CApillary FEeder (CAFE) 분석: 초파리의 식품 소비 및 선호도를 추적하는 방법

- Capillary Feeder 또는 CAFE 분석을 준비하기 위해 사전 조립된 실험용 바이알 상단의 피펫 팁을 통해 착색된 액체 식품으로 채워진 등급이 매겨지거나 표시된 유리 모세관을 하단부터 삽입합니다. 모세혈관이 동일한 높이에 단단히 배치되어 있고 장치와 접촉하지 않는지 확인하십시오.

각 모세혈관에서 반월판의 시작 수준을 표시합니다. 그런 다음 실험 기간 동안 바이알을 온도, 습도 및 빛이 제어되는 환경에 보관하고 필요에 따라 모세혈관을 교체합니다. CAFE 분석 중에 이동식 파리는 구속되지 않고 마이크로피펫의 하단 열린 끝에 자유롭게 접근할 수 있습니다. 파리는 주둥이를 확장하고 액체를 섭취하면서 자발적으로 먹이를 먹어 모세혈관 내부의 배지를 줄입니다.

설정된 기간 동안 음식 섭취량과 선호도를 추적하려면 시작 표시에서 적격 모세혈관에서 해당 기간이 끝날 때까지 반월판의 하강을 기록합니다. 예제 프로토콜에서는 액체로 채워진 모세관에서 증발을 줄이기 위해 어셈블리가 수정된 CAFE 분석을 볼 수 있습니다.

- 외부 개구부 중 하나를 닫고 있는 피펫 팁을 조심스럽게 제거하고 채워진 유리 모세관을 하단 끝부터 삽입합니다. 피펫 팁을 모세관 옆에 다시 놓아 모세관을 고정합니다. 테스트한 모든 식품 용액에 대해 이 단계를 반복합니다.

다음으로, 모든 바이알 내부의 모세관 끝을 뚜껑에서 3-4cm 떨어진 동일한 높이에 놓습니다. 모세관이 누출되는 것을 방지하기 위해 여과지 사이에 약간의 거리를 두십시오. 마커 펜을 사용하여 착색된 액체의 상단에 레이블을 지정합니다. 서로 다른 모세혈관을 식별할 수 있도록 스트라이프 코드를 사용하여 개별적으로 레이블을 지정합니다.

준비된 CAFE Assay를 격자 무늬 상감이 있는 플라스틱 상자에 넣습니다. 스폰지 마개를 사용하여 100시간마다 24마이크로리터의 담수를 바르면 분석 내부의 습도를 일정하게 유지할 수 있습니다. 30ml의 이중 증류 H2O로 채워진 4개의 개별 바이알을 습도 장치로 사용하고 플라스틱 상자의 CAFE 분석 옆에 놓습니다.

실험하는 동안 습도가 제어되는 환경을 만들기 위해 플라스틱 상자를 덮습니다. 실험 기간 동안 상자를 온도, 광 및 습도가 제어되는 기후 챔버의 안전한 위치로 옮깁니다. 각 24시간 간격 전에 죽은 파리를 기록하고 살아있는 파리의 수를 사용하여 다음 기간 동안 파리당 소비량을 계산합니다.

분석이 끝날 때와 모세관을 교체하기 전에 CAFE