파라핀에 성체 초파리 머리 삽입: 조직학을 위한 조직 준비

- 파라핀 포매를 위해 파리를 움직이지 못하게 하려면, 마취된 초파리를 파리 목걸이의 틈새를 통해 조심스럽게 밀어 넣어 머리가 몸의 나머지 부분에 부착된 상태에서 장치 위에 균일하게 위치하도록 합니다. 조직 고정을 위해 칼라를 Carnoy의 용액에 넣으십시오. Carnoy's는 에탄올, 클로로포름 및 아세트산으로 구성된 변성 고정제입니다.

파라핀 침투를 위해 샘플을 준비하려면 등급이 매겨진 농도의 에탄올을 통해 칼라를 이동시켜 조직을 탈수합니다. 그런 다음 칼라를 유기 용제인 메틸 벤조에이트로 옮깁니다. 다음으로, 메틸 베노조에이트와 용융된 파라핀 용액에 넣고 가열하면서 파라핀이 용융된 상태를 유지하도록 합니다. 메틸 벤조에이트를 제거하기 위해 예열된 파라핀만으로 정교한 일련의 세척 단계를 진행하십시오.

다음으로 칼라를 금형에 빠르게 넣고 녹인 파라핀을 부어 완전히 덮습니다. 파라핀이 굳으면 틀에서 블록을 제거하고 면도날을 사용하여 여분의 파라핀을 다듬습니다. 칼라를 끊고 파라핀 블록에 박힌 머리 행을 남겨 둡니다. 예제 프로토콜에서는 신경퇴행성 표현형 분석을 위해 시연된 절차를 볼 수 있습니다.

- 시작하려면 먼저 집게를 사용하여 피험자의 목을 따라 목걸이에 실을 꿰십시오. 모든 머리를 같은 방향으로 정렬하고 머리나 눈이 손상되지 않도록 합니다. 섹션에서 파리의 순서를 쉽게 식별할 수 있도록 무작위로 알려진 위치에 눈이 없는 사인 알큘리스 파리를 포함합니다. 또한, 관심 있는 파리 균주가 밝은 눈 또는 흰 눈을 가지고 있는 경우, 슬라이드를 염색하기에 충분한 색소가 존재하는지 확인하기 위해 스트립을 따라 간격을 두고 빨간 눈 파리를 실로 꿰매십시오.

하나 이상 사용되는 경우 칼라 번호와 함께 파리의 순서를 기록하십시오. 칼라가 완성되면 Carnoy의 용액에 3.5-4시간 동안 넣습니다. 일련의 에탄올, 메틸 벤조에이트 및 파라핀 세척을 수행하여 파리 조직이 포매될 수 있도록 준비합니다. 다음으로, 목걸이를 고무 얼음 트레이에 섹션당 하나씩 놓습니다.

기포를 피하고 용융된 파라핀을 칼라 위에 부드럽게 붓고 밤새 굳어지도록 합니다. 트레이에서 칼라가 들어 있는 파라핀 블록을 제거합니다. 면도날을 사용하여 칼라에서 파라핀 블록을 분리하고 칼라를 부드럽게 떼어냅니다. 몸체는 칼라에 남아 있고 머리는 파라핀 블록에 남아 있습니다.