합니다.
컴퓨터에서 이미지 녹화 소프트웨어를 엽니다. Menu 시스템에서 적절한 웹캠을 캡처 장치로 선택합니다. 섬에 죽은 파리를 놓아 비디오 설정을 조정합니다. 소프트웨어의 밝기, 대비 및 색상을 조정하여 죽은 파리가 흰색 배경에 검은색으로 보이도록 합니다.
그런 다음 타임랩스 동영상 설정을 조정하여 동영상을 AVI 파일로 저장합니다. 그런 다음 데이터를 저장해야 하는 디렉토리로 이동하여 영화의 이름을 정의합니다. 이러한 변경 사항을 저장합니다.
이미지 데이터를 압축하려면 Intel IYUV 코드를 선택합니다. 녹화 속도를 0.1초마다 한 프레임으로 설정하고 해당 재생 속도를 초당 10개 이미지로 조정합니다.
마지막으로 고급 설정으로 이동하여 캡처된 각 프레임에 대해 BNP 이미지 만들기를 선택합니다. 그런 다음 AVI 파일을 호스팅하기 위해 선택한 것과 동일한 디렉토리로 이동하고 확인을 누릅니다.
시작하기 전에 섬이 비어 있고 깨끗한지 확인하십시오. 그런 다음 이미지 녹화 소프트웨어의 타임랩스 이미지 인터페이스에서 녹화를 시작합니다.
파리가 들어 있는 유리병을 두세 번 두드려 모든 파리를 바닥으로 떨어뜨립니다. 그런 다음 바이알에서 플러그를 빠르게 제거하고 파리를 플랫폼에 세게 두드립니다. 그들은 모두 거의 동시에 플랫폼에 도달해야 합니다.
파리가 플랫폼을 떠날 수 있도록 최대 30초의 시간을 주십시오. 그런 다음 녹음을 중지합니다. 필요한 경우 플랫폼에 남아 있는 파리를 수동으로 제거합니다.
다음 실험을 진행하기 전에 다음 데이터 집합이 저장될 디렉터리를 다시 정의해야 합니다.