성인 초파리 뇌 장착: 컨포칼 이미징을 위한 슬라이드를 준비하는 방법

- 양전하를 띤 현미경 슬라이드에 초파리 뇌를 장착할 공간을 만들기 위해 두 개의 커버 슬립을 충분한 거리를 두고 부착합니다. 실체 현미경 아래에서 매체를 장착하는 뇌를 그 공간에 피펫으로 넣습니다. 조직의 음전하(negative charge )는 뇌가 슬라이드 표면의 양전하를 고수하는 데 도움이 됩니다.

여분의 장착 매체를 제거하여 더듬이 엽이 위를 향하도록 격자 패턴으로 슬라이드에 뇌를 정확하게 배치 한 다음 뇌를 덮기 위해 세 번째 커버 슬립을 가로질러 부착하여 두 개의 커버 슬립을 연결합니다.

공동을 채우려면 장착 매체를 한 번에 한 방울씩 구멍 가장자리에 떨어뜨리고 뇌를 방해하지 않도록 모세관 운동으로 퍼지도록 합니다.

매니큐어로 충치를 밀봉하고 얼룩진 조직의 형광을 보존하기 위해 어둠 속에서 섭씨 영하 20도에서 보관하십시오.

예시 프로토콜에서는 면역염색된 뉴런의 컨포칼 이미징을 위해 초파리 뇌를 장착할 것입니다.

- 뇌를 장착하기 위해 다리 미끄럼틀을 만드세요. 두 개의 베이스 커버를 배치하면 양전하를 띤 슬라이드에서 약 1cm 간격으로 미끄러집니다. 양전하를 띤 면이 위를 향하도록 하십시오. 그런 다음 손톱 광택제로 커버 슬립을 슬라이드에 부착하고 광택제를 완전히 건조시킨 후 계속 진행합니다.

다음으로, 실체 현미경 아래의 슬라이드를 놓고 중간 크기의 피펫 뇌를 커버 슬립 사이의 공간에 놓습니다. 뇌의 시각화를 개선하기 위해 조명을 조정해야 합니다.

다음으로, 슬라이드에서 추가 장착 매체를 흡인하고 뇌를 피하도록 주의하십시오. 그런 다음 남아 있는 여분의 장착 매체를 제거합니다. 이렇게 하면 뇌를 더 정확하게 배치할 수 있습니다. 이제 집게를 사용하여 뇌의 더듬이 엽이 위를 향하도록 격자 패턴으로 방향을 잡습니다.

그런 다음 뇌 위에 커버 슬립을 놓고 손톱 광택제를 사용하여 베이스 커버 슬립에 부착된 상단 커버 슬립의 가장자리를 밀봉합니다.

이제 중앙 캐비티에 새 장착 매체를 드롭 방향으로 로드하여 모세관 작용에 의해 매체가 커버 슬립 아래로 당겨질 수 있도록 합니다. 캐비티가 채워지면 투명한 손톱 광택제를 사용하여 완전히 밀봉하십시오.