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생물학
0 조회수 • 3:26 분 • April 30th, 2023
- 초파리가 포도 주스를 보충한 한천이 담긴 접시에 하룻밤 동안 알을 낳도록 하고 알을 시각화하기 위해 효모로 코팅하여 파리가 짝짓기를 하고 알을 낳도록 합니다. 계란을 제거하려면 접시에 증류수를 넣고 붓으로 표면을 부드럽게 닦습니다. 그런 다음 플라스틱 부싱에 넣은 나일론 메쉬를 통해 혼합물을 부어 계란을 수집합니다. 난자를 7% 표백제를 두 번 섞어 배아에서 융모막 또는 보호 외층을 제거합니다. 이 과정을 결핵형성(dechorionation)이라고 합니다.
계란은 이제 부싱 측면에 붙어 있습니다. 물로 세 번 씻어 표백제를 제거하십시오. 마지막으로, 붓을 사용하여 부싱에서 바이알로 달걀을 옮겨 개발을 계속하거나 실험에 즉시 사용할 수 있습니다. 예시 프로토콜에서는 멸균 상태에서 초파리 난자를 수집하고 탈부착하여 정의된 미생물총(microbiota)을 가진 파리를 사육할 것입니다.
- 나일론 메쉬를 플라스틱 부싱에 넣어 계란 채취를 위해 체를 준비합니다. 다음날 같은 파리를 사용할 경우 즉시 갓 효모를 낸 포도 주스 한천 플레이트가 들어 있는 새 케이지로 옮깁니다. 이전 케이지의 포도 주스 플레이트에는 초파리 알이 들어 있습니다. 깨끗한 붓으로 죽은 파리를 제거하고 한천을 깨뜨리지 않도록 주의하세요. 한천 플레이트를 증류수로 헹구고 한천 표면에서 계란을 부드럽게 털어낸 다음 메쉬 위에 슬러리를 부어 계란을 수집합니다.
생물 안전 캐비닛을 70% 에탄올로 살균한 다음 UV 광선을 켭니다. 모든 비생물학적 공급품에 70% 에탄올을 분사하고 즉시 생물 안전 캐비닛에 넣은 다음 자외선으로 살균합니다.
- 생물 안전성 캐비닛 내에서 작업하거나 생물 안전 캐비닛에 새로운 재료를 추가 또는 제거할 때 우수한 무균 기술을 사용하는 것이 중요합니다.
- 계란이 든 부싱을 120 밀리리터 표본 컵에 옮기고 90 밀리리터의 0.6 % 차아 염소산나트륨 용액 또는 7 % 표백제를 테두리 바로 아래의 부싱에 천천히 붓습니다. 집게를 사용하여 용액에서 부싱을 주기적으로 위아래로 움직여 알을 다시 현탁시킵니다. 부싱을 90ml의 표백제로 미리 채워진 두 번째 표본 컵으로 직접 옮깁니다.
두 번째 표백제 처리가 끝나면 계란이 부싱 측면에 달라붙기 시작해야 합니다. 표백제를 버리고 멸균수로 부싱을 완전히 헹굽니다. 다시 말하지만, 씻을 때마다 집게를 사용하여 계란을 여러 번 다시 현탁시킵니다. 세 번째 세척이 끝날 때까지 대부분의 계란은 부싱 측면에 부착되어야 합니다.
멸균 붓을 사용하여 부싱 측면에서 계란을 멸균 식단으로 옮깁니다. 산소가 튜브로 들어갈 수 있도록 캡을 느슨하게 두십시오. 옮겨진 난자는 식단 표면에서 볼 수 있습니다.