0 조회수 • 2:01 분 • April 30th, 2023
- 먼저 깨끗한 해부 패드에 완충액 한 방울을 피펫으로 떨어뜨립니다. 그런 다음 말린 살아있는 유충을 물방울 위에 놓습니다. 초파리는 다른 절지동물과 마찬가지로 심장이 몸 주위의 혈림프를 펌프질하여 내부 장기를 목욕시키는 개방 순환계를 가지고 있습니다. 절지동물의 혈액과 간질액이 결합된 혈림프를 방출하려면 집게를 사용하여 유충의 반강성 바깥쪽 덮개인 표피를 엽니다.
그런 다음 사체를 버리고 해부 플레이트의 혈림 용액을 미세 원심 분리기 튜브의 냉각 완충 용액으로 옮깁니다. 마지막으로, 혈구계를 사용하여 수집된 혈림프의 세포인 혈구의 수를 계산합니다. 이 프로토콜에서는 Drosophila melanogaster 유충에서 혈림프를 수집합니다.
- 마이크로 원심분리기 튜브에 10마이크로리터의 1x PBS를 추가하고 튜브를 얼음 위에 올려 혈림프 채취를 시작합니다. 다음으로, 1x PBS 10마이크로리터 방울을 깨끗한 해부 패드에 떨어뜨립니다. 개별 유충을 선택하고 티슈 물티슈에 올려 건조시킵니다. 그런 다음 박리 패드의 PBS 액적으로 전송합니다.
겸자를 사용하여 큐티클을 부드럽게 찢어 열고 뒤집어 혈림프를 풀어낸 다음 사체를 버립니다. 피펫을 사용하여 해부 패드에서 혈림프를 수집합니다. 얼음이 든 PBS 마이크로 원심분리 튜브에 혈림프를 넣고 위아래로 피펫팅하여 혼합합니다. 10마이크로리터의 샘플을 혈구계 챔버에 넣고 농도 판독값을 측정합니다.
본 프로토콜은 Drosophila melanogaster 유충으로부터 혈림프를 수집하는 방법을 설명합니다. 이 과정에는 해부 패드, 완충액 및 혈구 계수기를 사용하여 혈구 농도를 분석하는 과정이 포함됩니다.
모델 생물에서 순환 면역 세포를 정량화하면 면역 조절 후보 물질의 기전적 리스크 제거(de-risking)가 가능해져 초기 단계의 타겟 검증을 지원할 수 있습니다. 이 방법은 생체 내(in vivo)에서 조혈 및 면역 경로 활성을 평가하기 위한 질환 관련 시스템을 제공합니다. 신뢰할 수 있는 혈구 세포 수 측정은 전임상 스크리닝 분석의 예측 신뢰도를 높여줍니다.
본 방법은 면역 세포 정량이 타겟 검증 및 리드 물질 확인 결정에 정보를 제공하는 초기 발견 워크플로우에 적합합니다.
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마지막 업데이트: 29 8월 2026