초파리 성인 뇌 해부: 파리 신경생물학의 방법

- 완충 용액이 있는 접시에서 균일한 조명 아래에서 해부를 수행합니다. 배쪽이 위로 향하게 한 파리를 접시에 옮기고 절차 내내 준비물을 물에 담그십시오. 주둥이의 바닥을 잡고 플라이 헤드를 몸에서 부드럽게 당겨 둘을 분리합니다. 뇌는 파리의 머리 뒤쪽 또는 꼬리 쪽에 있습니다. 따라서 장기가 손상되지 않도록 절개 중에 큐티클의 앞쪽 또는 위쪽 부분을 잡으십시오.

뇌를 분리하려면 한쪽 눈의 내측 가장자리를 잡고 주둥이를 잡고 반대 방향으로 당겨 머리 낭에 구멍을 만듭니다. 큐티클을 그 눈에서 잡고 다른 쪽 눈에서 큐티클의 내측 가장자리를 잡고 머리 캡슐을 천천히 똑바로 잡아당겨 뇌를 드러냅니다. 필요한 경우 잔여 큐티클, 부착된 공기주머니 또는 기관을 계속 청소합니다. 고품질 제제는 시신경엽, 중추 뇌 및 SOG와 같은 구조를 보존합니다. 예제 프로토콜에서는 버섯 시체를 연구하는 데 사용되는 초파리 성인 뇌 해부에 대한 자세한 시연을 볼 수 있습니다.

- 해부를 준비하기 위해 마취된 관심 파리를 차가운 금속 패드나 얼음 위에 올려 놓은 페트리 접시에 놓습니다. 또는 이산화탄소를 방출하는 플라이 패드를 사용하십시오. 다음으로, 해부 접시 중앙에 소량의 PTN을 넣어 PTN 거품을 만듭니다. 그런 다음 실체 현미경 아래에서 균일한 조명 아래에서 PTN 기포로 시야를 채웁니다. 이제 파리가 배가 위로 올라오도록 조작하고 복부를 통해 PTN으로 파리를 옮깁니다. 동물을 PTN에 완전히 담그고 PTN에 잠긴 전체 해부를 수행합니다. 두 번째 집게로 주둥이를 잡고 머리를 몸에서 떼어냅니다.

- 때때로 주둥이는 제거되지만 머리는 몸에 붙어 있습니다. 이 경우 한쪽 망막의 내측 가장자리를 잡고 측면에 힘을 가하여 머리를 제거합니다.

- 복부와 흉부는 버리십시오. 이 단계에서는 PTN에 헤드를 유지하는 것이 중요합니다. 중추 뇌에서 VNC로의 연결은 이 방법을 사용하여 명확하게 분석할 수 없습니다. 다음으로, 큐티클의 중앙 구멍 가장자리에 있는 왼쪽 망막의 내측 가장자리를 잡고 집게를 서로 직접 분리하여 흰색의 끈적끈적한 기관으로 덮인 불투명한 구조인 시신경이 찢어지는 것을 방지하기 위해 천천히 잡아당깁니다. 망막이 해리됨에 따라 장력이 약간 감소합니다.

- 뇌가 찢어지는 것을 방지하기 위해서는 각 눈의 중간 가장자리를 잡고 집게를 아주 천천히 잡아당기는 것이 매우 중요합니다. 너무 빨리 움직이면 뇌 형태가 변형되거나 뇌 조직이 손상될 수 있습니다.

- 여기에서 볼 수 있듯이 각 집게로 큐티클을 잡고 반대 방향으로 매우 천천히 당깁니다. 올바르게 수행되면 큐티클이 뇌 조직에서 분리되어 뇌는 손상되지 않은 상태로 유지되어야 합니다. 이 단계에서는 매우 날카로운 집게가 필요합니다. 그런 다음 주변의 큐티클을 한 조각씩 조심스럽게 제거합니다. 완고하게 붙어있는 큐티클을 제거하면서 뇌가 부서지지 않도록 남은 VNC를 움켜쥐어 뇌를 안정시키는 데 도움이 될 수 있습니다. 마지막으로, P200 피펫을 사용하여 절개된 뇌를 고정 및 면역 염색을 위해 PTN으로 채워진 플레이트의 웰로 옮깁니다.